카본 블랙 잉크의 혈관 재관류은 뇌 혈관의 신뢰성 시각화 수 있습니다

요약

쥐 뇌 혈관 해부학 분석 실험 뇌졸중 연구에 중요한 역할을한다. 이러한 맥락에서, 색 라텍스와 혈관 재관류는 몇 년을위한 표준 도구로 간주되었습니다. 그러나,이 기술은 재현성을 저해 별개의 기술적 한계를 의미합니다. 여기, 우리는 재현 방식으로 뇌성 혈관을 시각화 할 수있는 간단한 방법을 설명합니다. 고 대비 시각화와 뇌성 혈관의 충분한 충전의 왼쪽 심실 심근 결과를 통해이 상업적으로 이용 가능한 카본 블랙 잉크 혼합물의 주입. 우리는 성공적으로 다른 유전 적 배경을 가진 쥐 대뇌 혈관 지역 사이 anastomotic 포인트를 확인하기 위해이 기술을 적용했습니다. 쥐 경색 볼륨을 관찰하고 분석 할 수있는 널리 사용되는 도구 - 우리는 마침내 우리 선박 착색이 소설과 간단한 방법은 triphenyltetrazolium 염화 (TTC) 염색과 결합 할 수 있다는 증거를 제공합니다.

초록

대뇌 혈관의 해부학 적 구조는 뇌 혈류 역학의 주요 결정자뿐만 아니라 허혈성 모욕에 따라 부상의 심각성입니다. 대뇌 vasculature 동적으로 다양한 pathophysiological 상태에 응답하며 긴장 사이 유전자 조작 조건에 따라 상당한 차이를 전시하고 있습니다. 기본적으로 intracranial 선박 착색에 대한 신뢰할 수있는 기술은 허혈성 뇌졸중의 pathogenesis을 연구하기 위해 필수적입니다. 최근까지 다양한 기술의 집합은 낮은 점도의 수지, araldite F의 주입을 포함하여 대뇌 vasculature, 젤라틴 ² 또는 검은 색 ³ 탄소없는 다양한 염료 ¹ (즉, 카민 붉은 색, 인도 잉크) 또는 라텍스과 혼합.를 시각적으로 고용되었습니다 오름 대동맥을 통해 흰색 라텍스 화합물의 재관류가 먼저 코일과 Jokelainen ^{3보고되었습니다.} 마에다 외. ² carbo을 추가하여 프로토콜을 수정 한뇌의 생리 재관류 후 혈관의 개선 대비 시각화를위한 라텍스 화합물로 N 검은 색 잉크. 그러나, 비효율적 인 재관류와 혈관의 불충분 한 충전이 자주 라텍스 화합물 ^4의 높은 점도로 인해 발생합니다. 따라서, 우리는 재현 방식으로 ⁵ 대뇌 vasculature을 시각화 두 상업적으로 이용 가능한 카본 블랙 잉크 (CB1과 CB2)의 혼합물을 사용하여 간단하고 비용 효율적인 기술을 설명하고 있습니다. 우리는 라텍스 재관류 ⁵ 비교에서 더 높은 밀도에 훨씬 작 뇌성 선박의 얼룩에 마우스 결과에 CB1 + CB2와 그 세례를 보여 주었다. 여기, 우리는 앞 (ACA)와 다른 유전 적 배경을 가진 쥐 선박 변화를 공부하는 중 뇌동맥 (MCA) 사이 anastomotic 점을 식별하기위한 프로토콜을 설명합니다. 마지막으로, 우리는 CB1를 조합하여 마우스의 과도 초점 대뇌 국소 빈혈 모델에서의 기술의 가능성을 보여줍니다 +허혈성 부상의 다양한 각도 TTC의 착색과 CB2로 인한 선박 착색.

