플라즈마 레티놀 바인딩 단백질의 막 수용체의 레티놀 전송의 실시간 분석

Riki Kawaguchi; Ming Zhong; Hui Sun

doi:10.3791/50169

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방법 논문

플라즈마 레티놀 바인딩 단백질의 막 수용체의 레티놀 전송의 실시간 분석

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DOI:

10.3791/50169

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2013년 1월 28일

Riki Kawaguchi¹ , Ming Zhong¹ , Hui Sun¹

¹Department of Physiology, Jules Stein Eye Institute and Howard Hughes Medical Institute, University of California, Los Angeles

이 논문에서

요약

여기 고품질의 비타민 A / RBP의 복잡하고 STRA6, RBP 수용체가 비타민에게 교통편을 공부하는 두 실시간 모니터링 기술을 생산하는 최적의 기술을 설명합니다.

초록

비타민 A는 시력을 위해 필수적이며, 성장 / 거의 모든 인간의 장기 차별화. 플라즈마 레티놀 결합 단백질 (RBP)은 혈액의 원칙과 비타민의 특정 항공사입니다. 우리는 여기 생산하고 고친 화성 RBP 수용체 STRA6에 의한 비타민 A의 전송을 공부하고 홀로 RBP와 두 개의 실시간 모니터링 기술을 정화 할 수있는 최적화 된 기술을 설명합니다. 첫 번째 기술은 가능한 고품질 비타민에 홀로 RBP (100 레티놀과 %로드) A 교통 assays의 대량 생산 할 수 있습니다. RBP 자료 비타민 RBP 준비에 쉽게와 세균 오염 유물을 일으킬 수 misfolded 있기 때문에 우수한 품질의 RBP는 기능 assays를위한 필수적입니다. 전기 생리학 등의 실시간 모니터링 기술은 막 수송의 연구에 중요한 공헌을 만들었습니다. RBP 수용체 - 매개 레티놀 전송은 실시간으로 최근까지 분석되지 않았습니다. 여기에 설명 된 두 번째 기술은 정말이에요이다STRA6 - 촉매 레티놀 자료 나로드의 L-시간 분석. 세 번째 기술은 홀로 RBP에서 세포의 레티놀 결합 단백질 I (CRBP-I)에 STRA6 - 촉매 레티놀 전송의 실시간 분석이다. 이 기술은 RBP 수용체의 비타민 A 이해 메커니즘을 드러내는 높은 감도와 해상도를 제공합니다.

서론

비타민 A는 인간의 생존과 거의 모든 인간의 장기의 적절한 작동을 위해 필수적이며 유기 분자이다. 비타민 A 유도체 (retinoids)는 비전 ^1,2 및 배아 발달 동안과 성인 조직 ^3-6 유전자 발현과 단백질 번역 조절을위한 빛의 감지 등 다양한 생화학 및 세포의 행사에 참여하고 있습니다. 레티놀이 체계적으로 확산 할 수있는 능력을 가지고 있지만, 진화는 플라즈마 레티놀 결합 단백질, 비타민 높은 효율성과 특이성을 달성하고 ^7-10 임의의 확산과 관련된 독성을 피하기 위해 혈액에서 교통에 대한 특정 캐리어 단백질을 세웠 어. RBP에 바인딩과 비타민을 차지 고친 화성 수용체가이 1970 년대 ^11-13에 가설되었다. RBP 수용체 ^14-31의 존재에 세 수십 년 동안 축적 된 증거에도 불구하고, 수용체 가설 인해 existenc에 몇 년 동안 논의되었습니다홀로 RBP의 잘못된 정의 5. 홀로 RBP의 올바른 정의는 레티놀과 RBP 사이의 높은 연관성 1:1 복잡한 것입니다. 유기 용매에 의한 홀로 RBP의 반복 추출 APO-RBP를 생성 할 필요가 있습니다. 이 정의는 RBP ^7,9,32-35 또는 RBP 수용체 ^{14-31,36-42를} 공부 거의 모든....