Rápida y alto rendimiento La amilosa Determinación de Freeze Dried papa Muestras
Summary
Este protocolo describe un método colorimétrico de alta a través de poner que se basa en la formación de un complejo entre el yodo y cadenas de moléculas de glucosa en el almidón. El yodo forma complejos con tanto la amilosa y la amilopectina dentro de cadenas largas. Después de la adición de yodo a una muestra de almidón, la absorción máxima de la amilosa y la amilopectina se produce a 620 y 550 nm, respectivamente. La relación amilosa / amilopectina puede estimarse a partir de la relación de los valores de absorbancia 620 nm y 550 y la comparación de ellos con una curva patrón en la que concentraciones específicas conocido se representan frente a los valores de absorción. Este alto rendimiento, método barato es confiable y reproducible, lo que permite la evaluación de grandes poblaciones de clones de papa.
Abstract
Este protocolo describe un método colorimétrico de alta a través de poner que se basa en la formación de un complejo entre el yodo y cadenas de moléculas de glucosa en el almidón. El yodo forma complejos con tanto la amilosa y la amilopectina dentro de cadenas largas. Después de la adición de yodo a una muestra de almidón, la absorción máxima de la amilosa y la amilopectina se produce a 620 y 550 nm, respectivamente. La relación amilosa / amilopectina puede estimarse a partir de la relación de los valores de absorbancia 620 nm y 550 y la comparación de ellos con una curva patrón en la que concentraciones específicas conocido se representan frente a los valores de absorción. Este alto rendimiento, método barato es confiable y reproducible, lo que permite la evaluación de grandes poblaciones de clones de papa.
Introduction
Aproximadamente el 80% del peso fresco de un tubérculo de la patata es agua; casi la totalidad de la materia seca restante es el almidón 1. La mayor parte del almidón (70%) se compone de amilopectina, mientras que el resto es amilosa. La relación entre amilosa y amilopectina es la propiedad más importante que influye en las propiedades físicas del almidón. La amilosa es una cadena lineal de glucosa alfa 1-4, mientras que la amilopectina es una lineal cadena alfa 1-4 con alfa 1-6 ramas 2. Métodos como el yodo vinculante, calorimetría diferencial de barrido (DSC), el tamaño de alto rendimiento cromatografía de exclusión (HPSEC) y concanavalina A interacciones se han desarrollado para la determinación del almidón en diferentes especies de cultivo 3,4. Cada protocolo requiere de habilidades y equipos especiales, por lo que es difícil de escalar para cuantificar numerosas muestras a la vez. El método que aquí presentamos es un protocolo modificado de Hovenkamp-Hermelink et al. 5, que es una unión de doble longitud de onda de yodométodo basado en los gránulos de almidón teñidos. Las ventajas de este método frente a otros incluyen la determinación de amilosa de almidón en bruto sin purificar y el uso del sistema de doble longitud de onda para aumentar la precisión del método de 4,6.
Protocol
Representative Results
Discussion
El contenido de amilosa en tubérculos de patata normalmente oscila entre 20-35% 7,8. Si la mayoría de los valores están fuera de este rango, considerar estos posibles errores: 1) datos brutos se utilizan en lugar de los datos blanqueó para la construcción de la curva estándar de amilosa / amilopectina; 2) datos brutos se utilizan en lugar de los datos blanqueó para la determinación de la amilosa / ratios de amilopectina de las muestras de patata, o 3) el agua utilizada para el análisis no era lo sufi…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
El financiamiento para esta investigación fue proporcionado en parte por el Programa de Investigación Asociado USDA-ARS y el Comité de Germoplasma de Cultivos USDA.
Materials
| Reagents | |||
| Amylose | Sigma | 859656 | |
| Amylopectin | Sigma | A8515 | |
| Perchloric Acid 60% | Sigma | 311413 | Very hazardous to skin and eyes |
| Iodine | Sigma | 23214TD | |
| Potassium iodide | Sigma | 08625JE | |
| Equipment | |||
| Plate Reader | Bio Tek | ELx800 |
References
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