Bir Nöro-İnvazif encephalitic Virüs Vivo Görüntüleme Sistemleri (IVIS) Algılama
Summary
Bir roman olarak lusiferaz ve in vivo görüntüleme sistemleri (IVIS) olarak kullanılması klinik gelişmeler ortaya çıkmadan hastalığın bitiş noktaları tespit etmek anlamına gelir. IVIS bizim gelecekteki çalışma için daha doğru bir hastalık modeli sağlayan, gerçek zamanlı olarak birden fazla gün içinde encephalitic virüs istilasına görselleştirmek için izin verdi. Bu da bize daha hızlı şu anda kullanılan hayvan modellerinde daha antiviral ve aşıların potansiyel koruyucu özellikleri tanımlamak için izin verdi. Çoklu zaman puan üzerinden bireysel hayvanların kullanmak için yeteneği azalmış hayvan gereklilikleri, masraflar ve hastalık çalışmanın daha insancıl ve bilimsel yöntemlerle sağlanması yararlanılan hayvanlar genel morbidite sağlar.
Abstract
Görüntüleme teknolojisi Modern gelişmeler viral araştırmalar gerçekleştirilir şekilde daha da geliştirilmesi ve arıtma teşvik. Başlangıçta Hume'un 3R'si yılında Russel ve Burch tarafından önerilen (değiştirilmesi, azaltılması, arıtma), bilimsel araştırma hayvan modellerinin kullanımı bilimsel doğruluk ve hız artırırken hayvan kullanımını azaltmak için yeni yöntemler belirlemek için sürekli baskı altındadır. Hume'un sorumlularına büyük bir meydan okuma Ancak, hayvan hastalıklarının morbidite ve genel numaraları azaltırken çalışmalar istatistiksel olarak doğru olduğundan emin olmak için nasıl. Aşı etkinlik çalışmaları şu anda istatistiksel olarak anlamlı kabul edilebilmesi için çok büyük bir hayvan sayısı gereklidir ve sıklıkla immün koruma tanımlanması için yüksek morbidite ve mortalite uç ile sonuçlanabilir. Biz giderek bir ence ile merkezi sinir sistemi (MSS) işgali izlemek için bir ateş böceği bioluminescent enzim ile birlikte in vivo görüntüleme sistemleri (IVIS) kullanılmıştırbir fare modelinde phalitic virüs. Tipik olarak, hastalık yavaş ilerler, bununla birlikte virüs replikasyonu, özellikle merkezi sinir sistemi içinde, hızlı ve sık sık, ölümcül sonuçlara yol açabilir. TC83-Luc ile farelerin intranazal enfeksiyonu takiben, zayıflatılmış bir Venezüella ensefaliti virüsü suşu bir lusiferaz gen ifade değiştirilmiş, biz en az üç gün klinik hastalık belirtilerinin gelişiminden önce beynin içindeki virüs replikasyonu görselleştirmek edebiliyoruz. Biz klinik semptomlar ortaya çıkmadan önce hızlı TC83-Luc enfeksiyona karşı tedavi ve aşı koruması tespit edebiliyoruz bir anahtar encephalitic hastalık gelişimi nokta olarak MSS işgali kullanılması. IVIS teknolojisi ile hayvan sayıları ve morbiditeyi azaltırken uyuşturucu tedavi ve aşıların hızlı ve doğru test göstermek edebiliyoruz.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bu protokol vivo analizi için görüntüleme yönlerini kapsar iken, gelecekteki çalışmalar için önemli bir faktör olarak bioluminescent vektör tanımak önemlidir. Lusiferaz ifadesi için bir vektör olarak TC83 oluşan kullanımı, VEEV zayıflatılmış bir aşı suşu, enzim büyük miktarlarda 1-4 daha önce tarif edildiği gibi merkezi sinir sistemi içinde, virüsün yüksek çoğaltma oranına bağlı üretilmektedir sağlar. Rekombinant virüsün daha fazla zayıflatılması, ikinci …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu makale için video düzenleme ile ona yardım için Translasyonel Bilimleri UTMB-NIH hibe 1UL1RR029876-01 ve Alisha Prather Enstitüsü.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| D-Luciferin | |||
