Antigener Beskyttet Funksjonell røde blodceller av membranen Pode av kompakt hyperforgrenede Polyglycerols

Summary

Cellemembranen modifisering av røde blodceller (RBC) med hyperforgrenede polyglycerol (HPG) presenteres. Modifiserte RBCs var preget av vandig to fase partisjonering, osmotisk skjørhet og utfyller mediert lysis. Kamuflasje av overflateproteiner og antigener ble evaluert med flowcytometri og Micro Typing System (MTS) blod fenotyping kort.

Abstract

Røde blodceller (RBC) transfusjon er avgjørende for behandlingen av en rekke akutte og kroniske medisinske problemer som thalassemia major og sigdcelleanemi ^1-3. På grunn av tilstedeværelsen av mange antigener på RBC overflaten (~ 308 kjente antigener ^4), pasienter i kronisk blodoverføring terapi utvikle alloantibodies grunn glipp samsvarer med mindre antigener på transfused ^{4 RBCs, 5.} Pode av hydrofile polymerer slik som polyetylenglykol (PEG) og hyperforgrenede polyglycerol (HPG) danner et lag på uttrekk RBC membran som hindrer interaksjon av antistoffer med overflateantigener uten å påvirke passasje av små molekyler slik som oksygen, glukose, og ioner ^3. I dag ingen fremgangsmåte er tilgjengelig for dannelsen av universelle røde blod donor cellene delvis på grunn av den skremmende utfordringen i tilstedeværelsen av et stort antall antigener (protein og karbohydrat basert) på RBC overflaten og development av slike metoder vil forbedre transfusjon sikkerhet, og dramatisk forbedre tilgjengeligheten og bruken av RBCs. I denne rapporten er de forsøk som er brukt for å utvikle antigen beskyttede funksjonelle RBCs av membranen pode av HPG og deres karakterisering presenteres. HPGs er svært biokompatible kompakte polymerer ^{6, 7,} og er forventet å bli lokalisert i cellen glycocalyx som omgir lipid membran ^{8, 9} og maske RBC overflateantigener ^{10, 11.}

Protocol

A. hyperforgrenede polyglycerol Modification (SS-HPG) Plass lyofilisert HPG 60 kDa (0,5 g, 0,0083 mmol) i en rundbunnet kolbe og tørk over natten under vakuum ved 90 ° C. Kjøle kolben til romtemperatur, og oppløs tørket HPG i vannfri pyridin (3 ml). Å functionalize ca åtte hydroksylgrupper på HPG med karboksylgrupper, legge katalytisk mengde av dimetylaminopyridin (en dråpe på 5 mg / ml oppløsning i pyridin) til HPG løsningen. Til denne blanding, legge ravsyreanhydrid, (0,0067 …

Representative Results

Kamuflasje av Rhesus D antigen og CD47 RBC overflateprotein ble kvantifisert ved strømningscytometri hjelp fluorescerende merkede monoklonale antistoffer, og et representativt resultat er gitt i figur 1. I tilfelle av HPG-podet RBCs (grå), reduserte intensiteten av signalet (peak skiftet til venstre) i forhold til kontrollen RBCs (rød og grønn) som indikerer en reduksjon i binding til antistoffer til celleoverflate som indikerer maskering av overflateproteiner . <p class="jove_content" fo:keep-t…

Discussion

Universelle donor RBCs har stort potensial i å forbedre blod tilgjengelighet og sikkerhet for blodoverføring terapi. RBCs regnes også lovende levering av legemidler kjøretøy på grunn av sin lange sirkulasjon og iboende biokompatibilitet ^{14, 15.} Eksperimenter presenteres i denne artikkelen evaluere in vitro karakteristika HPG modifiserte RBCs. In vitro egenskaper og in vivo sirkulasjon av HPG modifiserte RBCs er undersøkt i vår gruppe nylig ^{8, 11.} Delingen av RBCs …

Materials

Glycidol	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
Trimethylolpropane	Fluka		(ON, Canada)
Potassium methylate	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
Anhydrous pyridine	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
4-Dimethylaminopyridine	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
Succinic anhydride	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
Acetone	Fisher Scientific		(ON, Canada)
Anhydrous dimethyl formamide	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
N-Hydroxysuccinimide	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
N,N’-Diisopropylcarbodiimide	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
MTS cards			Micro Typing System (MTS) cards (FL, USA)
Dextran 500 kDa	Pharmacia Fine Chemicals		(Sweden)
PEG 8 kDa	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
FITC monoclonal anti-Rhesus D (RhD)	Quotient Biodiagnostics		(PA, USA)
PE monoclonal anti-CD47	BD Biosciences		(NJ, USA)
Drabkin’s reagent	Sigma Aldrich		(ON, Canada)
			Table. Chemicals and reagents used for the grafting of HPG polymers to RBC membrane and their analysis.