Neste artigo, apresentamos um método para analisar microvasos tumorais in vivo utilizando dinâmica com contraste de fluorescência videomicroscopia. Dois parâmetros quantitativos foram adquiridos: densidade capilar funcional refletindo a vascularização do tumor, e perdas de índice que reflete o vazamento de parede endotelial.
Desfibrado de fluorescência confocal imagiologia in vivo com um feixe de fibras ópticas utiliza o mesmo princípio como microscopia confocal de fluorescência. Ele pode excitar fluorescente in situ elementos através das fibras ópticas, e depois gravar alguns dos fótons emitidos, através das mesmas fibras ópticas. A fonte de luz é um laser que emite luz de excitação através de um elemento no interior do feixe de fibras e como ele varre ao longo da amostra, uma recria a imagem de pixel por pixel. Como este tipo de exame é muito rápido, combinando-a com o software de processamento de imagem dedicada, imagens em tempo real com uma frequência de 12 quadros / s pode ser obtida.
Nós desenvolvemos uma técnica para caracterizar quantitativamente morfologia e função capilar, usando um dispositivo de fluorescência confocal videomicroscopia. O primeiro passo em nosso experimento foi gravar 5 filmes seg nos quatro quadrantes do tumor para visualizar a rede capilar. Todos os filmes foram processados usando o software (ImageCell, Mauna Kea Tecnologia, Paris, França) que realiza uma segmentação automatizado de vasos em torno de um diâmetro escolhido (10 mM em nosso caso). Assim, pode quantificar o 'densidade capilar funcional ", que é a relação entre a área total do vaso, e a área total da imagem. Este parâmetro é um marcador substituto para a densidade microvascular, geralmente mensurados usando ferramentas de patologia.
O segundo passo foi a gravar filmes do tumor ao longo de 20 min para quantificar a fuga do agente de contraste macromolecular através da parede capilar para o interstício. Ao medir a proporção de intensidade de sinal no interstício em relação à dos vasos, um "índice de fuga 'foi obtida, agindo como um marcador substituto para a permeabilidade capilar.
A angiogénese é um processo complexo que envolve uma formação de novos vasos sanguíneos a partir de vasos pré-existentes. As alterações patológicas da microcirculação do tecido, composta de arteríolas, capilares, e vénulas, estão implicados numa vasta gama de doenças tais como o cancro, a inflamação, ou a diabetes. Portanto, é essencial para desenvolver métodos para avaliar quantitativamente a estrutura ea função microvascular. Imagem permite o estudo de microvasos em uma não-forma ou micro-invasivo, em tempo real e in vivo, e medidas repetidas ao longo do tempo no mesmo animal 2.
Atualmente, a dinâmica com contraste (DCE) de imagem 3 é comumente utilizado para avaliar a microcirculação do tecido. Imagem com contraste dinâmico é uma técnica que segue ao longo do tempo a biodistribuição de um traçador injetado por via intravenosa. A partir desta aquisição, parâmetros quantitativos podem ser extraídos refletindo vascularização do tecido. DCE imagemfoi o mais frequentemente usado com CT, ressonância magnética ou ultra-som. No entanto, essas técnicas de imagem não permitir a visualização directa dos microvasos, uma vez que a sua resolução, a não ser com a utilização de dispositivos experimentais específicas, na maioria das vezes permanece macroscópica.
Neste trabalho, propomos estudar a vasculatura do tumor na escala microscópica e in vivo utilizando imageamento óptico dinâmico com contraste, com fibered videomicroscopia confocal. Utilizou-se um agente de contraste macromolecular (FITC-dextrano) que permanece exclusivamente dentro de navios ou fugas através da barreira endotelial no interstício, de acordo com o seu peso molecular e as características do endotélio do tecido estudado 4. Isso permitiu que o estudo de ambos estrutura microvasos, delineando corretamente vasos e permeabilidade capilar, por vazamento e acumulando no interstício.
O estudo da microcirculação tumor tornou-se essencial para a compreensão da fisiopatologia do crescimento do tumor, disseminação e resposta à terapia 1. A imagem óptica é uma das técnicas que podem ser utilizadas para observar os vasos capilares, utilizando um agente de contraste fluorescente e para quantificar morfológica (Densidade capilar funcional) e de fuga (índice) parâmetros funcionais.
A microscopia de fluorescência de imagem foram utilizados neste estudo tem …
The authors have nothing to disclose.
Name | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Insulin serynge Myjector 1ml 29G |
Terumo Europe | BS-05M2913 | |
Fluorescein isothiocyanate-dextran 70 kDa | Sigma-Aldrich | 01619HH | 100 mg/mL diluted in saline |
Fibered confocal videomicroscopy | Cellvizio – MaunaKea Technologies | ||
Calibration and Cleaning Kit for LEICAFCM1000 | Leica Microsystems | LSU-488 | Store at 4 °C |
Probe ProFlexTM Z | MaunaKea Technologies | ||
Mosaicing software | MaunaKea Technologies | ||
Vessel detection software | MaunaKea Technologies |