이 프로토콜은 요오드와 녹말 포도당 분자 사슬 사이의 복잡한의 형성에 의존 넣어 비색법을 통해 고 설명합니다. 요오드는 아밀로스와 아밀로펙틴 내 긴 사슬 모두와 복합체를 형성한다. 전분 시료에 요오드를 첨가 한 후, 아밀로오스와 아밀로펙틴의 최대 흡수는 각각 620 및 550 nm에서 발생한다. 아밀로스 / 아밀로펙틴의 비율은 620 및 550 nm의 흡광도 값의 비율을 추정하고 특정한 알려진 농도는 흡수 값에 대해 도시 된 표준 곡선에 비교를 할 수있다. 이것은 높은 처리량은, 저렴 방법은 감자 클론의 많은 개체군의 평가를 허용 신뢰성과 재현성이다.
Abstract
이 프로토콜은 요오드와 녹말 포도당 분자 사슬 사이의 복잡한의 형성에 의존 넣어 비색법을 통해 고 설명합니다. 요오드는 아밀로스와 아밀로펙틴 내 긴 사슬 모두와 복합체를 형성한다. 전분 시료에 요오드를 첨가 한 후, 아밀로오스와 아밀로펙틴의 최대 흡수는 각각 620 및 550 nm에서 발생한다. 아밀로스 / 아밀로펙틴의 비율은 620 및 550 nm의 흡광도 값의 비율을 추정하고 특정한 알려진 농도는 흡수 값에 대해 도시 된 표준 곡선에 비교를 할 수있다. 이것은 높은 처리량은, 저렴 방법은 감자 클론의 많은 개체군의 평가를 허용 신뢰성과 재현성이다.
Introduction
감자 괴경의 신선한 무게의 약 80 %가 물이며, 거의 모든 남아있는 건조 물질의 전분 1입니다. 나머지 동안 아밀로스 전분 (70 %)의 대부분은, 아밀로펙틴으로 구성된다. 아밀로스와 아밀로펙틴의 비율은 전분의 물성을 좌우하는 가장 중요한 속성이다. 아밀로펙틴 알파 1-6 분기 2 선형 알파 1-4 체인 동안 아밀로스는 선형 알파 1-4 포도당 체인입니다. 요오드 등의 방법 바인딩, 시차 주사 열량계 (DSC)는, 고성능 크기 배제 크로마토 그래피 (HPSEC) 및 콘 카나 발린의 상호 작용은 다양한 작물 3,4 전분 판별을 위해 개발되었다. 각 프로토콜은 어려운 한 번에 다수의 샘플을 계량하는 확장 할 만드는 특별한 기술과 장비가 필요합니다. 우리가 여기서 제시하는 방법은 바인딩 듀얼 파장 요오드 Hovenkamp-Hermelink 등.5에서 수정 된 프로토콜입니다스테인드 전분 과립에 따라 방법. 다른 대이 방법의 장점은 정제하지 않고 원료 전분 아밀로스 판별 및 메서드 4,6의 정밀도를 높이기 위해 이중 파장 시스템의 사용을 포함한다.
Protocol
1. 감자 덩이 식물의 전분에서 아밀로오스 결정 껍질과 작은 큐브로 신선한 덩이 줄기를 잘라. 작은 갈색 봉투에 감자 큐브를 놓고 C. -80 °에서 하룻밤 저장 나일론 가방과 동결 건조 감자 조각을 전송합니다. 동결 건조 후, 박격포와 유 봉 또는 와일리 밀을 사용하여 분말로 감자 샘플을 갈기. 50 ㎖ 튜브에, 동결 건조, 지상 괴경 20-30 mg의 샘플을 추가한다. …
Representative Results
다른 아밀로오스 / 아밀로펙틴 농도 솔루션의 숨겨진 데이터를 구축 표준 곡선은 0.7에서 1.6 (표 1)에 이르기까지 약 흡수 비율을 보여줍니다. 이러한 데이터로부터 선형 회귀 추세선 나중에 동결 건조 감자 샘플 아밀로스 함량 (도 1)를 추론하는 데 사용된다. 공장의 생산 환경은 감자 괴경 7 아밀로스 함량에 대한 몇 가지 효과가 있습니다. 두…
Discussion
감자 괴경의 아밀로스 함량은 일반적으로 20 ~ 35 % 7,8 범위. 가장 값이 범위를 벗어나는 경우, 이러한 오류 가능성 고려 : 1) 원시 데이터가 아밀로오스 / 아밀로펙틴 표준 곡선의 건설 대신 숨겨진 데이터를 사용했다가, 2) 원시 데이터는 아밀로오스의 결정 대신에 숨겨진 데이터를 사용 하였다 / 아밀로펙틴 감자 샘플에서 비율, 또는 3) 해석에 사용하는 물이 충분히 순수하지 않았다. 우리?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 연구를위한 자금 조달은 USDA-ARS 연구원 프로그램 및 USDA 작물 유전자 원위원회에 의해 부분적으로 제공되었습니다.
Fajardo, D., Jayanty, S. S., Jansky, S. H. Rapid High Throughput Amylose Determination in Freeze Dried Potato Tuber Samples. J. Vis. Exp. (80), e50407, doi:10.3791/50407 (2013).