Anaplastic थायराइड कार्सिनोमा के Orthotopic माउस मॉडल
Summary
Anaplastic थायराइड कार्सिनोमा के एक orthotopic माउस मॉडल की पीढ़ी यहाँ वर्णित है. इस तकनीक को इस प्रकार रोग प्रगति के साथ ही स्क्रीन नवीन उपचारात्मक उपायों का अध्ययन करने के लिए एक अधिक नैदानिक प्रासंगिक सेटिंग बनाने, immunodeficient चूहों की थायराइड में मानव anaplastic थायराइड कैंसर कोशिकाओं की शल्य नियुक्ति कार्यरत हैं.
Abstract
Several types of animal models of human thyroid carcinomas have been established, including subcutaneous xenograft and orthotopic implantation of cancer cells into immunodeficient mice. Subcutaneous xenograft models have been valuable for preclinical screening and evaluation of new therapeutic treatments. There are a number of advantages to using a subcutaneous model; 1) rapid, 2) reproducible, and 3) tumor establishment, growth, and response to therapeutic agents may be monitored by visual inspection. However, substantial evidence has shed light on the short-comings of subcutaneous xenograft models1-3. For instance, medicinal treatments demonstrating curative properties in subcutaneous xenograft models often have no notable impact on the human disease. The microenvironment of the site of xenographic transplantation or injection lies at the heart of this dissimilarity.
Orthotopic tumor xenograft models provide a more biologically relevant context in which to study the disease. The advantages of implanting diseased cells or tissue into their anatomical origin equivalent within a host animal includes a suitable site for tumor-host interactions, development of disease-related metastases and the ability to examine site-specific influence on investigational therapeutic remedies. Therefore, orthotopic xenograft models harbor far more clinical value because they closely reproduce human disease. For these reasons, a number of groups have taken advantage of an orthotopic thyroid cancer model as a research tool4-7.
Here, we describe an approach that establishes an orthotopic model for the study of anaplastic thyroid carcinoma (ATC), which is highly invasive, resists treatment, and is virtually fatal in all diagnosed patients. Cultured ATC cells are prepared as a dissociated cellular suspension in a solution containing a basement membrane matrix. A small volume is slowly injected into the right thyroid gland. Overall appearance and health of the mice are monitored to ensure minimal post-operative complications and to gauge pathological penetrance of the cancer. Mice are sacrificed at 4 weeks, and tissue is collected for histological analysis. Animals may be taken at later time-points to examine more advance progression of the disease. Production of this orthotopic mouse model establishes a platform that accomplishes two objectives: 1) further our understanding of ATC pathology, and 2) screen current and future therapeutic agents for efficacy in combating ATC.
Protocol
Representative Results
Discussion
हमारे मॉडल में, जानवरों के 4 सप्ताह के बाद इंजेक्शन द्वारा कैचेक्सिया और श्वसन संकट संबंधित थायराइड ट्यूमर मेटास्टेसिस और रोग का प्रदर्शन किया. अधिकांश अन्य orthotopic मॉडल लक्ष्य से परे फैलता है कि आसपास के ऊतकों और बाद इंजेक्शन रिसाव में एक सेल निलंबन के इंजेक्शन वितरण, इंजेक्शन के उपयोग के साथ के रूप में संभव हो रहे हैं. कि कहा जा रहा है, इस प्रक्रिया द्वारा उत्पादित एक पहचानने योग्य संभावित अज्ञात गैर रोग संबंधित मेटास्टेसिस या जटिलताओं को दूर लक्ष्य जोखिम के प्रभाव है. यह भले ही रोग जांच की जा रही है, सबसे Xenographic प्रत्यारोपण के साथ एक आम चिंता का विषय है. बहरहाल, मेटास्टेसिस से अनजाने में परिणाम काफी फिट थायरॉयड ग्रंथि overlaying झिल्ली प्रवेश कर गया है सुई की नोक के पूरे उठाव सुनिश्चित करने और धीरे धीरे सेलुलर निलंबन को खदेड़ने के द्वारा कम किया जा सकता है. रिसाव इंजेक्शन के दौरान या बाद में मनाया जाता है, उन जानवरों के अध्ययन से हटाया जा सकता है.
