Fastsettelse av tolerable fettsyrer og koleratoksin Konsentrasjoner med humane Intestinal Epitelceller og BALB / c mus makrofager

Summary

Vi ville finne ut tålelig konsentrasjoner av tre fettsyrer (oljesyre, linolsyre og linolensyre) og kolera toksin som ikke betydelig negativ innvirkning celle overlevelse ved oppløsning av de fettsyrer og toksin og bruke dem i celle overlevelse analyser.

Abstract

Den positive rolle av fettsyrer i forebygging og lindring av humane og ikke-menneskelige sykdommer har vært og fortsetter å bli omfattende dokumentert. Disse roller inkluderer påvirkninger på infeksiøse og ikke-infeksiøse sykdommer, inkludert forebyggelse av betennelser samt mukosal immunitet mot infeksjonssykdommer. Cholera er en akutt intestinal sykdom forårsaket av bakterien Vibrio cholerae. Det forekommer i utviklingsland, og hvis venstre ubehandlet, kan føre til døden. Mens vaksiner for kolera eksisterer, er de ikke alltid effektive og andre forebyggende metoder er nødvendig. Vi ville finne ut tålelig konsentrasjoner av tre fettsyrer (oljesyre, linolsyre og linolensyre syrer) og kolera toksin ved hjelp av musen BALB / C makrofager og menneskelige intestinal epitelceller, henholdsvis. Vi solubilisert de ovennevnte fettsyrer og celleproliferasjon assays som brukes for å bestemme de konsentrasjonsområder og spesifikke konsentrasjoner av de fettsyrer som er not skadelige for menneskers tarmepitel celle levedyktighet. Vi solubilisert koleratoksin og brukt det i en analyse for å bestemme de konsentrasjonsområder og spesifikke konsentrasjoner av koleratoksin som ikke statistisk redusere cellenes levedyktighet i BALB / C-makrofager.

Vi fant de optimale fettsyrekonsentrasjoner å være mellom 1-5 ng / mL, og at det for koleratoksin å være <30 ng per behandling. Disse dataene kan hjelpe fremtidige studier som tar sikte på å finne en beskyttende slimhinne rolle for fettsyrer i forebygging eller lindring av kolera infeksjoner.

Introduction

De helsemessige fordeler av fettsyrer, som oljesyre, linolsyre og linolensyre har vært og fortsetter å være dokumentert. For eksempel bidrar oljesyre lette penetrering av lipofile legemidler i kroppen ^1,2, reduserer koronar hjertesykdom med 24% når erstatte mettede fettsyrer ^3, og benyttes for å behandle metabolske sykdommer slik som Adrenoleukodystrophy ⁴ som er en X-bundet genetisk forstyrrelse av fettsyremetabolisme. . Mens et nødvendig forstadium for arakidonsyre hos pattedyr, linolsyre (i motsetning oljesyre) ikke syntetiseres av kroppen og må innhentes gjennom eksterne kilder som for eksempel ved linfrø forbruk ⁵ Studier viser flere gunstige helseeffekter av linolsyre slik som: anti-aging egenskaper for huden, ⁶ anti-inflammatoriske egenskaper, ⁷ redusert spredning av colorectal og prostata karcinomceller, ⁸ og evnen til å bekjempe fedme og markedsføring of kardiovaskulær helse. ^9. linolensyre spiller en rolle i å redusere periodontal inflammasjon, ¹⁰ og modulering av tromboksan og prostacyclin biosyntese. ^11.

