Résine de coulée 3-Dimensional Imaging et de la veine porte ou de la souris Système biliaires intrahépatiques
Summary
Procédé de visualisation et de quantification de la structure tridimensionnelle de 3-veine porte hépatique de la souris ou du conduit biliaire intrahépatique est décrit. Cette technique coulée de résine peut également être appliquée à d'autres systèmes canalaires ou vasculaire et permet<em> In situ</em> La visualisation ou la quantification d'un système intact de l'architecture de communication.
Abstract
D'organes, l'architecture correcte des structures vasculaires et du carcinome canalaire est indispensable pour la fonction physiologique adéquate, et la formation et le maintien de ces structures est un processus hautement régulé. L'analyse de ces complexes, 3-dimensions des structures a fortement dépendu de chaque examen en 2 dimensions dans la section ou sur des études d'injection de colorant. Ces techniques, cependant, ne sont pas en mesure de fournir une représentation complète et quantifiable des structures canalaires ou vasculaire qu'ils sont destinés à élucider. Alternativement, la nature de la 3-dimensions des moulages en résine plastique génère un instantané permanente du système et est un roman et technique largement utile pour visualiser et quantifier les 3-dimensions des structures et des réseaux.
Un des principaux avantages du système de moulage en résine est la capacité de déterminer l'état intact et connecté, ou la communication, la structure d'un vaisseau sanguin ou un conduit. La structure du duc vasculaire ettal réseaux sont essentiels pour la fonction des organes, et cette technique a le potentiel d'aider étude des réseaux vasculaires et canalaires de plusieurs façons. Coulée de résine peut être utilisée pour analyser la morphologie normale et l'architecture fonctionnelle d'une structure luminale, d'identifier les changements morphogénétiques de développement, et de découvrir les différences morphologiques dans l'architecture des tissus entre l'état normal et la maladie. Des travaux antérieurs ont utilisé une résine de coulée pour étudier, par exemple, des défauts architecturaux et fonctionnels au sein du système biliaire souris intrahépatiques qui n'étaient pas reflétés dans les 2-dimensionnelle analyse de la structure de 1,2, les modifications dans le système vasculaire du cerveau d'un modèle de la maladie d'Alzheimer souris 3 , les anomalies de la veine porte en portail souris hypertendues et cirrhotiques 4, les étapes de développement de la maturation lymphatique rat entre les poumons immatures et adultes 5, immédiats des changements microvasculaires dans le foie de rat, du pancréas et du rein en réponse à une blessure chimique6.
Nous présentons ici une méthode pour générer une résine coulée 3-dimensionnelle d'un réseau vasculaire de la souris ou canalaire, en se concentrant spécifiquement sur la veine porte et voie biliaire intra-hépatique. Ces plâtres peuvent être visualisées par compensation ou macération du tissu et peuvent ensuite être analysées. Cette technique peut être appliquée à pratiquement n'importe quel système vasculaire ou canalaire et serait directement applicable à toute étude enquête sur le développement, la fonction, l'entretien, ou d'une blessure d'une structure en 3 dimensions canalaire ou vasculaire.
Protocol
Discussion
Nous avons décrit des exemples précis de la façon dont la veine porte et systèmes des voies biliaires intra-hépatiques du foie peut être lancé, mais cette technique peut être appliquée à n'importe quel autre système canalaire ou vasculaire avec de légères adaptations. Des travaux antérieurs ont démontré la faisabilité de cette technique dans de multiples espèces, y compris la souris 1,2,7-9, caneton, lapin 10,11 12,13, chien 14, 15, et le cochon et dans de nombreux …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par des subventions du National Institutes of Health (NIH) à SSH (R01-DK078640), du Howard Hughes Medical Institute (HHMI) à travers le Programme HHMI / Vanderbilt Certificat universitaire en médecine moléculaire à TJW (GRDOT56006779), le Vanderbilt recherche sur le diabète et Training Center (P30-DK020593) et la Vanderbilt Digestive Disease Research Center (P30-DK058404) la fourniture des services de base.
Materials
| Name of reagent | Company | Catalog number | Comments |
| PE10 polyethylene tubing | Fisher Scientific | 1417012P | |
| 5-0 surgical black braided silk | Roboz Surgical | SUT-15-1 | |
| Steriject 32 G x 13 mm needle | Air-tite | TSK3213 | |
| Spring scissors | Fine Science Tools | 15000-08 | |
| Number 5 forceps | Fine Science Tools | 91150-20 | |
| Mercox II kit | Ladd Research | 21247 | |
| Benzyl alcohol | Fisher Scientific | 1816-04 | Only required for BABB-clearing |
| Benzyl benzoate | MP Biomedicals, LLC | 154839 | Only required for BABB-clearing |
| Phosphate-buffered saline (PBS) | |||
| Modeling clay | |||
| Scale | |||
| Laboratory scissors | |||
| 15 ml cap polypropylene tubes | |||
| 4% paraformaldahyde | |||
| 15% potassium hydroxide (KOH) | Only required for maceration | ||
| Razor blade | |||
| 100% methanol | |||
| 3 ml luer lock syringe |
References
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