Bestemmelse af tolerabel fedtsyrer og koleratoxin Koncentrationer anvendelse af humant tarmepitelceller og BALB / c musemakrofager

Summary

Vi satte os for at bestemme acceptable koncentrationer af tre fedtsyrer (oliesyre, linolsyre og linolensyre), og kolera toksin, der ikke væsentligt negativ indflydelse celleoverlevelse ved at opløse fedtsyrerne og toksin og bruge dem i celle overlevelse assays.

Abstract

Den positive rolle fedtsyrer i forebyggelse og lindring af ikke-humane og menneskelige sygdomme har været og fortsat være grundigt dokumenteret. Disse roller indflydelse på smitsomme og ikke-smitsomme sygdomme, herunder forebyggelse af inflammation samt slimhindeimmunitet til infektionssygdomme. Kolera er en akut tarm sygdom forårsaget af bakterien Vibrio cholerae. Det sker i udviklingslande, og hvis venstre ubehandlet, kan resultere i dødsfald. Mens vacciner til kolera findes, er ikke altid effektive og andre præventive metoder er nødvendige. Vi satte sig for at bestemme acceptable koncentrationer af tre fedtsyrer (olein, linol og linolensyre) og koleratoksin anvendelse af muse BALB / C makrofager og humane tarm epitelceller, hhv. Vi solubiliseret ovennævnte fedtsyrer og brugte celleproliferationsassays at bestemme koncentrationsområderne og specifikke koncentrationer af fedtsyrerne, der ikket skadelige for menneskers intestinal epitelcelle levedygtighed. Vi opløst choleratoksin og brugte det i en analyse at bestemme koncentrationsintervaller og specifikke koncentrationer af kolera toksin, der ikke statistisk nedsætte cellernes levedygtighed i BALB / C makrofager.

Vi fandt de optimale fedtsyrer koncentration skal være mellem 1-5 ng / ul, og at der for koleratoksin at være <30 ng per behandling. Disse data kan hjælpe fremtidige undersøgelser, der har til formål at finde en beskyttende slimhinde rolle fedtsyrer i forebyggelse eller lindring af kolera infektioner.

Introduction

De sundhedsmæssige fordele af fedtsyrer, såsom oliesyre, linolsyre og linolensyre har været og fortsætter med at blive dokumenteret. For eksempel hjælper oliesyre lette penetration af lipofile lægemidler i kroppen ^1,2, reducerer hjertekarsygdom med 24%, når stedet for mættede fedtsyrer ^3, og anvendes til behandling af metaboliske sygdomme såsom adrenoleukodystrophy ^4, som er en X-forbundet genetisk lidelse af fedtsyre stofskiftet. . Mens en nødvendig forløber for arachidonsyre i pattedyr, linolsyre (i modsætning oliesyre) ikke syntetiseres af kroppen og skal indhentes gennem eksterne kilder såsom ved hørfrø forbrug ⁵ Undersøgelser viser flere gavnlige sundhedsmæssige virkninger af linolsyre, såsom: anti-aging egenskaber til huden; ⁶ anti-inflammatoriske egenskaber, ⁷ reduceret spredning af kolorektal-og prostatakræft carcinomceller, ⁸ og evnen til at bekæmpe fedme og fremme of hjerte-kar-sundhed. ^9. linolensyre spiller en rolle i at reducere parodontal inflammation, ¹⁰ og modulerende tromboxan og prostacyclin biosyntese. ^11.