Arpita ¹² studert påvirkning av galle fettsyrer og kolesterol på V. cholerae 's uttrykk for virulens faktorer og bevegelighet. Yamasaki ¹³ indikerte at metanol ekstrakt fra rød chili peppers, og andre naturlig utvunnet forbindelser, kan potensielt redusere kolera toksin produksjon. Det er tenkelig å vurdere bruken av næringsmidler som er rike på de ovennevnte fettsyrer (slik som linfrø) i forebygging og bekjempelse av infeksjonssykdommer som kolera gjennom gi mukosal immunitet. Vi har utført undersøkelser for å oppløseliggjøre fettsyrer og å bestemme, ved hjelp av celleproliferasjon analyser, den maksimale konsentrasjonen av fettsyrer som humane intestinale epitelceller kan tolerere uten uheldige virkninger på cell levedyktighet. Vi antok at oljesyre, linolsyre og linolensyre og gi en gunstig effekt på cellelevedyktighet ved lavere konsentrasjoner, men at ved høyere konsentrasjoner vil de være toksisk for cellene. Vi har også solubilisert koleratoksin og bestemmes den maksimale konsentrasjonen av koleratoksin som BALB / C-mus-makrofager kan tolerere uten en betydelig reduksjon i cellelevedyktighet. Vi hypotese en toksisk effekt av koleratoksin på cellelevedyktighet selv ved svært lavt nivå. Fremgangsmåten til å oppløseliggjøre en koleratoksin og bruke den til å bestemme den maksimale mengde av det giftstoff som cellene kan tolerere uten en betydelig reduksjon i overlevelsesevne gir en fordel for fremtidige studier. For eksempel kan en kombinasjon av de ovennevnte metoder anvendes for å bestemme hvorvidt fettsyrer gir celler med mukosal immunitet mot kolera infeksjoner. Så langt vi kjenner til, har denne rasjonelle og metodikk ikke blitt utforsket.

Vi discuss hvordan våre foreløpige data som kan brukes i senere undersøkelser for å bestemme om oljesyre, linolsyre og linolensyre og gir celler med mukosal immunitet mot kolera-infeksjon.

Protocol

En. Tissue Culture Bruk Mus musculus makrofager (BALB / c mus) for koleratoksin bestemmelser. Utgangspunktet kultur alle M. musculus celler etter leverandørens anvisninger. Forplante BALB / c muse-celler i Dulbeccos modifiserte Eagles medium med L-glutamin gjennomført med 10% føtalt bovint serum og 1% antibiotika / antimykotiske eller RPMI 1640 basen media gjennomført med 10% føtalt bovint serum, 5% L-glutamin, og ett % antibiotika / antimycotic reagens. Dyrk celler …

Representative Results

Fastsettelse av Optimum Konsentrasjon av fettsyrer Den optimale konsentrasjon for fettsyrer er definert som den maksimale konsentrasjon ved hvilken cellevekst er sammenlignbar med eller høyere enn for kontroll-celler, med relativt lav variasjon i resultatene. For å bestemme den optimale konsentrasjon av oljesyre, linolsyre og linolensyre ble syrer celler innledningsvis behandlet med varierende konsentrasjoner av hver fettsyre i store trinn og senere med mindre trinn. Figur 1 …

Discussion

Forslag av Konsentrasjon av fettsyrer og koleratoksin

Mens den eksakte mekanismen for hvordan fettsyrer styrke slimhinnene immunitet er ukjent, har flere studier forsøkt å undersøke sine gunstige virkninger. Vår undersøkelse som mål å gi metode for å bestemme den maksimale konsentrasjon av fettsyrer som celler kan tåle, så vel som den maksimale konsentrasjonen av koleratoksin at cellene kan tolerere uten en betydelig innflytelse på celle-overlevelse.

For …

Materials

			Cells/Reagent
Mus musculus macrophages	ATCC	ATCC RAW 264.7
Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium	ATCC	30-2002
L-glutamine	ATCC	30-2115
Fetal bovine serum	Bio-west	S0250
Antibiotic/antimycotic	Hyclone	SV3007901
Human intestinal epithelial cells	ATCC	ATTC CCL-241
HybriCare media	ATCC	46-X
Oleic Acid	Sigma-Aldrich	O1008
Linoleic Acid	Sigma-Aldrich	L-1376
Linolenic Acid	Sigma-Aldrich	L-2376
Cholera toxin	Sigma-Aldrich	C8052
			Equipment
BD Falcon 96-Well Cell Culture Plates	BD Biosciences	351172
Spectrophotometer with Dynex Revelations 4.22 software	Dynex	91000101