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의학

In situ Transverse lambeau de grand droit: un modèle de rat de myocutané ischémie reperfusion

Published: June 08, 2013
doi:
10.3791/50473
, ,
1Department of Surgery,Royal Infirmary of Edinburgh, 2Department of Nephrology,Royal Infirmary of Edinburgh

Summary

Transfert de tissu libre est largement utilisé dans la chirurgie reconstructive pour restaurer la forme et la fonction après résection oncologique et les traumatismes. Préconditionnement ce tissu avant la chirurgie peut améliorer les résultats. Cet article décrit une<em> In situ</em> Transversale lambeau de grand droit (TRAM) chez le rat comme un moyen de tester des stratégies de préconditionnement.

Abstract

Transfert de tissu libre est l'étalon-or de la chirurgie reconstructive pour réparer les défauts complexes ne se prêtent pas à des options locales ou celles nécessitant tissu composite. la lésion de reperfusion d'ischémie (IRI) est une cause connue d'une défaillance partielle du rabat libre et n'a pas de traitement efficace. L'établissement d'un modèle de laboratoire de cette blessure peut s'avérer coûteuse à la fois financièrement comme les grands mammifères sont classiquement utilisés et le savoir-faire requis par la difficulté technique de ces procédures nécessite généralement l'emploi d'un microsurgeon expérimenté. Cette publication et vidéo montrent l'utilisation efficace d'un modèle de l'IRI chez les rats qui ne nécessitent pas d'expertise de microchirurgie. Cette procédure est un modèle in situ d'un musculo-cutané abdominal transversal (TRAM) de rabat où pinces atraumatiques sont utilisés pour reproduire la lésion d'ischémie-reperfusion associée à ce type de chirurgie. Un scanner laser Doppler Imaging (LDI) est utilisé pour évaluer la perfusion du lambeau et le traitement de l'image software, Image J pour évaluer le pourcentage de survie de la peau de la zone comme un critère d'évaluation primaire de blessure.

Introduction

L'objectif de ce protocole est de démontrer un modèle fiable et reproductible de la lésions d'ischémie-reperfusion observé dans le transfert de tissu libre pour permettre aux stratégies d'intervention pour être étudiés.

Transfert de tissu libre se définit comme le détachement vasculaire d'un bloc isolé de tissus suivie par autogreffe de ce tissu avec anastomose des vaisseaux sectionnés du rabat sur des navires indigènes sur le site destinataire. La procédure est connue comme FTT et le tissu en cours de transfert appelée lambeau libre.

Transfert de tissu libre est la méthode de référence pour la correction des défauts, composites complexes où les options locales ne conviennent pas ou n'est pas disponible. 1-4 blessure d'ischémie-reperfusion (IRI) est inévitable dans le transfert de tissu libre, contribue à battre échec 5,6 et n'a pas un traitement efficace. Le caractère électif des chirurgies lambeau libre permet l'administration de pharagents CAL pour condition préalable contre IRI.

IRI résulte une baisse de débit à travers la microcirculation par l'activation endothéliale et le dysfonctionnement métabolique, 7 augmentation de la perméabilité capillaire et un oedème ultérieure interstitielle 7, afflux de cellules inflammatoires, 8 libération de médiateurs inflammatoires, les espèces réactives de l'oxygène 9 et dépôts de complément. 10 Ce processus complexe de l'hypoxie et une lésion de reperfusion ultérieure conduit finalement à la mort cellulaire. Un modèle de myocutané IRI permet l'efficacité des stratégies de préconditionnement sur les résultats cliniques à évaluer. Des travaux récents ont validé l'utilisation de modèles animaux d'études IRI comme un substitut de l'IRI humaine en comparant les changements moléculaires observés chez les sujets humains et les données animales existantes 10,11.

Le rat transverse rectus abdominis musculo-cutané (TRAM) lambeau a été décrite pour la première en 1987 en allemand et 12 en 199313 en anglais. Ce modèle a gagné une grande popularité 13-25 comme un modèle robuste pas cher pour étudier différentes stratégies pour réduire IRI associée avec transfert de tissu libre. 14,17-22 La majorité de ces études ont été conçues comme volets de TRAM unipedicled basé sur la profondeur, inférieure, . épigastrique pédicule 15-18,20-22 La comparaison des données de ces études est compliquée par l'utilisation de différentes îles cutanées moyenne (10,5 à 30 cm 2) et différentes longueurs de suivi post-opératoire (2 – 10 jours). Le pourcentage zone rabat nécrose totale moyenne dans le bras de contrôle de ces études est de 69 ± 6,2% (moyenne ± SEM). Il convient de noter que ces six documents emploient tout le muscle droit de l'abdomen comme support pour le pédicule vasculaire mais n'exposent pas, diviser et microanastomose ou serrer les vaisseaux. Zhang et al. 23 ont décrit un vrai, sans lambeau TRAM de rat basé sur les vaisseaux épigastriques supérieurs dans lequel le ftours ont été soulevées, des vaisseaux divisés et le lambeau musculocutané transférés et microanastomosed aux navires de l'aine. Cette technique difficile requis le microanastomosis de 0,45 – mm vaisseaux de calibre 0.5. Seuls quinze ont été effectués et de ceux-ci 67% ont survécu. 23 Le modèle décrit par Zhang et al. 23 est un excellent modèle pour le lambeau TRAM libre arbitre humain car il reflète vraiment la blessure subie au cours de FTT. Les autres modèles publiés d'un lambeau TRAM de rat reflètent plus fidèlement les blessures subies lors d'une TRAM pédiculé humaine, mais ne reflètent pas fidèlement l'IRI comme ces rabat à ne pas se soumettre à une période ischémique suivi d'une reperfusion comme le pédicule n'est jamais serré ou divisée et microanastomosis effectuée. Ce protocole et vidéo décrivent un nouveau modèle de transfert de tissu libre en utilisant le TRAM de rat dans lequel l'IRI est répliqué à l'aide microclamps. Cet article reproduit plus fidèlement IRI que les prédécesseurs de TRAM pédiculaires mais est techniquement plus facile que Performing le microanastomosis. Microclamps ont été largement utilisés par les chercheurs de transplantation de recréer IRI associée à une transplantation d'organe solide; 26-33 cependant, c'est la première fois qu'il a été décrit dans le lambeau TRAM de rat.