Arpita ¹² undersøgte indflydelsen af galde fedtsyrer og kolesterol på V. cholerae 's ekspression af virulensfaktorer og motilitet. Yamasaki ¹³ viste, at methanolekstrakt fra rød chili peber og andre naturligt udvundne forbindelser, potentielt kan nedsætte koleratoxin produktion. Det er tænkeligt at overveje brugen af ​​fødevarer, der er rige i ovenstående fedtsyrer (såsom hør frø) i forebyggelse og lindring af smittefarlige sygdomme såsom kolera gennem levere slimhindeimmunitet. Vi har udført undersøgelser til at opløse fedtsyrer og bestemme, ved hjælp celleproliferationsassays den maksimale koncentration af fedtsyrer, humane tarmepitelceller kan tolerere uden skadelige virkninger på cell levedygtighed. Vi antager, at oliesyre, linolsyre og linolensyre giver en gavnlig virkning på cellelevedygtighed ved lavere koncentrationer, men at ved højere koncentrationer vil de være toksisk for cellerne. Vi har også solubiliseret koleratoksinet og bestemmes den maksimale koncentration af kolera toksin, BALB / C mus makrofager kan tåle uden et signifikant fald i cellelevedygtighed. Vi hypotesen en toksisk virkning af kolera-toksin på cellelevedygtighed, selv ved meget lavt niveau. Metoden til at opløse en kolera-toksin og bruger det til at bestemme den maksimale toksin, at cellerne kan tåle uden et signifikant fald i overlevelsesevne giver en fordel for fremtidige undersøgelser. For eksempel kan en kombination af de ovennævnte metoder anvendes til at bestemme, om fedtsyrer giver celler med slimhindeimmunitet mod kolera infektioner. Til de bedste af vores viden, er denne rationelle og metode ikke er blevet udforsket.

Vi discuss hvordan vores foreløbige data kan bruges i senere undersøgelser at afgøre, om oliesyre, linolsyre og linolensyre giver celler med slimhindeimmunitet mod kolera infektion.

Protocol

1.. Tissue Culture Brug Mus musculus makrofager (BALB / c-mus) for koleratoksin bestemmelser. Oprindeligt kultur hele M. musculus celler efter sælgers anvisninger. Propagate BALB / c mus celler i Dulbeccos modificerede Eagles medium med L-glutamin afsluttet med 10% kalvefosterserum og 1% antibiotika / antimykotika eller RPMI 1640 basismediet suppleret med 10% føtalt bovint serum, 5% L-glutamin og 1 % antibiotikum / antimykotikum reagens. Grow celler i 75 cm2 …

Representative Results

Bestemmelse af optimale koncentration af fedtsyrer Den optimale koncentration for fedtsyrer er defineret som den maksimale koncentration, ved hvilken cellevækst er sammenlignelig med eller overstiger værdien af ​​kontrolceller, med relativt lav variation i resultaterne. At bestemme den optimale koncentration af oliesyre blev linolsyre og linolensyre celler indledningsvis behandles med varierende koncentrationer af hver fedtsyre i store intervaller og senere med små intervaller. F…

Discussion

Antydning af koncentration af fedtsyrer og koleratoxin

Mens den nøjagtige mekanisme for, hvordan fedtsyrer forbedre slimhindeimmunitet er ukendt, har flere undersøgelser forsøgt at undersøge deres gavnlige virkninger. Vores undersøgelse har til formål at give metode til at bestemme den maksimale koncentration af fedtsyrer, at celler kan tåle såvel som den maksimale koncentration af kolera toksin, at celler kan tolerere uden en betydelig indflydelse på celle overlevelse.

<p class="j…

Materials

			Cells/Reagent
Mus musculus macrophages	ATCC	ATCC RAW 264.7
Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium	ATCC	30-2002
L-glutamine	ATCC	30-2115
Fetal bovine serum	Bio-west	S0250
Antibiotic/antimycotic	Hyclone	SV3007901
Human intestinal epithelial cells	ATCC	ATTC CCL-241
HybriCare media	ATCC	46-X
Oleic Acid	Sigma-Aldrich	O1008
Linoleic Acid	Sigma-Aldrich	L-1376
Linolenic Acid	Sigma-Aldrich	L-2376
Cholera toxin	Sigma-Aldrich	C8052
			Equipment
BD Falcon 96-Well Cell Culture Plates	BD Biosciences	351172
Spectrophotometer with Dynex Revelations 4.22 software	Dynex	91000101