Прижизненные микроскопия кремастер микроциркуляции мыши М. предлагает уникальное и хорошо стандартизированы в естественных условиях модели для анализа периферической костного мозга миграции стволовых клеток.
В эпоху внутрисосудистых прикладных протоколов клеток в контексте регенеративной клеточной терапии, основные механизмы миграции стволовых клеток в nonmarrow ткани не были полностью выяснены. Мы описываем здесь технику прижизненной микроскопии применяется к мыши кремастер микроциркуляции для анализа периферической костного мозга миграции стволовых клеток в естественных условиях. Прижизненные микроскопия M. кремастер был ранее введен в области воспалительного исследования для прямого наблюдения лейкоцитов взаимодействия с эндотелием сосудов. Поскольку достаточно периферических стволовых и миграции клеток-предшественников включает подобные начальные шаги вдоль прокатки и фирма адгезии на эндотелиальных выстраиваются вполне возможно применить кремастер модель М. за соблюдение и количественной оценки взаимодействия intravasculary вводимых стволовых клеток с эндотелием. Поскольку различные химические компоненты могут быть выборочно применена к целевой твопрос простыми методами суперфузии, можно установить необходимые микросреды предпосылки, для первоначального набора стволовых клеток, которая пройдет в живом организме вне костного мозга.
Цель настоящей статьи заключается в описании технику прижизненной микроскопии (IVM) применяется на мыши кремастер микроциркуляции для непосредственного наблюдения и анализа периферической костного мозга миграции стволовых клеток.
Нынешняя концепция стволовых клеток на основе тканей и органов регенерации включает в ноль костного мозга стволовых клеток, полученных в поврежденной ткани 1. Важнейшим шагом для успешной миграции стволовых клеток включает стволовых взаимодействие клеток с местным эндотелия в поврежденного органа с последующим трансэндотелиальной миграции и в конечном итоге органов приживления 2. Прижизненные анализ этих стволовых клеток – эндотелия межклеточных взаимодействий образует идеальную параметр для количественного определения стволовых клеток на основе регенеративной реакции в различных патофизиологических настроек в естественных условиях. Кроме того, представляется предположить, что в будущем, прижизненной анализ миграционной способности конкретного стволовых клеток рopulations пределах стандартных условиях микроциркуляции, могут применяться до продвижения этих групп населения к дальнейшему клинических испытаний.
Прижизненные микроскопия была первоначально разработана для наблюдения и количественной оценки лейкоцитов-эндотелиальной взаимодействия клеток в естественных условиях в области воспалительного исследований 3. Первые успешные записи прижизненных исследований микроскопии сообщили Cohnheim уже в 19 веке, изучая языки и мезентерий лягушек под световым микроскопом 4. С момента своего первого использования IVM претерпела огромные технического развития, и сегодня некоторые существенные компоненты образуют предпосылки для того, чтобы выполнить количественную IVM: (I) тканей препараты, которые позволяют оптического доступа, (II) молекулярные зонды, которые могут быть обнаружены с помощью микроскопа, (III ) микроскоп подключен к системе обнаружения и (IV) систем анализа компьютерных основе, которые могут извлечь интересующие параметры из данных изображениянабор 4.
Разнообразие тканевых препаратов была введена для исследований КБПБ включая мезентериев и печени мыши и крысы 5 дорсальной кожных складок палат мыши 6 и хомяка, уха кролика и хомяка защечный мешок, чтобы назвать несколько.
Тем не менее, в дальнейшем мы сосредоточимся на мыши кремастер мышцы, представляющего собой идеальную ткань для прижизненных наблюдений, как подготовка и визуализация возможны с помощью хорошо стандартизированной хирургической процедуры, и вообще не возникает никаких проблем артефактов движения. Открытая подготовка кремастер мышцы проводилась впервые в 1970-х годах Баэз и его коллеги 7. Первоначально описано у крыс, было успешно принято также к мыши 8. После предыдущие исследования в основном сосредоточены на лейкоцитов взаимодействия с стенки сосуда, наша собственная группа недавно представила мыши подготовку кремастер мышц как ВалуаBLE инструмент для прямой визуализации и количественного анализа стволовых клеток эндотелия взаимодействий в пределах определенной микросреды 9. Различные субпопуляции стволовых клеток были изучены с использованием этой модели, в том числе мышей с-Kit + костного мозга стволовых клеток и мезенхимальных стволовых клеток, а также человеческого стволовых клеток CD + 133 костного мозга 10-12. После выделения клеток из костного мозга доноров и флуоресцентного мечения для визуализации, стволовые клетки селективно применяться в кремастер микроциркуляции с использованием артериальной инъекции через бедренную артерию, тем самым избегая клеток захвата в пределах удаленных органов. Кроме того, модель кремастер мышц особенно полезен, так как различные хемокины потенциально посреднические миграцию местного стволовых клеток в соответствующих настроек, могут местном применении к ткани-мишени по простой технологии суперфузии.
Прижизненные флуоресцентной микроскопии позволяет прямой визуализации и количественного анализа стволовых клеток эндотелия взаимодействий. Модель кремастер мышц является особенно полезным, так как микрохирургической экспозиции и методы прижизненной визуализации были хорошо и…
The authors have nothing to disclose.
Name of Reagent | Company | Catalog Number |
Carboxy-fluorescein diacetate succinimidylester (CFDA) | Invitrogen, Carlsbad, CA, USA | C1157 |
Rhodamine 6 G (1%) | Sigma-Aldrich, Munich, Germany | 83697 |
Ketamin (Ketanest) | Pfizer, Berlin, Germany | not available |
Xylacin (Rompun) | Bayer, Leverkusen, Germany | not available |
Dulbecco's Phosphate – buffered saline (PBS) | PAN Biotech, Aidenbach, Germany | P04-36500 |