Protocol

Toute chirurgie est effectuée conformément aux lignes directrices énoncées par le Bureau d'accueil du Royaume-Uni et l'Université du Département des services vétérinaires d'Édimbourg. 1. Mise en place de procédure chirurgicale notes Changement dans scrubs propres chirurgicales, robe, chapeau gommage et un masque. Nettoyez toutes les surfaces de la salle d'opération, y compris l'équipement avec 2% de chlorhexidine à 70% d'alcool isopropylique. <…

Representative Results

des modèles de rats sont plus économiques que les grands modèles animaux, 36 sont résistantes aux maladies dans la nature et peuvent être manipulées génétiquement. Vrac animaux écorchés, comme les rongeurs, ont été pensé pour avoir un arrangement différent de l'approvisionnement sanguin cutané par rapport aux animaux écorchés fixes tels que les humains et les porcs. En vrac animaux à peau, la peau est alimenté principalement par des vaisseaux sanguins cutanés directs en passant par la …

Discussion

Modifications et le dépannage

Le protocole présenté ici reproduit l'IRI vu dans le transfert de tissu libre dans un système expérimental permettant de mieux comprendre ce processus et fournit un moyen de rechercher les moyens d'améliorer l'IRI et améliorer les résultats. Cela pourrait facilement être modifié pour produire une blessure plus grave si elle était fondée sur le non-dominante, profonde, inférieure pédicule épigastrique ou si le temps d'ischémie ont ét…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Ce travail a été financé par le Medical Research Council subvention G1000299.

L'auteur correspondant tient à remercier Gary Borthwick, Université d'Edimbourg, pour assister pendant la chirurgie.

Les auteurs tiennent à remercier conseils de Helen Douglas et Iain Mackay et de nous permettre d'observer leur épigastrique inférieure profonde (DIEP) de la procédure de rabat (Canniesburn Unité de Chirurgie Plastique, Glasgow Royal Infirmary, 84 Castle Street, Glasgow G4 0SF, Royaume-Uni).

Les auteurs tiennent également à remercier Gary Blackie à l'Université d'Edimbourg pour son aide dans la production de la vidéo pour cet article.

Materials

Name of Reagent/Material Company Catalog Number Comments
Moor LD12 laser doppler imaging scanner http://gb.moor.co.uk/product/moorldi2-laser-doppler-imager/8
Complete homeothermic blanket system with flexible probe. Small. 230 VAC, 50 Hz 507221F www.harvardapparatus.com
Graeffe forceps 0.8 mm tips curved 11052-10 2, http://www.finescience.de
Acland clamps 00398 V B-1 ‘V’ pattern clamps used on both artery and vein. http://www.merciansurgical.com/acland-clamps.pdf
Clamp applicator CAF-4 http://www.merciansurgical.com/acland-clamps.pdf
Gemini cautery unit 726067 www.harvardapparatus.com
Micro-vessel dilators 11 cm 0.3 mm tips 00124 D-5a.2 http://www.merciansurgical.com
Micro Jewellers Forceps 11cm angulated 00109 JFA-5b http://www.merciansurgical.com
Micro Jewellers Forceps 11 cm straight 00108 JF-5 http://www.merciansurgical.com
Acland Single Clamps B-1V (Pair) 396 http://www.merciansurgical.com
Micro Scissors Round Handles 15 cm Straight 67 http://www.merciansurgical.com
Iris Scissors 11.5 cm Curves EASY-CUT EA7613-11 http://www.merciansurgical.com
Mayo Scissors 14 cm Straight Chamfered Blades EASY-CUT EA7652-14 http://www.merciansurgical.com
Derf Needle Holders 12 cm TC 703DE12 http://www.merciansurgical.com
Ethilon 5-0 W1618 http://www.farlamedical.co.uk/
Vicryl rapide 6-0 W9913 http://www.millermedicalsupplies.com/
Instrapac – Adson Toothed Forceps (Extra Fine) 7973 http://www.millermedicalsupplies.com/
Castroviejo needle holders 12565-14 http://s-and-t.ne
Heat Lamp http://www.chicken-house.co.uk
Silicone sheeting 0.3 mm translucent http://www.silex.co.uk/
Image J software http://rsbweb.nih.gov/ij/
Zeiss OPMI pico http://www.zeiss.co.uk/
Operating microscope
Vet tech solution isofluorane rig http://www.vet-tech.co.uk/
Vet tech solution isofluorane rig http://www.vet-tech.co.uk/
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Edmunds, M., Wigmore, S., Kluth, D. In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury. J. Vis. Exp. (76), e50473, doi:10.3791/50473 (2013).
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