Определение допустимого жирные кислоты и концентрации токсина холеры с использованием человеческих клеток эпителия кишечника и BALB / C макрофаги мыши
Summary
Мы решили определить допустимые концентрации трех жирных кислот (олеиновая, линолевая и линоленовая кислоты) и холерного токсина, который не значительно и отрицательно повлиять на выживаемость клеток путем растворения жирных кислот и токсинов и их использование в анализе выживаемости клеток.
Abstract
Положительная роль жирных кислот в профилактике и борьбе не-человека и болезни человека были и продолжают быть документированы. Эти роли включают в себя воздействие на инфекционные и неинфекционные заболевания, включая профилактику воспаления, а также слизистой оболочки иммунитет к инфекционным заболеваниям. Холера является острой кишечной болезни, вызванной бактерией холерный вибрион. Это происходит в развивающихся странах, и если его не лечить, может привести к смерти. В то время как вакцины холеры существуют, они не всегда эффективны и другие профилактические методы необходимы. Мы решили определить допустимые концентрации трех жирных кислот (олеиновая, линолевая и линоленовая кислоты) и холерного токсина с помощью мыши BALB / C макрофагов и человеческих эпителиальных клетках кишечника, соответственно. Мы солюбилизированного выше жирных кислот и использовали анализ пролиферации клеток для определения концентрации интервалов и конкретных значений концентрации жирных кислот, которые неT вредны для человеческого кишечного эпителия жизнеспособности клеток. Мы солюбилизированного холерного токсина и использовали его в анализе для определения концентрации интервалов и конкретных значений концентрации холерного токсина, которые не статистически снижение жизнеспособности клеток в линии BALB / C макрофагов.
Мы нашли оптимальную концентрацию жирных кислот составляет от 1-5 нг / мкл, и холерного энтеротоксина быть <30 нг на лечение. Эти данные могут помочь дальнейших исследований, направленных найти защитную слизистую роль жирных кислот в предотвращени или облегчени инфекции холеры.
Introduction
Польза для здоровья жирных кислот, таких как олеиновая, линолевая и линоленовая кислоты были и продолжают быть документированы. Так, например, олеиновая кислота помогает облегчить проникновение липофильных лекарственных средств в организме 1,2, уменьшает ишемической болезни сердца на 24% при замене насыщенных жирных кислот 3, и используется для лечения метаболических заболеваний, таких как Адренолейкодистрофия 4, который Х-хромосомой генетических нарушений метаболизма жирных кислот. . Хотя необходимо предшественником арахидоновой кислоты у млекопитающих, линолевая кислота (в отличие от олеиновая кислота) не синтезируется организмом и должны быть получены с помощью внешних источников, например, потребление семян льна 5 Исследования показывают несколько полезных последствий для здоровья линолевой кислоты, такие как: омолаживающие свойства для кожи, 6 противовоспалительными свойствами; 7 сократил распространение толстой кишки и предстательной железы клетки карциномы; 8 и способность бороться с ожирением и продвижение Oе сердечно-сосудистых заболеваний. 9 линоленовая кислота играет важную роль в снижении воспаления пародонта, 10 и модуляции тромбоксана и простациклина биосинтез 11.
Arpita 12 изучено влияние желчных жирных кислот и холестерина на V. вибрион Выражение лица факторов вирулентности и подвижность. Ямасаки 13 указано, что метанол выписку из красного перца чили, и другие естественно извлекаются соединения, потенциально может уменьшить холерного токсина производства. Вполне возможно, рассмотреть вопрос об использовании пищевых продуктов, которые богаты жирными кислотами выше (например, семена льна) в профилактике и борьбе с инфекционными заболеваниями, как холера путем предоставления иммунитета слизистых оболочек. Мы провели исследования для солюбилизации жирных кислот и определить, используя пролиферации клеток анализы, максимальная концентрация жирных кислот, что человеческие эпителиальные клетки кишечника может допустить без вредного воздействия на сеLL жизнеспособность. Мы предположили, что олеиновая, линолевая и линоленовая кислоты обеспечивают благоприятное воздействие на жизнеспособность клеток при более низких концентрациях, но при более высоких концентрациях они будут токсичны для клеток. Мы также солюбилизированного холерного токсина и определяли максимальную концентрацию холерного токсина, что линии BALB / C макрофагов мыши могут переносить без существенного снижения жизнеспособности клеток. Мы предполагаем, токсическое действие холерного токсина на жизнеспособность клеток даже при очень низком уровне. Метод солюбилизации холерного токсина и его использование для определения максимального количества токсина, что клетки могут переносить без существенного снижения жизнеспособности обеспечивает преимущество для дальнейших исследований. Например, сочетание указанных выше методик можно использовать для определения того, жирные кислоты обеспечивают клетки слизистой иммунитет против инфекции холеры. Насколько нам известно, это рациональное и методология не была исследована.
Мы диscuss как наши предварительные данные могут быть использованы в более поздних исследованиях, чтобы определить, олеиновая, линолевая и линоленовая кислоты обеспечивают клетки слизистой иммунитет против инфекции холеры.
