Perfusão intravenosa de tinta Carbon Black Permite visualização dos vasos cerebrais

Summary

Análise da anatomia cerebrovascular roedor desempenha um papel importante na investigação do acidente vascular cerebral experimental. Neste contexto, a perfusão intravascular com látex corado tem sido considerada como um instrumento padrão para vários anos. No entanto, esta técnica implica limitações técnicas distintas, que minam a sua reprodutibilidade. Aqui, nós descrevemos um método simples para visualizar os vasos cerebrais, de uma forma reprodutível. A injecção de uma mistura de duas tintas pretas de carbono disponíveis comercialmente, através dos resultados do ventrículo esquerdo do miocárdio, em enchimento adequado de vasos cerebrais com visualização de alto contraste. Nós temos aplicado com sucesso esta técnica para identificar os pontos de anastomose entre territórios vasculares cerebrais de ratos com diferentes origens genéticas. Finalmente dar provas de que este método novo e simples para a coloração de navio podem ser combinados com cloreto de trifeniltetrazólio (TTC) de coloração – uma ferramenta amplamente utilizada para observar e analisar volumes do enfarte em ratos.

Abstract

A estrutura anatômica dos vasos cerebrais é um factor determinante para a hemodinâmica do cérebro, bem como a gravidade da lesão após lesões isquémicas. A vasculatura cerebral dinamicamente responde a diversos estados patofisiológicos e exibe diferenças consideráveis ​​entre estirpes e em condições de manipulações genéticas. Essencialmente, uma técnica adequada para a coloração de vasos intracranianos é essencial, a fim de estudar a patogénese da isquemia cerebral. Até recentemente, a um conjunto de diferentes técnicas tem sido utilizada para visualizar a vasculatura cerebral, incluindo a injecção de resina de baixa viscosidade, araldite F, gelatina misturada com diversos corantes ¹ (isto é, vermelho carmim, India tinta) ou de látex, com ² ou ^3, sem carbono negro. Perfusão de composto de látex branco através da aorta ascendente foi primeiramente relatada por Coyle e Jokelainen ^3. Maeda et al. ² ter modificado o protocolo, acrescentando carbon tinta preta para o composto de látex para visualização melhor contraste dos vasos após a perfusão de solução salina do cérebro. No entanto, a perfusão ineficiente e enchimento insuficiente dos vasos são frequentemente experimentado devido à alta viscosidade do composto de látex ^4. Assim, descrevemos uma técnica simples e de baixo custo, utilizando uma mistura de duas tintas de carbono disponíveis comercialmente pretas (CB1 e CB2) para visualizar o sistema vascular cerebral de um modo reprodutível ^5. Nós mostrámos que a perfusão com CB1 CB2 + em ratos resulta na coloração de vasos cerebrais significativamente menores a uma densidade mais elevada em comparação com a perfusão de látex ^5. Aqui, descrevemos nosso protocolo para identificar os pontos de anastomose entre o anterior (ACA) e artérias cerebrais médias (ACM) para estudar as variações dos vasos em ratos com diferentes origens genéticas. Finalmente, demonstrar a viabilidade da nossa técnica de um modelo de isquemia cerebral focal transiente em ratos através da combinação de CB1 +CB2 mediada por coloração com TTC vaso de coloração em vários graus de lesões isquémicas.

Protocol

1. Animais Os experimentos foram realizados de acordo com as diretrizes do NIH para o cuidado e uso de animais de laboratório e aprovado pelas autoridades locais. Para todas as experiências, C57BL6 / J ratinhos do tipo selvagem, ApolipoproteinE – / – (ApoE KO) e murganhos SV129 (12-16 semanas de idade, 26-30 g de peso corporal, 5-6 animais por grupo experimental) foram utilizados. 2. A coloração dos vasos cerebrais com látex colorido Prepara-se uma…

Representative Results

O protocolo aqui descrito supera as limitações técnicas de visualização de látex convencional com base da vasculatura cerebral roedor. Figura 1A mostra que a perfusão seguinte do látex corado, apenas os vasos grandes na superfície ventral são corados, deixando toda a superfície dorsal imaculada. O resultado é também altamente variável. Apenas um animal de cada seis mostra coloração parcial da ACA e da MCA visível na superfície dorsal do cérebro (dados não apresentados). Por outro lad…

Discussion

Perfusão de CB1 CB2 + por injecção manual pode ser realizada com sucesso por sem treino intensivo, uma vez que não envolve qualquer dispositivo específico para implicar uma certa pressão ^2,3. A heterogeneidade dos resultados de perfusão em nosso protocolo também é insignificante. Só o animal um dos 16 animais não-isquêmicas e 3 de 20 animais isquêmicos mostraram perfusão incompleto. Nesses casos, a incorporação de bolhas durante a perfusão de solução salina levando a oclusão dos vasos foi …

Materials

Name of reagent	Company Name	Catalog No.
Scribtol Schwarz (CB2)	Pelican, Germany	221 135
Stempelfarbe (CB1)	Herlitz PBS AG, Germany	10417202
Gedeo Latex	Pebeo, France	13042B