وهناك تقنية عالية الدقة باستخدام المجهر intavital 2 الفوتون لتصور مباشرة وتحديد الترشيح gloemrular في الكبيبات السطح. هذا الأسلوب يسمح للتقرير مباشرة من خصائص نفاذية الجزيئات في الدول على حد سواء طبيعية والمريضة.
Abstract
أمراض الكلى التي تنطوي على فقدان البول من الجزيئات الأساسية الكبيرة، مثل ألبومين المصل، منذ فترة طويلة يعتقد أن سببها تغييرات في حاجز نفاذية تتألف من podocytes، وخلايا بطانة الأوعية الدموية، والغشاء القاعدي تعمل في انسجام تام. وكشفت بيانات من مختبرنا باستخدام المجهر حيوي داخلي 2 الفوتون أكثر نفاذية كبيبي حاجز الترشيح (GFB) مما كان يعتقد سابقا في ظل ظروف الفسيولوجية، مع استرجاع تصفيتها الزلال التي تحدث في وقت مبكر فرعية من الخلايا تسمى الخلايا نبيب الداني (PTC) 1،2، 3.
التقنيات السابقة تستخدم لدراسة الترشيح الكلوي وإنشاء سمة من حاجز الترشيح تشارك بزل مجهري من تجويف أنبوبي هذه القطاعات في وقت مبكر مع عينة من المحتوى وتحليل السائل 4. تحدد هذه الدراسات تركيز الألبومين في السائل اللمعية أن تكون شبه معدومة؛ المقابلة عن كثبلماذا يتم الكشف عادة في البول. ومع ذلك، وتوصيف البوليمرات ديكستران مع الأحجام التي تحددها هذه التقنية كشفت تلك ذات حجم مماثل لألبومين المصل لديهم مستويات أعلى في التجويف الأنبوبي والبول؛ مما يوحي زيادة نفاذية 5.
وهنا هو مخطط تفصيلي للتقنية المستخدمة لتصور مباشرة وقياس نفاذية كبيبي الألبومين الفلورسنت في الجسم الحي. هذا الأسلوب يسمح للكشف عن ألبومين تصفيتها عبر حاجز الترشيح في الفضاء بومان (الغرفة الأولي من الترشيح البولية)، وأيضا يسمح الكمي لاستيعاب الزلال بواسطة الأنابيب القريبة والتخيل من transcytosis الزلال اللاحقة 6. غياب الفلورسنت الألبومين في وقت لاحق على طول قطاعات أنبوبي في طريقها إلى المثانة يسلط الضوء على كفاءة مسار استرجاع في قطاعات نبيب الداني في وقت سابق. وعلاوة على ذلك، عندما تم تطبيق هذه التقنية لتحديد نفاذيةمن تم الإبلاغ عن dextrans وجود حجم مماثل لالزلال القيم نفاذية مطابقة تقريبا 2. هذه الملاحظات دعم مباشرة على الحاجة إلى توسيع تركيز العديد من الأمراض الكلوية بروتيني البيلة إلى التعديلات المدرجة في القريب أنبوب صغير استصلاح الخلية.
Protocol
1. اقتران من مصل الزلال الجرذ إلى سلفو رودامين 101 كلوريد سلفونيل (تكساس الأحمر) حل 100 ملغ من الجرذ مصل الزلال (RSA) في 6.667 مل من 100 ملي بيكربونات الصوديوم 9.0 درجة الحموضة؛ تركيز النهائي 15 ملغ / مل في 50 مل المخروطية أنبوب. <li s…
Representative Results
ويبين الشكل 3 مثالا لصورة مأخوذة من الكبيبة سطح ميونيخ يستار الفئران Frömter والخطوات المتخذة لتحديد نفاذية الفلورسنت الزلال. قيمة GSC لالزلال من 0.0111 المشتق من هذا الخريف الكبيبة الفردية ضمن نطاق ينظر في هذه السلالة من ميونخ فئران ويستار عندما تكون في حالة بنك ا…
Discussion
تمثل الخطوات تسليط الضوء هنا ما نشعر به لتكون تلك التي من شأنها أن تنتج قيم نفاذية متسقة ودقيقة لأنها تحايل على المزالق التالية:
نثر: إن استخدام fluorophores ينبعث منها الأحمر يسمح لجمع أكثر كفاءة من الضوء منذ الفوتونات ال?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
فإن الكتاب أود أن أشكر الدكاترة سيلفيا B كامبوس Bilderback وجورج J رودس لاستكمال الإجراءات الجراحية التي تنطوي على وضع خطوط الوصول الوريدي. وهم يودون أيضا أن أشكر سارة E فطم عن الحفاظ على المستعمرات ميونيخ-يستار تتكون من كل من سيمونسن وسلالات Frömter.
Sandoval, R. M., Molitoris, B. A. Quantifying Glomerular Permeability of Fluorescent Macromolecules Using 2-Photon Microscopy in Munich Wistar Rats. J. Vis. Exp. (74), e50052, doi:10.3791/50052 (2013).