<p cलड़की = "jove_content"> यह जानवरों थायराइड / ट्रेकिआ और अन्य ऊतकों कटाई से पहले perfused हैं कि आवश्यक है. लाभ) दो गुना, 1 लाल रक्त कोशिकाओं) purged कर रहे हैं और ऊतकीय नमूनों और 2 अव्यवस्था नहीं होगा ऊतक आकारिकी और अखंडता को संरक्षित कर रहे हैं. इसके अलावा, resected थायराइड / श्वासनली जुड़ी या तो एक tumorous द्रव्यमान है या यह संरचनात्मक स्थलों ऊतकीय तैयारी के लिए एम्बेडेड किए जाने से पहले पहचाना जा सकता है कि एक तरह से कटौती की जानी चाहिए भीतर entombed रहे हैं. यह नाटकीय नमूना तैयारी के समय कम हो जाएगा.इस रिपोर्ट में हम एटीसी कोशिकाओं की orthotopic इंजेक्शन के बाद उन्नत थायराइड ट्यूमर के स्थानीय विकास और आक्रमण का वर्णन है. एटीसी मेटास्टेसिस ऐसे hematoxylin और eosin के रूप में मानक ऊतकीय दाग, का उपयोग अन्य ऊतकों के ऊतकीय तैयारियों का विश्लेषण करके, या immunohistochemistry सेल या विकृति प्रासंगिक मार्कर का उपयोग करके जांच की जा सकती है. इस प्रणाली के आगे जी द्वारा विकसित किया जा सकता हैरहते इमेजिंग मेटास्टेसिस और चिकित्सीय उपचार के प्रभाव पर नजर रखने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ताकि enetically प्रतिदीप्ति पत्रकारों के साथ थायराइड कैंसर की कोशिकाओं को संशोधित.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखकों डीआरएस को धन्यवाद देना चाहूंगा. सर्जरी के प्रशिक्षण में उनकी सहायता के लिए वेंजुन ली और डैनियल Kreisel (सेंट लुइस में वाशिंगटन विश्वविद्यालय के मेडिसिन स्कूल). RYL स्वास्थ्य अनुदान R01 DK068057 के राष्ट्रीय संस्थान और सेंट लुइस विश्वविद्यालय के अध्यक्ष के रिसर्च फंड द्वारा समर्थित है.
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalogue Number | Comments |
| RPMI 1640 cell culture media | Mediatech | 10-041-CV | Media and additives used depend on cell line |
| TC10 Automated Cell Counter | Bio-Rad | 145-0001 | |
| Matrigel | Becton, Dickinson and Company | 354234 | |
| Graefe Forceps, Serrated; Slight Curve, 4″ | Roboz | RS-5135 | |
| Disposable scalpel, No. 15 | Feather | 2975#15 | |
| Olsen Hegar Needle Holder – 4 ½” delicate serrated | gSource | gS 21.5400 | |
| 6-0 nylon black monofilament suture | Surgical Specialties Corporation | 1279B | |
| Heating Pad, reusable, 8″ x 12″ | |||
| Cloth tape, 1″ X 10 yds | Medline | MIINON260101 | For restraining anesthetized mouse |
| Peanut Clipper/Trimmer | Wahl | 8655 | For removing hair from surgical site |
| ChlorHex-Q SCRUB 2% | Penn Veterinary Supply | VED1222 | |
| Betadine | Henry Schein Company | 6906727 | |
| Petrolatum ophthalmic ointment | Dechra Veterinary Products | 17033-211-38 | |
| 2 x 2 gauze, 12-ply | Butler Animal Health Supply | 6936 | |
| Sterile Field, Barrier, 18″ x 26″ | Busse | 696 | |
| Drapes (CSR Wrap) | Cardinal Health | AT 21 412 | |
| 27G ½” needle | Becton, Dickinson and Company | 309623 | |
| 31G 5/16″ needle | Becton, Dickinson and Company | 328438 | |
| Ketamine (9 mg/ml) / xylazine (1 mg/ml) solution | |||
| Triple antibiotic ointment |
References
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