뼈 전이의 모델
Summary
동물 모델은 자주 뼈에 암 전이를 공부하는 활용하고 있습니다. 이 프로토콜에서 우리는 뼈 전이 연구에 대한 종양 접종의 일반적인 두 가지 방법을 설명하고 간략하게이 모델을 모니터링하고 정량화하기 위해 이용 분석의 일부를 설명합니다.
Abstract
뼈 metastases 유방, 전립선 및 폐 등 여러 malignancies에서 일반적으로 발생합니다. 일단 뼈 년에 설립 된, 종양이 중요한 병적 상태와 사망률 1 책임이 있습니다. 따라서, 뼈에 종양의 설립, 성장과 활동을 제어하는 분자 메커니즘을 이해하는 중요한 필요가있다. 생체 모델의 일부는이 사건을 연구하기 위해 설립 각은 특정 혜택과 제한 사항이 있습니다되었습니다. 가장 일반적으로 사용되는 모델은 직접 athymic (누드) BalbC 마우스의 동맥 혈액 공급에 종양 세포의 intracardiac 접종을 활용합니다. 이 절차는 여러 가지 종양 유형 (PC-3 전립선 암, 폐 암, 및 마우스 유방 지방 패드의 종양 포함)에 적용 할 수 있지만,이 원고에서 우리는, MDA-MB-231 유방암 모델에 초점을 맞출 것이다. 이 모델에서 우리는 원래 산 안토니오 (San Antonio) 2 박사 Mundy의 그룹에 파생 매우 뼈 선택 클론을, 활용이 H이후 GFP를 표현 transfected과 그룹 3 다시 복제되고 있습니다. 이 클론은 osteotropism의 높은 속도와 폐, 간, 또는 부신 분비에 거의 전이가있는 전이성 뼈 변형입니다. intracardiac 주사가 가장 일반적으로 특정 경우에 뼈 전이 2, 연구에 사용하고 있지만 4 intratibial 또는 유방 지방 패드 주사가 더 적합합니다. , 뼈에 체포 생존, 세포 분열 따위에 의해 번식, 암 유발 뼈 질환으로 발전 종양을 설정하는 데, 특히 암 세포의 능력을 전이 이후 단계를 모니터링의 목적으로 인간의 종양 세포를 사용하는 경우 Intracardiac 주사는 일반적으로 수행됩니다. 종양이 설립 전이성 뼈 질환에 약 상호 뼈에 metastasized 한 후 암 세포와 뼈의 관계에 초점을 경우 Intratibial 주사가 수행됩니다. 색전증 및 항목도 이러한 모델 recapitulates의 전이성 과정에서 초기 단계 이전순환에 종양 세포의. 뼈에 기본 사이트에서 차 종양의 성장이나 전이를 모니터링한다면, 유방 지방 패드의 예방 접종은 일반적으로 선호되지만, 거의 종양 세포 라인은 지속적으로, 4T1 뼈 우대 클론과 함께 주요 사이트에서 뼈 유방 마우스를 metastasize합니다 암, 예외 5,6된다.
이 원고 내용을 접종 절차 및 게시물 접종 분석의 주요 키 단계. 특히, 그것은 세포 배양, intracardiac 및 intratibial 예방 접종에 대한 종양 세포 접종 절차뿐만 아니라 X 선, 형광 및 histomorphometric 분석하여 매주 모니터링에 대한 간략한 정보가 포함되어 있습니다.
Protocol
Discussion
종양 유발 뼈 질환의 연구 가장 일반적으로 사용되는 두 intracardiac 및 intratibial 예방 접종되어있는 여러 동물 모델에 의존하고 있습니다. 대부분의 경우 intracardiac이 뼈에 전이를 공부를위한 최선의 방법입니다, 그러나, 전체 전이성 과정을 의미하지 않으며, 따라서 유방 지방 패드 나 다른 orthotopic 주사가 이상적으로 그 끝으로 사용해야합니다. 종양 세포는 인간의 세포를 사용하여 대부분의 연구?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
P01CA040035 (FE / JAS)과 VA 경력 개발 상 (JAS) : 저자는 다음과 자금 소스를 인정합니다.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| MDA-MB-231 human breast cancer cells | Originally ATCC-Internally cloned and selected | |
| DMEM | GIBCO | 11885 |
| PBS | Mediatech Inc | 21-040-CV |
| FBS | Atlas Biological | F-0050a |
| Trypsin | GIBCO | 15400 |
| Faxitron | Faxitron | |
| Maestro | CRi | |
| μCT scanner | Scanco | |
| Athymic Nude Mice | Harlan | Fox nu -/- |
| Insulin Syringes (300 μl, 28.5 g) | Becton Dickinson | 309300 |
| IVIS | Caliper | |
| Irradiated Rodent Diet | Teklad | 2920x |
References
- Sterling, J. A., Edwards, J. R., Martin, T. J., Mundy, G. R. Advances in the biology of bone metastasis: how the skeleton affects tumor behavior. Bone. 48, 6-15 (2011).
- Yoneda, T., Sasaki, A., Mundy, G. R. Osteolytic bone metastasis in breast cancer. Breast Cancer Res. Treat. 32, 73-84 (1994).
- Johnson, R. W. TGF-beta promotion of Gli2-induced expression of parathyroid hormone-related protein, an important osteolytic factor in bone metastasis, is independent of canonical Hedgehog signaling. Cancer Res. 71, 822-831 (2011).
- Li, X. Loss of TGF-beta Responsiveness in Prostate Stromal Cells Alters Chemokine Levels and Facilitates the Development of Mixed Osteoblastic/Osteolytic Bone Lesions. Mol. Cancer Res. , (2012).
- Yoneda, T. Actions of bisphosphonate on bone metastasis in animal models of breast carcinoma. Cancer. 88, 2979-2988 (2000).
- Rose, A. A. Osteoactivin promotes breast cancer metastasis to bone. Mol. Cancer Res. 5, 1001-1014 (2007).
- Sterling, J. A. The hedgehog signaling molecule Gli2 induces parathyroid hormone-related peptide expression and osteolysis in metastatic human breast cancer cells. Cancer Res. 66, 7548-7553 (2006).
- Lu, X. VCAM-1 promotes osteolytic expansion of indolent bone micrometastasis of breast cancer by engaging alpha4beta1-positive osteoclast progenitors. Cancer Cell. 20, 701-714 (2011).
- Oyajobi, B. O. Detection of myeloma in skeleton of mice by whole-body optical fluorescence imaging. Mol. Cancer Ther. 6, 1701-1708 (2007).
- Johnson, L. C. Longitudinal live animal micro-CT allows for quantitative analysis of tumor-induced bone destruction. Bone. 48, 141-151 (2011).
- Sterling, J., Johnson, R. . Imaging Techniques for the Detection and Examination of Breast Cancer Metastasis to Bone. 46, (2011).
- Steinbauer, M. GFP-transfected tumor cells are useful in examining early metastasis in vivo, but immune reaction precludes long-term tumor development studies in immunocompetent mice. Clin. Exp. Metastasis. 20, 135-141 (2003).
- Oyajobi, B. O. Dual effects of macrophage inflammatory protein-1alpha on osteolysis and tumor burden in the murine 5TGM1 model of myeloma bone disease. Blood. 102, 311-319 (2003).