프로토콜

1. 동물

1. 실험은 실험실 동물의 보호 및 사용에 대한 NIH 가이드 라인에 따라 실시하고 지방 자치 단체에 의해 승인되었습니다. 모든 실험 C57Bl6 / J 야생 타입 마우스, ApolipoproteinE ^{- / -} (ApoE KO) 및 (12-16주 오래된 26~30그램의 체중, 실험 집단 당 5-6 동물) SV129 마우스가 사용되었습니다.

2. 컬러 라텍스와 뇌 혈관의 얼룩

1. EP 관 1시 20분 비율에 라텍스 화합물의 0.5 ML (Pebeo, 프랑스)와 25 μl 카본 블랙 잉크 (Herlitz, 독일)의 혼합물을 준비하고 물을 욕조에 37 ° C에서 혼합을 따뜻하게. 동물을 anaesthetizing 전에 28 30g의의 바늘로 2 ML의 주사기에 혼합를 수집합니다.
2. 멸균 정상적인 생리의 1 ML에 papavarine 염산염 분말의 50 MG를 해산. 인슐린 주사기의 솔루션을 수집합니다. 다른 멸균 인슐린 주사기에서 바늘을 중지. 20 C의 끝에이 바늘을 삽입합니다m 길이 PE10 튜브. 지금 vasodilatation과 혈관의 적절한 충전을 보장하기 위해 넙 다리 정맥을 통해 주입 할 수 papavarine 하이드로 클로라이드 솔루션을 포함....

결과

여기에 설명 된 프로토콜 쥐 대뇌 vasculature의 기존의 라텍스 기반의 시각화의 기술 한계를 극복. 그림 1A는 색 라텍스의 다음과 같은 재관류를 보여줍니다, 복부 표면에 만 대형 선박은 전체 등쪽 표면이 흠없는 떠나는, 스테인드 있습니다. 결과는 매우 변수입니다. 뇌 (데이터가 표시되지 않음)의 등 표면에 표시 ACA 및 MCA의 부분적인 착색 여섯번 쇼 하나 밖에 동물. 반대로, CB1 + 같은 방식으로 (그림 1B)에 크고 작은 두 선박의 충분한 충전의 CB2 재관류 결과이다. 착색 품질의 변화없이 칠일까지 안정적이다. ImageJ 프로그램을 사용하여, 우리는 야생 유형 C57Bl6 / J 마우스 (그림 1C)의 중간 선에서 ACA와 MCA 사이의 anastomotic 점의 거리를 정량화하고 있습니다. 우리는 여부 유전 modificati을 관찰하는 ApoE KO 마우스와 함께이 값을 비교에이 지역 혈관 해부학

토론

이 특정 압력 ^2,3을 의미 할 특정 장치를 포함하지 않으므로 수동으로 분사하여 CB1 + CB2의 재관류는 집중 훈련없이 성공적으로 수행 할 수 있습니다. 우리 프로토콜의 재관류의 결과의 이질성도 무시할 수 있습니다. 20 허혈성 동물의 아웃 만 1 16 비 허혈성 동물에서 동물과 3가 완전 재관류을 보여 왔습니다. 이러한 경우에 혈관 폐색으로 이어지는 생리 재관류 동안 거품의 설립은 실패한 결과의 이유 대부분이었다.

라텍스의 재관류는 원래 오름차순 대동맥 ^2,3 통해 수행되었습니다 있지만, 재관류의 대체 경로는 왼쪽 심실 ^7,8 또는 온목 동맥 ^구를 포함보고됩니다. 우리는 오름 대동맥이나 왼쪽 심실 (게시되지 않은 관찰) 또는을 통해 결과에 따라 재관류에 큰 차이를 찾을 수 없습니다. 따라서 후자였다그 쉬운 접근성으로 인해 선택되었습니다.

본 .......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
시약의 이름	회사 명	카탈로그 번호
Scribtol Schwarz (CB2)	펠리칸, 독일	221 135
Stempelfarbe (CB1)	Herlitz PBS AG, 독일	10417202
Gedeo 라텍스	Pebeo, 프랑스	13042B