Bestimmung der tolerierbaren Fettsäuren und Cholera Toxin-Konzentrationen mit menschlichen Darm-Epithelzellen und BALB / c Maus-Makrophagen
Summary
Wir wollten tolerierbaren Konzentrationen von drei Fettsäuren (Ölsäure, Linolsäure und Linolensäure) und Cholera-Toxin nicht wesentlich und nachteilig beeinflussen hat das Überleben der Zelle durch das Lösen der Fettsäuren und das Toxin und mit ihnen in das Überleben der Zelle Assays zu bestimmen.
Abstract
Die positive Rolle von Fettsäuren in der Prävention und Linderung von nicht-menschlichen und menschlichen Krankheiten wurden und weiterhin umfassend dokumentiert werden. Diese Rollen sind Einflüsse auf infektiösen und nicht-infektiösen Krankheiten einschließlich Prävention von Entzündungen sowie Schleimhaut-Immunität gegen Infektionskrankheiten. Cholera ist eine akute Darm-Erkrankung, die durch das Bakterium Vibrio cholerae verursacht wird. Es tritt in den Entwicklungsländern, und wenn sie unbehandelt, kann zum Tod führen. Während Impfstoffe gegen Cholera existieren, sind sie nicht immer effektiv und vorbeugende Methoden erforderlich sind. Wir wollten tolerierbaren Konzentrationen von drei Fettsäuren (Ölsäure, Linolsäure und Linolensäure) und Cholera-Toxin mit der Maus BALB / C Makrophagen und humanen intestinalen Epithelzellen, bzw. zu bestimmen. Wir solubilisiert die oben genannten Fettsäuren und verwendet Zellproliferationsassays die Konzentrationsbereiche und spezifische Konzentrationen der Fettsäuren, die nicht bestimment schädlich für die menschliche Darm-Epithelzellen Lebensfähigkeit. Wir solubilisiert Cholera-Toxin und benutzte es in einem Test, um die Konzentrationsbereiche und spezifische Konzentrationen von Cholera-Toxin, die nicht statistisch nicht verringern die Lebensfähigkeit der Zellen in BALB / C Makrophagen bestimmen.
Wir fanden die optimale Fettsäure-Konzentrationen zwischen 1-5 ng / ul, und dass für die Cholera-Toxin auf <30 ng pro Behandlung sein. Sein Diese Daten können helfen zukünftige Studien, die eine schützende Schleimhaut Rolle Fettsäuren in der Prävention oder Linderung von Cholerainfektionen finden sollen.
Introduction
Die gesundheitlichen Vorteile von Fettsäuren, wie Ölsäure, Linolsäure und Linolensäure waren und sind weiterhin zu dokumentieren. Zum Beispiel hilft Ölsäure erleichtern das Eindringen von lipophilen Arzneistoffen im Körper 1,2 reduziert koronaren Herzerkrankung um 24%, wenn für gesättigte Fettsäuren 3 substituiert ist, und dient dazu, Stoffwechselerkrankungen wie Adrenoleukodystrophy 4, die eine ist, X-chromosomale behandeln genetische Störung des Fettsäurestoffwechsels. . Während eine notwendige Vorstufe für Arachidonsäure in Säugetieren, Linolsäure (anders als Ölsäure) wird nicht vom Körper synthetisiert und muss durch externe Quellen wie zB durch Leinsamen Verbrauch erzielt werden 5 Studien zeigen mehrere positive Auswirkungen auf die Gesundheit von Linolsäure wie: Anti-Aging-Eigenschaften für die Haut; 6 entzündungshemmende Eigenschaften; 7 reduzierte Proliferation von Darm-und Prostata-Karzinom-Zellen; 8 und die Fähigkeit zur Bekämpfung von Adipositas und Förderung of Herz-Kreislauf-Gesundheit. 9 Linolensäure spielt eine Rolle bei der Verringerung der parodontalen Entzündung, 10 und modulierende Thromboxan und Prostacyclin-Biosynthese. 11
