שיטת מהירות לחלוטין להסיר רכיבים סלולריים מלב חזירי שלם באמצעות זלוף המדרדר מתוארת. שיטה זו מניבה מטריצת אתר פיגום תאי לבבי ספציפי שבו יש פוטנציאל לשימוש ביישומים קליניים מרובים.
Abstract
כל decellularization האיבר זלוף המבוסס צבר לאחרונה עניין בתחום הנדסת רקמות כאמצעי ליצור פיגומים תאיים מטריקס ספציפיים לאתר, תוך שמירה על מידה רבה את הארכיטקטורה המקורית של הפיגום. עד כה, גישה זו נוצלה במגוון רחב של מערכות איברים, כוללת לב, ריאות, הכבד ו1-5. שיטות decellularization קודמות לרקמות ללא רשת כלי דם נגישה הסתמכו על חשיפה ממושכת של רקמות לפתרונות של חומרי ניקוי, חומצות, או טיפולים אנזימטיים כאמצעי כדי להסיר את הרכיבים הסלולריים וגרעיניים מהסביבה התאית 6-8. עם זאת, היעילות של שיטות אלה תלויים על יכולתו של את הפתרונים לחלחל רקמות באמצעות דיפוזיה. לעומת זאת, טפטוף של איברים דרך מערכת כלי הדם הטבעית ביעילות מצמצם את מרחק דיפוזיה ותחבורת הנחייתם של decellularizatiעל סוכנים לרקמה והמרכיבים תאיים מהרקמות. בזאת, אנו מתארים שיטה לdecellularize לב חזירי שלם מלא דרך זלוף המדרדר כלילית. הפרוטוקול הניב decellularized מלוא לב תאי מטריצה (c-ECM) פיגום עם המבנה תלת הממדים של הלב השלם. השיטה שלנו השתמשה בסדרה של אנזימים, חומרי ניקוי, וחומצות בשילוב עם שטיפות hypertonic וhypotonic לסייע בתמוגה וההסרה של תאים. הפרוטוקול המשמש פתרון טריפסין לנתק את התאים מהמטריצה אחרי Triton פתרוני X-100 ונתרן deoxycholate כדי לסייע בהסרה של חומר תאי. הפרוטוקול המתואר משתמש גם במהירויות של יותר מ זלוף 2 ליטר / דקה לפרקי זמן ארוכים. קצב הזרימה הגבוהה, בשילוב עם שינויי פתרון נתן הובלה של סוכנים לרקמות ללא זיהום של פסולת תאית והבטיח יעיל שטיפה של הרקמות. השיטה המתוארת הסירה את כל החומר גרעיני מנתיve רקמת לב חזירית, יצירת לב ECM פיגום באתר ספציפי שיכול לשמש למגוון רחב של יישומים.
Protocol
1. הכנת רקמה והתקנת ניסוי איבר חזירי קציר מייד לאחר המתת חסד ממתקן משחטה או מחקר ולשטוף את הדם עודף. חתוך את הלב של שומן ורקמה עודפים, שמירת הפרוזדורים ואב העורקים בשלמותה. לחתוך שומן להפריד מעורק הריאה לאב העורקים. אם י…
Representative Results
ההשפעה של decellularization על לב חזירי שלם באופן טבעי משתנית בהתאם להבדלים בגודל, לחצים, וסידור כלי. לכן, את ההרכב המדויק של הפיגומים התאיים מטריקס הנגזרים לא יהיה אותו הדבר מלב אל לב. השלמת הפרוטוקול המתואר תניב לב שמופיע לבן או שקוף, המציין את האובדן של חומר תאי. עם זאת, מקוב?…
Discussion
המחקר הנוכחי תאר מתודולוגיה לdecellularization עקבי והיעיל של לב חזירי. הפרוטוקול היה שינוי ל1 דו"ח שפורסם בעבר, וכלל חשיפה ארוכה יותר לזרימה ולחץ מוגבר, אשר ספקה תוצאות דיר יותר. רקמת decellularized התקבלה עמדה בכל הקריטריונים שפורסמו לdecellularization המוצלח של רקמה 2. שינו?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
המחברים מבקשים להודות רוגן אורח, מישל וויבר, וקריסטן יפרט. מימון למחקר זה מסופק על ידי NIH גרנט R03EB009237, כמו גם מענקי NIH הדרכת T32EB001026-06 ממכון הלאומי לדימות וBioengineering ביו T32HL076124-05.
Remlinger, N. T., Wearden, P. D., Gilbert, T. W. Procedure for Decellularization of Porcine Heart by Retrograde Coronary Perfusion. J. Vis. Exp. (70), e50059, doi:10.3791/50059 (2012).