| Isoflurane | |||
| Xenogen IVIS System (Spectrum) | Caliper Life Sciences | ||
| XGI-8-gas Anesthesia System | Caliper Life Sciences | ||
| XIC-3 Containment Box | Caliper Life Sciences | ||
| LivingImage 4.0 Software | Caliper Life Sciences | ||
| Telemetry/identification chips | Bio Medic Data Systems | IPTT-300 | Animal ID and Temperature |
| BD Integra 1ml TB syringe with 26 g x 3/8” needle | Fisher Scientific | 305279 | |
| Vet Bond tissue adhesive | Fisher Scientific | NC9259532 | |
| Vetropolycin Ophthalmic Ointment | Webster Veterinary Products | 78444656 | |
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline 1X | Invitrogen | 14190-144 | |
| BMDS Chip Reader | Bio Medic Data Systems | DAS-7007S | |
| DAS-HOST Software | Bio Medic Data Systems | Used to download probe information |
References
- Steele, K. E., et al. Comparative Neurovirulence and Tissue Tropism of Wild-type and Attenuated Strains of Venezuelan Equine Encephalitis Virus Administered by Aerosol in C3H/HeN and BALB/c Mice. Veterinary Pathology Online. 35, 386-397 (1998).
- Ludwig, G. V., et al. Comparative neurovirulence of attenuated and non-attenuated strains of Venezuelan equine encephalitis virus in mice. Am. J. Trop. Med. Hyg. 64, 49-55 (2001).
- Charles, P. C., Walters, E., Margolis, F., Johnston, R. E. Mechanism of Neuroinvasion of Venezuelan Equine Encephalitis Virus in the Mouse. Virology. , 208-662 (1995).
- Volkova, E., Gorchakov, R., Frolov, I. The efficient packaging of Venezuelan equine encephalitis virus-specific RNAs into viral particles is determined by nsP1-3 synthesis. Virology. 344, 315-327 (2006).
- Patterson, M., et al. Rapid, non-invasive imaging of alphaviral brain infection: Reducing animal numbers and morbidity to identify efficacy of potential vaccines and antivirals. Vaccine. 29, 9345-9351 (2011).
- Cook, S. H., Griffin, D. E. Luciferase Imaging of a Neurotropic Viral Infection in Intact Animals. J. Virol. 77, 5333-5338 (2003).
- Contag, P. R., Olomu, I. N., Stevenson, D. K., Contag, C. H. Bioluminescent indicators in living mammals. Nat. Med. 4, 245-247 (1998).
- Osorio, J. E., Iams, K. P., Meteyer, C. U., Rocke, T. E. Comparison of Monkeypox Viruses Pathogenesis in Mice by In Vivo Imaging. PLoS ONE. 4, e6592 (2009).
- Luker, G. D., Prior, J. L., Song, J., Pica, C. M., Leib, D. A. Bioluminescence Imaging Reveals Systemic Dissemination of Herpes Simplex Virus Type 1 in the Absence of Interferon Receptors. J. Virol. 77, 11082-11093 (2003).
- Russell, W. M. S., Burch, R. L. . The Principles of Humane Experimental Technique. , (1959).
- Kuehne, R. W., Pannier, W. L., Stephen, E. L. Indirect mouse model for the evaluation of potential antiviral compounds: results with Venezuelan equine encephalomyelitis virus. Antimicrob. Agents Chemother. 11, (1977).
- Lukaszewski, R. A., Brooks, T. J. G. Pegylated Alpha Interferon Is an Effective Treatment for Virulent Venezuelan Equine Encephalitis Virus and Has Profound Effects on the Host Immune Response to Infection. J. Virol. 74, 5006-5015 (2000).