Protocol
Representative Results
Discussion
Предложению концентрация жирных кислот и холерного токсина
Хотя точный механизм того, как жирные кислоты повышения иммунитета слизистой неизвестна, несколько исследований предпринимались попытки исследовать их положительный эффект. В нашем исследовании направлен на ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы благодарим Паула Кобос и доктор Эвроса Василиу лаборатории за помощь и предоставление макрофагах мыши соответственно. Мы также благодарим нашего менеджера лаборатории Ричарда Criasia для руководства и помочь с материалами. Наконец, авторы благодарят Ramanpreet Каур за помощь в видео-продукции.
Materials
| Cells/Reagent | |||
| Mus musculus macrophages | ATCC | ATCC RAW 264.7 | |
| Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium | ATCC | 30-2002 | |
| L-glutamine | ATCC | 30-2115 | |
| Fetal bovine serum | Bio-west | S0250 | |
| Antibiotic/antimycotic | Hyclone | SV3007901 | |
| Human intestinal epithelial cells | ATCC | ATTC CCL-241 | |
| HybriCare media | ATCC | 46-X | |
| Oleic Acid | Sigma-Aldrich | O1008 | |
| Linoleic Acid | Sigma-Aldrich | L-1376 | |
| Linolenic Acid | Sigma-Aldrich | L-2376 | |
| Cholera toxin | Sigma-Aldrich | C8052 | |
| Equipment | |||
| BD Falcon 96-Well Cell Culture Plates | BD Biosciences | 351172 | |
| Spectrophotometer with Dynex Revelations 4.22 software | Dynex | 91000101 |
References
- Franceur, M. L., Golden, G. M., Potts, R. O. Oleic Acid: Its effects on stratum corneum in relation to (trans) dermal drug delivery. Pharm Res. 7 (6), 621-627 (1990).
- Tandon, P., et al. X-ray diffraction and spectroscopic studies of oleic acid-sodium acetate. Chem. Phys. Lipids. 109 (1), 37-45 (1990).
- Kris-Etherton, P. M. The debate about n-6 polyunsaturated fatty acid recommendations for cardiovascular health. Journal of the American Diabetic Association. 110 (2), 201-204 (2010).
- Rizzo, W. B., Phillips, M. W., et al. Adrenoleukodystrophy: dietary oleic acid lowers hexacosanoate levels. Annals of Neurology. 21 (3), 232-239 (1987).
- Bozan, B., Temelli, F. Chemical composition and oxidative stability of flax, safflower and poppy seed and seed oil. Bioresource Tech. 99, 6354-6359 (2005).
- Krein, S., Meldurm, H., Hawkins, S., Foy, V. Clinical benefits of conjugated linoleic acid to 3-dimensional wrinkle morphology. J. American Academy of Dermatology. 60 (3), AB30 (2009).
- Yu, Y., Correll, P. H., Heuvel, P. J. Conjugated linoleic acid decreases production of pro-inflammatory products in macrophages: Evidence for a PPARy dependent mechanism. Biochimica et Biophysica Acta. 1581 (3), 89-99 (2002).
- Palombo, J., Ganguly, A., Bistrian, B., Menard, M. The anti-proliferative effects of biologically active isomers of conjugated linoleic acid on human colorectal and prostatic cancer cells. Cancer Letters. 177, 163-172 (2002).
- Granda, M., Sinclair, A. J. Fatty acids and obesity. Current Pharm. Design. 15 (36), 4117-4125 (2009).
- Rosenstein, E., Kushner, L., Kramer, N., Kazandjian, G. Pilot study of dietary fatty acid supplementation in the treatment of adult periodontitis. Prostaglandins, Leukotrienes and Essential F.A. 68 (3), 213-218 (2003).
- Ferretti, A., Flanagan, V. Antithromboxane activity of dietary alpha-linolenic acid: a pilot study. Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. 54 (6), 451-455 (1995).
- Arpita, C., Pradeep, K. D., Chowdhury, R. Effect of Fatty Acids and Cholesterol Present in Bile on Expression of Virulence Factors and Motility of Vibrio cholera. Infection and Immunity. 75 (4), 1946-1953 (2007).
- Yamasaki, S., Asakura, M., Neogi, S. B., Hinenoya, A., Iwaoka, E., Aoki, S. Inhibition of virulence potential of Vibrio cholerae by natural compounds. Indian J. Med. Res. 133 (2), 232-239 (2011).
- Hendriksen, R. S., Price, L. B., et al. Population Genetics of Vibrio cholerae from Nepal in 2010: Evidence on the origin of the Haitian outbreak. mBio. 2 (4), 1-6 (2011).
- Schaeffler, A., Gross, P., et al. Fatty acid-induced induction of Toll-like receptor-4/nuclear factor-kappa B pathway in adipocytes links nutritional signaling with innate immunity. Immunology. 126 (2), 233-245 (2009).
