3-Dimensional Casting resina e imaging di Vena mouse portale o sistema biliare intraepatica Duct
Summary
Un metodo di visualizzare e quantificare il 3-dimensionale struttura vena porta mouse o dotto biliare intraepatica è descritto. Questa tecnica resina può anche essere applicata ad altri sistemi duttali o vascolare e permette<em> In situ</em> Visualizzazione o la quantificazione di architettura intatta comunicare un sistema.
Abstract
Di organi, l'architettura corretta delle strutture vascolari e duttale è indispensabile per una corretta funzione fisiologica, e la formazione e il mantenimento di queste strutture è un processo altamente regolato. L'analisi di questi complessi, tre strutture tridimensionali è notevolmente dipendeva sia 2-dimensionale esame in sezione o su studi iniezione tintura. Queste tecniche, tuttavia, non sono in grado di fornire una rappresentazione completa e quantificabile delle strutture duttali o vascolari sono destinati a chiarire. In alternativa, la natura del 3-dimensionale calchi in resina plastica genera un'istantanea permanente del sistema ed è un romanzo e tecnica ampiamente utile per la visualizzazione e la quantificazione tre strutture tridimensionali e reti.
Un vantaggio fondamentale del sistema di colata di resina è la capacità di determinare la intatte e collegate, o comunicare, struttura di un vaso sanguigno o condotto. La struttura vascolare e di ducreti mentali sono essenziali per la funzione degli organi, e questa tecnica ha il potenziale per aiutare studio delle reti vascolari e duttale in diversi modi. Colata di resina può essere utilizzata per analizzare la morfologia normale e l'architettura funzionale di una struttura luminale, identificare cambiamenti morfogenetici sviluppo, e scoprire differenze morfologiche dell'architettura tessuti normali tra stati e malattie. Lavoro precedente ha utilizzato resina colata a studiare, per esempio, difetti architettoniche e funzionali nel sistema biliare intraepatica topo condotto che non si sono riflesse in 2-dimensionale analisi della struttura 1,2, alterazioni vascolare cerebrale di un modello di malattia di Alzheimer mouse 3 , anomalie della vena porta nel portale topi ipertesi e cirrotici 4, passi di sviluppo in maturazione ratto linfatico tra polmoni immaturi e adulti 5, immediati cambiamenti microvascolari nel fegato di ratto, del pancreas e del rene in risposta a al danno chimico6.
Presentiamo qui un metodo di generazione di un 3-dimensionale di resina di una rete vascolare del mouse o duttale specificamente dedicato alla vena porta e dotto biliare intraepatica. Questi calchi possono essere visualizzati tramite compensazione o macerazione del tessuto e possono quindi essere analizzati. Questa tecnica può essere applicata a qualsiasi sistema vascolare o duttale e sarebbe direttamente applicabile a qualsiasi studio indagare lo sviluppo, la funzione, la manutenzione, o lesioni di un 3-dimensionale struttura duttale o vascolare.
Protocol
Discussion
Abbiamo descritto esempi specifici di come la vena porta e intraepatiche sistemi dotti biliari del fegato può essere fusa, ma questa tecnica può essere applicata a qualsiasi altro sistema duttale o vascolare con lievi modifiche. Il lavoro precedente ha dimostrato la fattibilità di questa tecnica in più specie, tra cui mouse, 1,2,7-9 anatroccolo 10,11, 12,13 coniglio, cane 14, e maiale 15, e in molti organi, tra cui ghiandola nasale 14, cuore 16, 12,13…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato sostenuto dalle concessioni dal National Institutes of Health (NIH) a SSH (R01-DK078640), del Howard Hughes Medical Institute (HHMI) attraverso il HHMI / Vanderbilt Certificate Program University di Medicina Molecolare per TJW (GRDOT56006779), la Vanderbilt Diabetes Research and Training Center (P30-DK020593) e la Digestive Disease Research Center Vanderbilt (P30-DK058404) fornendo servizi di base.
Materials
| Name of reagent | Company | Catalog number | Comments |
| PE10 polyethylene tubing | Fisher Scientific | 1417012P | |
| 5-0 surgical black braided silk | Roboz Surgical | SUT-15-1 | |
| Steriject 32 G x 13 mm needle | Air-tite | TSK3213 | |
| Spring scissors | Fine Science Tools | 15000-08 | |
| Number 5 forceps | Fine Science Tools | 91150-20 | |
| Mercox II kit | Ladd Research | 21247 | |
| Benzyl alcohol | Fisher Scientific | 1816-04 | Only required for BABB-clearing |
| Benzyl benzoate | MP Biomedicals, LLC | 154839 | Only required for BABB-clearing |
| Phosphate-buffered saline (PBS) | |||
| Modeling clay | |||
| Scale | |||
| Laboratory scissors | |||
| 15 ml cap polypropylene tubes | |||
| 4% paraformaldahyde | |||
| 15% potassium hydroxide (KOH) | Only required for maceration | ||
| Razor blade | |||
| 100% methanol | |||
| 3 ml luer lock syringe |
References
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