Kemik Metastaz Modelleri
Summary
Hayvan modelleri sık kemik kanseri metastazı araştırmak için kullanılmaktadır. Bu protokolü biz kemik metastazı çalışmaları için tümör inokülasyonu iki genel metot tanımlamak ve kısaca bu modeller izlemek ve ölçmek için kullanılan analizler bazı anlatacağız.
Abstract
Kemik metastazları, meme, prostat ve akciğer gibi çeşitli maligniteler, ortak bir olay vardır. Bir kez kemik yılında kurulan, tümörler önemli morbidite ve mortalite 1 sorumludur. Bu nedenle, kemik tümörlerinin oluşturulması, büyüme ve aktivitesini kontrol eden moleküler mekanizmalarının anlaşılması için önemli bir ihtiyaç vardır. Vivo modellerde birçok bu olayları incelemek üzere kurulan ve her özel yararları ve sınırlamaları vardır edilmiştir. En sık kullanılan modeli doğrudan atimik (çıplak) BalbC farelerin arteriyel kan akımı içine tümör hücrelerinin intrakardiyak inokülasyon kullanır. Bu işlem birçok farklı tümör tipleri (PC-3 prostat kanseri, akciğer kanseri ve fare meme yağ yastığı tümörleri dahil) uygulanabilir, ancak bu makalede biz, MDA-MB-231 meme kanseri modeli üzerinde durulacak. Bu modelde biz başlangıçta San Antonio 2 Dr Mundy grubu olarak elde edilen bir çok kemik seçici klon, kullanmak, hberi GFP ifade için transfekte ve bizim grup 3 ile yeniden klonlanmış gibi. Bu klon bir osteotropism oranı yüksek ve akciğer, karaciğer ya da böbrek üstü bezlerinin çok az metastazı olan bir kemik metastatik çeşididir. Intrakardiyak enjeksiyonlar en yaygın olarak, belli durumlarda kemik metastazı 2 çalışmaları için kullanılsa da 4 intratibial ya da memenin yağlı pedine enjeksiyon daha uygundur. , Kemik tutuklamak hayatta kalmak, çoğalırlar ve kanser-kaynaklı kemik hastalığı haline tümörler kurmak için, özellikle kanser hücrelerinin metastaz yeteneği daha sonraki aşamalarında izleme amacı ile, insan tümör hücrelerinde kullanıldığında kalp içi enjeksiyon tipik olarak gerçekleştirilir. Bir tümör saptandığında metastatik kemik hastalığını kabaca ilişkilidir kemik, metastas sonra kanser hücreleri ve kemik ilişkisi üzerinde duruluyor varsa Intratibial enjeksiyonlar yapılır. Emboli ve giriş için ne bu modellerin recapitulates metastatik süreci erken adım öncekidolaşıma tümör hücrelerini yok etmektedir. Kemik birincil sitesinden primer tümörün büyümesi veya metastaz izlenmesi, sonra memenin yağlı pedine aşılar genellikle tercih olmakla birlikte, çok az sayıda tümör hücre hatları sürekli, 4T1 kemik tercihli klonları ile, birincil sitesinden kemik, meme fare metastaz olur karsinom, istisna 5,6 olmak.
Bu yazının ayrıntıları aşılama işlemleri ve sonrası aşılama analizlerde golleri önemli adımlar. Özellikle, hücre kültürü, intrakardiyak ve intratibial aşılar için tümör hücre aşılama işlemleri yanı sıra, röntgen, floresans ve histomorfometrik analizleri ile haftalık izleme ile ilgili özet bilgiler içerir.
Protocol
Discussion
Tümör kaynaklı kemik hastalığı Çalışmaları en sık kullanılan iki intrakardiyak ve intratibial aşıları olmak üzere çeşitli hayvan modelleri üzerinde güveniyor. Birçok durumda, intrakardiyak kemik metastazı incelemek için en iyi seçenek olmakla birlikte, bu tam metastaz temsil etmez ve bu nedenle, memenin yağlı pedine ya da diğer enjeksiyon ortotopik ideal olarak, bu amaca yönelik kullanılmalıdır. Tümör hücreleri insan hücreleri kullanarak birçok çalışmada birincil sitesinden kolayca…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
P01CA040035 (FE / JAS) ve VA Kariyer Geliştirme Ödülü (JAS): Yazarlar aşağıdaki finansman kaynaklarından kabul.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| MDA-MB-231 human breast cancer cells | Originally ATCC-Internally cloned and selected | |
| DMEM | GIBCO | 11885 |
| PBS | Mediatech Inc | 21-040-CV |
| FBS | Atlas Biological | F-0050a |
| Trypsin | GIBCO | 15400 |
| Faxitron | Faxitron | |
| Maestro | CRi | |
| μCT scanner | Scanco | |
| Athymic Nude Mice | Harlan | Fox nu -/- |
| Insulin Syringes (300 μl, 28.5 g) | Becton Dickinson | 309300 |
| IVIS | Caliper | |
| Irradiated Rodent Diet | Teklad | 2920x |
References
- Sterling, J. A., Edwards, J. R., Martin, T. J., Mundy, G. R. Advances in the biology of bone metastasis: how the skeleton affects tumor behavior. Bone. 48, 6-15 (2011).
- Yoneda, T., Sasaki, A., Mundy, G. R. Osteolytic bone metastasis in breast cancer. Breast Cancer Res. Treat. 32, 73-84 (1994).
- Johnson, R. W. TGF-beta promotion of Gli2-induced expression of parathyroid hormone-related protein, an important osteolytic factor in bone metastasis, is independent of canonical Hedgehog signaling. Cancer Res. 71, 822-831 (2011).
- Li, X. Loss of TGF-beta Responsiveness in Prostate Stromal Cells Alters Chemokine Levels and Facilitates the Development of Mixed Osteoblastic/Osteolytic Bone Lesions. Mol. Cancer Res. , (2012).
- Yoneda, T. Actions of bisphosphonate on bone metastasis in animal models of breast carcinoma. Cancer. 88, 2979-2988 (2000).
- Rose, A. A. Osteoactivin promotes breast cancer metastasis to bone. Mol. Cancer Res. 5, 1001-1014 (2007).
- Sterling, J. A. The hedgehog signaling molecule Gli2 induces parathyroid hormone-related peptide expression and osteolysis in metastatic human breast cancer cells. Cancer Res. 66, 7548-7553 (2006).
- Lu, X. VCAM-1 promotes osteolytic expansion of indolent bone micrometastasis of breast cancer by engaging alpha4beta1-positive osteoclast progenitors. Cancer Cell. 20, 701-714 (2011).
- Oyajobi, B. O. Detection of myeloma in skeleton of mice by whole-body optical fluorescence imaging. Mol. Cancer Ther. 6, 1701-1708 (2007).
- Johnson, L. C. Longitudinal live animal micro-CT allows for quantitative analysis of tumor-induced bone destruction. Bone. 48, 141-151 (2011).
- Sterling, J., Johnson, R. . Imaging Techniques for the Detection and Examination of Breast Cancer Metastasis to Bone. 46, (2011).
- Steinbauer, M. GFP-transfected tumor cells are useful in examining early metastasis in vivo, but immune reaction precludes long-term tumor development studies in immunocompetent mice. Clin. Exp. Metastasis. 20, 135-141 (2003).
- Oyajobi, B. O. Dual effects of macrophage inflammatory protein-1alpha on osteolysis and tumor burden in the murine 5TGM1 model of myeloma bone disease. Blood. 102, 311-319 (2003).
