Trans-vivo hipersensibilidad de tipo retardada Ensayo para Antigen Reglamento Específico
Summary
Se describe un ensayo de diagnóstico valiosa que potencialmente podría ser utilizado para decidir la retirada de la inmunosupresión después del trasplante sin riesgo elevado de rechazo del injerto. El ensayo utiliza los principios de la hipersensibilidad de tipo retardado y proporciona una evaluación precisa de ambos donantes respuestas inmunes efectoras y reglamentarias específicas montados por los destinatarios.
Abstract
Respuesta de hipersensibilidad de tipo retardado (DTH) es una rápida en la manifestación in vivo de la respuesta inmune dependiente de células T a un antígeno extraño (Ag) que el sistema inmune del huésped ha experimentado en el pasado reciente. Reacciones de DTH a menudo se dividen en una fase de sensibilización, en referencia a la experiencia inicial antígeno, y una fase de desafío, que por lo general sigue varios días después de la sensibilización. La falta de una respuesta de hipersensibilidad de tipo retardado a una recuperación Ag demostrada por pruebas cutáneas a menudo se considera como una prueba de anergia. El ensayo de DTH tradicional ha utilizado con eficacia en el diagnóstico de muchas infecciones microbianas.
A pesar de compartir características inmunológicas similares, tales como la infiltración de linfocitos, edema y necrosis de los tejidos, la DTH directa no es una técnica de diagnóstico factible en pacientes trasplantados debido a la posibilidad de inyección directa que resulta en la sensibilización a los antígenos del donante y la pérdida del injerto. Para evitar este problema, el zumbidouna-a-mouse "trans-vivo" ensayo de DTH fue desarrollado 1,2. Esta prueba es esencialmente un ensayo de DTH de transferencia, en la que las células humanas mononucleares de sangre periférica (CMSP) y antígenos específicos se inyectaron por vía subcutánea en el pabellón auricular o pata de un ratón ingenuo e hinchazón DTH-como se mide después de 18-24 horas 3. La presentación de antígenos por las células presentadoras de antígenos humanos, tales como los macrófagos o DCS a las células T en el tejido altamente vascular ratón desencadena la cascada inflamatoria y atrae a las células inmunes de ratón resultantes en las respuestas de hinchazón. La respuesta es antígeno-específica y requiere sensibilización previa antígeno. Una respuesta DTH donante-reactiva positiva en el ensayo de Tv-DTH refleja que el paciente de trasplante ha desarrollado una disposición inmune proinflamatoria hacia aloantígenos de injerto.
La característica más importante de este ensayo es que también se puede utilizar para detectar células T reguladoras, que provocan la supresión transeúnte. Supresión de un espectadorRespuesta de recuerdo DTH en la presencia de antígeno del donante es característica de los receptores de trasplante con aloinjertos aceptados 2,4-14. El seguimiento de los pacientes trasplantados de alorreactividad y regulación por Tv-DTH puede identificar un subgrupo de pacientes que podrían beneficiarse de la reducción de la inmunosupresión y sin alto riesgo de rechazo o de la función renal deteriorada.
Un área prometedora es la aplicación del ensayo Tv-DTH en el monitoreo de la autoinmunidad 15,16 y también en la inmunología tumoral 17.
Protocol
Representative Results
Discussion
El ensayo de DTH trans-vivo es una prueba de diagnóstico novela con una aplicación clínica potencial en la evaluación de las respuestas mediadas por células en trasplante, pacientes de cáncer y autoinmunes. Es valioso porque no sólo es útil en el seguimiento de las respuestas de recuerdo T efectoras, sino que también puede detectar respuestas T reguladoras. Un método confiable para detectar la regulación DTH humano puede predecir la seguridad de la retirada de inmunosupresión en los pacientes que son candida…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Los autores desean agradecer las contribuciones de AM VanBuskirk al desarrollo de nuestra comprensión de la respuesta DTH regulada en los receptores de trasplantes. Este trabajo fue apoyado subvenciones del NIH PO1AI084853 y R01AI066219-06 y la UE-patrocinado un estudio.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| ACD tube for blood collection | BD | 02-684-26 | |
| Lymphocyte Separation Medium | Cellgro | 25-072-CV | |
| Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline | Cellgro | 21-031-CM | Without calcium & magnesium |
| ACK Lysis Buffer | BioWhittaker | 10-548E | |
| TT/DT or EBV | Sanofi Pasteur Inc./ Meridian Life Science, Inc. | TT/DT 25 μg/injection EBV 8 μg/injection | |
| Protease inhibitor PMSF | Sigma-Aldrich | 78830 | |
| Eosine for cell count | Sigma-Aldrich | E-6003 | |
| Alloantigen | Purified HLA antigens, synthetic allopeptides can be used instead of donor cell-free lysates | ||
| 50 ml sterile centrifuge tubes | Fisher Scientific | 06-443-18 | |
| 10 ml pipettes and pipettor | BD Falcon | 13-675-20 | |
| 2 ml safe-lock tubes | Costar | 3213 | |
| 1000 μl, 100 μl , 10 μl pipettes with sterile tips | |||
| Hemocytometer | Fisher | 02-671-10 | |
| Full size centrifuge and microfuge | Beckman Coulter/Eppendorf | ||
| 1/2cc or 1cc insulin syringes | Becton Dickinson | 14-826-79 | 28 gauge |
| Vibracell sonicator | Divtech Equipment Co. Sonocs& Materials Inc | 2 mm probe | |
| Dial thickness gauge | Mitutoyo, Japan | ||
| SCID mice | Harlan | ||
| Isoflurane | Piramal Healthcare | Inhalant anesthesia |
References
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