이 문서 상세 종양 표적 나노 입자, HerDox의 광학 영상 분석을위한 절차에 대해 설명합니다. 특히, 표적 종양 침투를 평가 종양 검출을위한 멀티 이미징 장치에 대한 자세한 사용은 여기에 설명되어 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
HER2 + 종양 표적 나노 입자, HerDox는 HER2 + 암 동물 모델에서 종양 특혜 축적과 종양 성장 절제를 전시하고 있습니다. HerDox가 작은 핵산 링커를 통해, 화학 요법 제, 독소루비신과 종양 표적 세포 침투 단백질의 비공유 자기 조립에 의해 형성된다. 전자 성, 층간 및 올리고머 상호 작용의 조합은 라운드 10-20 nm의 입자로 자기 조립을 용이하게합니다. HerDox 서로 다른 온도에서 혈액뿐만 아니라, 확장 된 스토리지 안정성을 전시한다. 심장과 간 (타겟이 불분명 한 독소루비신에 의한 표시 손상을 받아야 함) 등의 비 종양 조직에 탐지되지 않는 부작용을 가진 종양 세포 죽음 종양 베어링 마우스 결과에 HerDox의 전신 배달. HER2 고도 세포 발현에 비해 따라서 높은 HER2 수준을 표시하는 종양이 HerDox의 큰 축적을 전시, 인간 표피 성장 인자 수용체를 발현하는 세포를 표적으로 용이in vitro와 in vivo에서 모두 낮은 수준을 노래. 현장 공 초점 및 스펙트럼 분석과 결합 된 형광 강도 영상은 우리가 대상으로 생체 내 종양 조직 출산 후 HerDox의 종양 세포의 침투에 확인 할 수있다. 조직 배달 후 멀티 영상을 통해 표적 종양을 평가하는 여기에 우리가 세부 사항 우리의 방법을.
서론
종양 표적 항암 화학 요법의 것이 전달되는 치료보다 오히려 비 종양 조직에 배포하는 것보다 의도 한 대상에 축적 할 수 있기 때문에 타겟이 불분명 한 약물에 비해 낮은 복용량에서 암 세포를 제거하는 잠재력을 가지고있다. 후자의 상황이 약물의 효능을 희석하기 때문에 과다 복용 효과가 필요 하듯이, 종양 타겟팅 표준 비 표적 치료를 통해 모두 치료 및 안전 이점이있다.
자기 조립 나노 입자에 캡슐화 화학 요법을 표적으로하는 약물이 화학적으로 공유 결합 대상 분자에 연결되어있는 약물과는 대조적으로 변경되지 않은 상태를 유지할 수 있습니다. 이러한 결합은 약물과 표적 분자 모두의 활동을 변경할 가능성이 있기 때문에, 비공유 어셈블리 약물 효능을 유지 할 수 있습니다.
우리는 이전에 소설은 세 가지 구성 요소, 자기 조립 복잡한 HerDox는 HER2 + 종양을 대상으로하는 것으로 나타났습니다 생체 및 심장 1 등, 정상 조직을 살려주는 동안 종양의 성장 절제를 이끌어. HerDox이 수용체 결합 세포 침투 단백질, HerPBK10 및 화학 요법 에이전트 사이의 비공유 상호 작용을 통해 형성되고, 작은 핵산 링커를 통해 독소루비신 (독스). endosomal 막 침투가....
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프로토콜
1. 생체 조직 배달
- 6-8 주 이전 NU / NU 마우스 베어링 피하 양측 측면 이종 이식 종양에 대한 주입 당 HerDox의 0.004 ㎎ / ㎏ 용량의 0.2 ML를 동일시하는 멸균 식염수로 충분히 HerDox 섞는다.
- 부드럽게 거품을 피하고, 29G 바늘로 장착 3 / 10 cc의 인슐린 주사기에 HerDox 혼합물을 그립니다.
- 0.5 L / 분, isoflurane을 농도 : 3~4% (또는 이하) 마취 가스 청소 시스템 (산소 유량을 갖춘 유도 챔버에 짧은 isoflurane을 노출에 의해 유도된다.
- 마취 마우스 (주입 당 0.2 ML)의 꼬리 정맥에 전체 혼합물을 주입한다. IV 주입은 또한 제지, unanesthetized 마우스를 수행 할 수 있습니다.