Arpita 12 untersuchten den Einfluss der Galle Fettsäuren und Cholesterin auf V. cholerae 's Ausdruck von Virulenzfaktoren und Beweglichkeit. Yamasaki 13 angedeutet, dass Methanol-Extrakt aus roten Chilischoten und anderen natürlich extrahierten Verbindungen können möglicherweise verringern Cholera-Toxin-Produktion. Denkbar ist es, die Verwendung von Lebensmittel-Produkten, die reich an den oben genannten Fettsäuren (wie Leinsamen) bei der Vorbeugung und Linderung von Infektionskrankheiten wie Cholera durch die Bereitstellung von Schleimhaut-Immunität sind zu berücksichtigen. Wir haben Untersuchungen an Fettsäuren löslich zu machen und zu bestimmen, unter Verwendung Zellproliferationsassays, die maximale Konzentration der Fettsäuren, die humanen intestinalen Epithelzellen ohne nachteilige Auswirkungen auf ce vertragenll Lebensfähigkeit. Wir vermuten, dass Öl-, Linol-und Linolensäure eine positive Wirkung auf die Lebensfähigkeit der Zellen bei niedrigeren Konzentrationen enthalten, aber dass bei höheren Konzentrationen werden sie für die Zellen toxisch. Wir haben auch die gelösten Cholera-Toxin und bestimmt die maximale Konzentration von Cholera-Toxin, dass BALB / C Maus-Makrophagen können, ohne einer signifikanten Abnahme der Lebensfähigkeit der Zellen zu tolerieren. Wir vermuten, eine toxische Wirkung von Cholera-Toxin auf die Lebensfähigkeit der Zellen auch bei sehr niedrigen Niveau. Das Verfahren zur Solubilisierung eine Cholera-Toxin und benutzen, um die maximale Menge des Toxins, dass die Zellen ohne einer signifikanten Abnahme der Überlebensfähigkeit tolerieren bestimmen stellt einen Vorteil für künftige Studien. Zum Beispiel kann eine Kombination der oben genannten Methoden zu bestimmen, ob Zellen bereitzustellen Fettsäuren mit Schleimhaut-Immunität gegen Cholera Infektionen. Nach bestem Wissen versichern wir, hat dies rational und Methodik nicht erforscht worden.
Wir discuss wie unsere vorläufigen Daten in späteren Untersuchungen kann verwendet werden, um festzustellen, ob Öl-, Linol-und Linolensäure bieten Zellen mit Schleimhaut-Immunität gegen Cholera-Infektion.
Protocol
Representative Results
Discussion
Tipps der Konzentration von Fettsäuren und Cholera Toxin
Zwar ist der genaue Mechanismus, wie Fettsäuren verbessern Schleimhaut-Immunität ist unbekannt, haben mehrere Studien versucht, ihre positiven Wirkungen zu untersuchen. Unsere Studie soll Methode bereitzustellen, um die maximale Konzentration an Fettsäuren, die Zellen als auch die maximale Konzentration von Choleratoxin tolerieren kann, dass Zellen ohne einen signifikanten Einfluß auf das Überleben der Zelle zu bestimmen tolerieren….
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Wir danken Dr. Paula Cobos und Evros Vassiliou für Labor-Unterstützung und die Bereitstellung der Maus-Makrophagen sind. Wir danken auch unserem Labor Manager Richard Criasia für Beratung und Hilfe mit Materialien. Schließlich danken die Autoren Ramanpreet Kaur für die Hilfe bei Videoproduktion.
Materials
| Cells/Reagent | |||
| Mus musculus macrophages | ATCC | ATCC RAW 264.7 | |
| Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium | ATCC | 30-2002 | |
| L-glutamine | ATCC | 30-2115 | |
| Fetal bovine serum | Bio-west | S0250 | |
| Antibiotic/antimycotic | Hyclone | SV3007901 | |
| Human intestinal epithelial cells | ATCC | ATTC CCL-241 | |
| HybriCare media | ATCC | 46-X | |
| Oleic Acid | Sigma-Aldrich | O1008 | |
| Linoleic Acid | Sigma-Aldrich | L-1376 | |
| Linolenic Acid | Sigma-Aldrich | L-2376 | |
| Cholera toxin | Sigma-Aldrich | C8052 | |
| Equipment | |||
| BD Falcon 96-Well Cell Culture Plates | BD Biosciences | 351172 | |
| Spectrophotometer with Dynex Revelations 4.22 software | Dynex | 91000101 |
References
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