Ли старение предотвращает или способствует туморогенез остается спорным. Поскольку химиотерапевтические препараты могут вызывать раковые клетки стареть, изучая старение имеет важное значение для предложения новых методов лечения. Однако, стандартный и широко используется β-галактозидазы анализа представлены основные недостатки. Мы предлагаем здесь Быстрый и чувствительный проточной цитометрии на основе анализа для количественной старения.
Клетки человека не бесконечно размножаться. От внешних и / или внутренних сигналов, клетки могут погибнуть или введите стабильной арест клеточного цикла называется старением. Несколько клеточные механизмы, такие, как укорочение теломер и аномальной экспрессии онкогенов митогенных, было показано, что причиной старения. Старение не ограничивается нормальными клетками; раковые клетки Сообщалось также, что стареют.
Химиотерапевтические препараты индуцируют старение в раковых клетках. Однако остается спорным ли старение предотвращает или способствует туморогенез. Как это в конечном итоге может быть конкретного пациента, Быстрый и чувствительный метод оценки старение в раковой клетке вскоре будет необходимо.
Для этого, стандартные β-галактозидазы анализа, используемые в настоящее время методы представлены основные недостатки: она занимает много времени и не чувствительна. Мы предлагаем здесь проточной цитометрии анализа на основе изучения старения на Ливе клеток. Этот тест дает преимущество в том, быстрый, чувствительный, и может быть соединен с иммунного различных клеточных маркеров.
С начала шестидесятых годов и его открытия и Хейфликом Moorhead, старение остается сотовая любопытства 1. Клетки человека не бесконечно размножаться и, по старению, Хейфликом и Мурхеде придумал клеточный процесс старения. Старение является стабильным клеточного цикла, в котором клетки остаются метаболически активными по сравнению с клеточной смерти. На сегодняшний день четыре клеточные механизмы, как было показано, чтобы вызвать старение: укорочение теломер, повреждение ДНК, хроматин возмущение, и аномальной экспрессии онкогенов митогенных 2. Это означает, что не только нормальные клетки, но и раковые клетки могут подвергаться старению 3. В самом деле, раковые клетки проходит старение было показано, представляет собой барьер для дальнейшего прогрессирования опухоли 4-5. Тем не менее, в нескольких докладах уже отметили, что, при определенных обстоятельствах, клеточное старение может также способствовать злокачественной 6-7. Изучение старения рака челLs собирается стать желание в исследовании рака в настоящее время используется в качестве химиотерапевтических препаратов может привести к старению раковых клеток не только в пробирке, но и в естественных условиях 8.
Мастер анализа исследовать на наличие стареющих клеток является β-галактозидазы анализа при кислом рН. Это гистохимическую анализа отражает возросшую в лизосомальных биогенеза, происходящих в самых стареющих клеток. Вкратце, экзогенный X-гал, применительно к клеткам, расщепляется с помощью β-галактозидазы, обогащенный лизосомах стареющие клетки, что приводит к синим цветом 9. Синий стареющие клетки могут быть количественно под ярким поле микроскопа. Хотя очень популярны, β-галактозидазы анализа представлены основные недостатки. Во-первых, этот анализ проводят на фиксированных клеток. Во-вторых, это отнимает много времени, потому что оно подразумевает Для количественной оценки степени старения путем подсчета значительно большим числом стареющие клетки под микроскопом. В-третьих, этот анализне чувствительна как дискриминацию между стареющими и не стареющие клетки полностью зависит от наблюдателя.
Здесь мы обсудим неиспользованными, быстрый и чувствительный цитометрии на основе анализа на предмет наличия живых стареющие клетки. Этот анализ основан на гидролизе проницаемые мембраны молекул 5-dodecanoylaminofluorescein ди-β-D-галактопиранозида (C 12-ФДГ), на β-галактозидазы, обогащенный стареющих клеток. После гидролиза и лазерным возбуждением, C 12 ФДГ испускает зеленую флуоресценцию и поэтому могут быть обнаружены с помощью проточной цитометрии, 10, 11. Обнаружение стареющие клетки через проточной цитометрии предлагает большое преимущество, что быстрого и чувствительного. Кроме того, обнаружение стареющих клеток методом проточной цитометрии могут быть связаны с обнаружением других клеточных маркеров. Этот анализ может быть использован для обнаружения стареющих клеток в популяции раковых клетках, обработанных с химиотерапией и может быть обычно установленна срезах тканей, после сотовые диссоциации, в клинике.
Мы представили здесь проточной цитометрии на основе количественного метода определения клеточного старения в живых клетках рака. Этот метод основан на использовании мембраны проницаемой соединения, C 12 ФДГ, и поэтому может быть использован в любом типов клеток и после различных…
The authors have nothing to disclose.
Мы благодарим SF 4206 ICORE (Университет Кана) для использования цитометрии объекта. JC получил пост-докторские стипендии Conseil d'де радиационной EDF и советом областного Нижней Нормандии. Эти данные, как часть проектов, финансируемых Ligue Nationale Contre Le Рак – Comités де л'Орн э дю кальвадоса.
Name of the Reagent | Company | Catalogue Number | Comments |
5-dodecanoylaminofluorescein di-β-D-galactopyranoside | Invitrogen | D-2893 | |
Dimethyl sulfoxide | Sigma | D2650 | |
Bafilomycin A1 | Sigma | B1793 | |
Doxorubicin | Sandoz | ||
Trypan blue | Sigma | T8154 | |
RPMI 1640 cell culture medium | Lonza | BE12-702 | |
Fetal calf serum | PAA Laboratories GmBH | A15 101 | |
Antibiotics | Gibco | 5290-018 | |
Gallios flow cytometer | Beckman Coulter | A94291 |