Matrix-assistierte autologe Chondrozyten-Transplantation für Umbau und Reparatur von Knorpeldefekten in einem Kaninchen-Modell
Summary
Ein experimentelles Verfahren für die Behandlung von Knorpeldefekten in das Kaninchen Kniegelenk beschrieben. Die Implantation von autologen Chondrozyten auf einer Matrix ausgesät ist eine gut akzeptierte Methode für den Umbau und die Reparatur von Gelenkknorpelläsionen Bereitstellung befriedigend langfristige Ergebnisse. Matrix-assistierte autologe Chondrozyten-Transplantation (MACT) bietet eine standardisierte und klinisch etablierte Methode der Implantation.
Abstract
Gelenkknorpel Mängel sind ein großes gesundheitliches Problem betrachtet, weil Gelenkknorpel hat eine begrenzte Kapazität für Selbst-Regeneration 1. Unbehandelte Knorpelschäden zu andauernden Schmerz zu führen, was sich negativ auf die Qualität des Lebens und der Prädisposition für Arthrose. In den letzten Jahrzehnten wurden verschiedene chirurgische Techniken entwickelt, um solche Läsionen zu behandeln. Doch bis jetzt war es nicht möglich, eine vollständige Reparatur in Bezug auf die Deckung des Defektes mit hyaline Gelenkknorpel oder eine zufriedenstellende langfristige Erholung 2-4 zu erreichen. Daher bleiben Gelenkknorpel Verletzungen ein primäres Ziel für regenerative Techniken wie Tissue Engineering. Im Gegensatz zu anderen chirurgischen Verfahren, die oft zur Bildung von Faser-oder fibrocartilagineum Gewebe führen soll Tissue Engineering zu vollständigen Wiederherstellung der komplexen Struktur und die Eigenschaften der ursprünglichen Gelenkknorpel unter Verwendung der chondrogenen Potential der transplantierten Zellen. RÜNGSTE Entwicklungen eröffnet vielversprechende Möglichkeiten für regenerative Therapien Knorpel.
Die erste Zelle Ansatz für die Behandlung von tiefen osteochondralen Läsionen oder Knorpel wurde 1994 von Lars Peterson und Mats Brittberg die klinische autologe Chondrozyten-Implantation (ACI) 5 Pionierarbeit durchgeführt. Heute ist die Technik in der Klinik zur Behandlung von großen Knorpelschaden Mängel des Knies gut etabliert, das Beibehalten der guten klinischen Ergebnisse auch 10 bis 20 Jahre nach der Implantation 6. In den letzten Jahren erlebte die Implantation von autologen Chondrozyten eine schnelle Progression. Der Einsatz eines künstlichen dreidimensionalen Kollagen-Matrix, auf der Zellen anschließend wieder aufgeforstet werden immer mehr und mehr populär 7-9.
MACT besteht aus zwei Operationen: Erstens, um Chondrozyten sammeln muss ein Knorpel-Biopsie von einem nicht belasteten Bereich der Knorpel t durchgeführt werden,er Kniegelenk. Dann werden Chondrozyten, die extrahiert, gereinigt und erweitert werden, um eine ausreichende Anzahl von Zellen in vitro. Chondrozyten werden dann auf eine dreidimensionale Matrix ausgesät und anschließend wieder implantiert werden. Bei der Herstellung einer Tissue-Engineering-Implantat sind Proliferationsrate und Differenzierung Kapazität von entscheidender Bedeutung für eine erfolgreiche Geweberegeneration 10. Verwendung einer dreidimensionalen Matrix als Zellträger wird angenommen, dass diese zellulären Merkmale 11 zu unterstützen.
Das folgende Protokoll wird zusammengefasst und zeigen eine Technik zur Isolierung von Chondrozyten aus Knorpel Biopsien, ihre Proliferation in vitro und deren Aussaat auf einer 3D-Matrix (Chondro-Gide, Geistlich Biomaterials, Wollhusen, Schweiz). Schließlich wird die Implantation der Zell-Matrix-Konstrukte in künstlich geschaffenen Knorpeldefekten eines Kaninchens Kniegelenk beschrieben. Diese Technik kann als eine experimentelle Einstellung verwendet werdenfür weitere Experimente von Knorpel zu reparieren.
Protocol
Representative Results
Discussion
Das vorgestellte Protokoll bietet eine etablierte 9,12,13 und leicht reproduzierbar Technik autologen Chondrozyten für nachfolgende Proliferation und Re-Implantation in künstlich geschaffenen Knorpelschäden in Knie Kaninchen isolieren. Die Verwendung von autologen Chondrozyten für Umbau und Reparatur von Gelenkknorpel Läsionen ist bereits in der klinischen Anwendung bieten befriedigende Langzeitergebnisse 6.
Große Probleme wie beispielsweise Periost Hypertrophie u…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dieses Projekt wurde von der Deutschen Forschungsgemeinschaft (DFG, HE 4578/3-1) gefördert.
Materials
| Name of reagent/equipment | Company | Catalogue Number | Comments |
| DMEM | Biochrom AG | F 0415 | |
| Collagenase A | Roche | 10 103 586 001 | 0.21 U/mg |
| Fetal calf serum (FCS) | PAN Biotech GmbH | 3702-P103009 | |
| Propofol | Fresenius Kabi | ||
| Penicillin/Streptomycin | Biochrom AG | A 2213 | 10,000 U/ml/10,000 μg/ml |
| PBS Dulbecco (1X) | Biochrom AG | L1815 | |
| Ethanol (70%) | Merck KgaA | 410230 | |
| Trypsin-EDTA 0.25 %/0.02 % | Biochrom AG | L2163 | in PBS w/o Ca2+, Mg2+ |
| Fentanyl | Delta Select GmBH | 1819340 | |
| NaCl solution (0.9%) | Bbraun | 8333A193 | |
| Tissue culture dishes 100 mm/150 mm | TPP AG | 93100/93150 | Growth area 60.1 mm2/147.8 mm2 |
| Tissue culture flasks 25/75 mm2 | TPP AG | 90025/90075 | 25 mm2, 75 mm2 |
| Centrifuge Tubes (50 ml) | TPP AG | 91050 | Gamma-sterilized |
| Hemocytometer | Brand GmbH+Co KG | 717810 | Neubauer |
| Trypan Blue Solution 0.4% | Sigma-Aldrich | L8154 | |
| Spray dressing (OpSite) | Smith&Nephew | 66004978 | Permeable for water vapor |
| Chondro-GideÒ | Geistlich Pharma AG | 30915.5 | |
| Biopsy Punch | pfm medical ag | 48351 | |
| Tissucol Duo S | Baxter | 3419627 | 0.5 ml |
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