- 하루에 한 번, 여섯 개의 연속 일 같은 마우스 주사를 반복합니다.
2. 생체 내 형광 이미징
종양 HerDox 형광의 축적 할 수멀티 영상을 사용하여 주입의 마지막 날 (7 일)에 의해 탐지 가능한 수. 아래 절차에서는 사용자 정의 매크로 조명 및 탐지 시스템 (그림 1)
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결과
그림 1은 형광 강도, 스펙트럼, 수명 2 - 광자, 내 생명 공 초점 및 생물 발광 영상 등 여러 양식에 따라 이미지 수집의 목적을 위해 만들어진 생체 광학 영상 프로토 타입에서 보여줍니다. 또한,이 시스템에 통합 냉각 고감도 카메라와 고성능 레이저 라인은 특히 독소루비신 형광의 생체 검출을위한 상용 광학 이미징 시스템 11에 비해 높은 반면 형광 이미지를 얻을 수 있습니다. 따라서,이 시스템은 생체 내에서 HerDox의 평가에서 여러 보완적인 데이터 포인트를 얻기 위해 본 연구에 사용 중요했습니다.
그림 2에서와 같이 높은 종양 형광 HerDox의 전신 배달 후 일반적으로, 그것의 종양 우선적으로 타겟팅 나타내는 것입니다. 골격 근육에서 발견 형광 비정형하고 이리저리 발생할 수 있습니다주입 절차 미터 이상 (즉, .......
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토론
DOX 형광 종양이 피하 때 멀티 영상을 이용하여 생체 내에서 탐지 가능한 할 수 있습니다. 그러나 HerDox의 치료 적 용량 (0.004 ㎎ / ㎏)의 단일 복용 후 아래의 감지 임계 값입니다. 반면, 7 매일 주사 (7 일 1x/day) 후, 입자의 종양의 축적과 보존 Dox가 형광의 시각화를 가능하게하기에 충분합니다.
독스 또는 클린 기술이 사용되는 생체 내 이미징을위한 다른 형광 물질로 작업 할 때 매우 중요합니다. 영상은 Dox가 외부 또는 내부 있는지 여부를 차별하지 않고 피부의 바깥에 형광을 감지하므로 마우스의 외부에 드립은 피해야한다. 마찬가지로, 장갑 독스 오염함으로써 잘못된 형광 검출의 원인, 동물 처리하는 동안 마우스의 외부에 형광 자국을 남길 수 있습니다.
멀티 모드 광 시스템,레이저 빔은 HerDox의 자극을 위해 사용됩니다. 레이저 빔은 일반적으로 가우시안 프로파일을.......
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공개 사항
저자 다니엘 Farkas의는 스펙트럼 분자 영상의 회장이다. 나머지 저자는 더 경쟁 이익이 없습니다.
감사의 글
이 작품은 건강 / 국립 암 연구소 (R01CA129822 및 R01CA140995)의 국립 연구소에서 LKM-K에 교부금에 의해 투자되었다. 박사 메디나 Kauwe 지속적인 지원을 위해 C. 레이, M. M-Kauwe 및 D. Revetto을 감사드립니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 형광 레이저 스캐닝 컨포칼 현미경 | Leica | SPE | |
| In Vivo 광학 이미저 | 스펙트럼 분자 이미징 | 멀티모드 In Vivo 광학 이미저 | |
| 독소루비신-HCl | Sigma-Aldrich | D4035 | |
| 누드(NU/NU) 마우스, 암컷, 6-8주 | Charles River | 스트레인 코드 088 | |
| MDA-MB-435 인간 HER2+ 종양 세포 | NCI-Frederick Cancer DCTD 종양/세포주 저장소 | 0507292 | |
| 3/10cc 인슐린 주사기 U-100(29G x 1/2" Ultra-FineIV 영구 부착 바늘 | BD | 309301 | |
| Delta T 챔버 | 포함) Bioptechs | 04200417B |
참고문헌
- Agadjanian, H., Chu, D., et al. Chemotherapy Targeting by DNA Capture in Viral Protein Particles. Nanomedicine. 7 (3), 335-352 (2012).
- Agadjanian, H., Ma, J., et al. Tumor detection and elimination by a targeted gallium corrole. Proc. Natl. Acad. Sci....
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재인쇄 및 허가
