<em> OVO에서</em육종을위한 Xenograftmodel으로> CAM-분석
Summary
<em> OVO에서</em> 융모 막 (CAM)는 신선한 육종 파생 된 종양 조직들은 단일 세포 현탁액, 영구 및 임시 찬란 설립 육종 세포주에 이식합니다. 모델은 이식편 (생존, Ki67 확산 지수, 괴사, 침투) 및 호스트 (섬유 아세포의 침윤, 혈관 안쪽으로의 성장) 행동을 연구하는 데 사용됩니다.
Abstract
육종은 모든 새로운 치료법의 개발을 방해, 자연 이기종 매우 드문 질환이다. 육종 환자는이 질병에 대한 재현성과 낮은 비용 xenotransplant 모델을 개발하여 현재 관심을 설명하는 층화 한 후 맞춤 의학을위한 이상적인 후보입니다. 병아리 융모 막은 종 별 제한없이 이식 조직과 세포를 유지 할 수있는 자연 면역 결핍 호스트입니다. 또한, 그것은 쉽게 액세스, 조작 및 광학 및 형광 실체 현미경을 사용하여 몇 군데 있습니다. 조직학 더 이형 세포 상호 작용에 대한 자세한 분석을 할 수 있습니다.
이 프로토콜은 자세히 설명 신선한 육종 파생 된 종양 조직들은 단일 세포 현탁액, 영구 및 임시 찬란 설립 육종 세포주 (SAOS-2 SW1353)와 융모 막으로 접목 OVO에서. 병아리 생존 쥐ES는 75 %입니다. 모델은 이식편 (생존, Ki67 확산 지수, 괴사, 침투) 및 호스트 (섬유 아세포의 침윤, 혈관 안쪽으로의 성장) 행동을 연구하는 데 사용됩니다. 단일 세포 현탁액의 접목 지역화를 들어, ECM 젤 불활성 억제 물질에 비해 상당한 이점을 제공합니다. Ki67 확산 지수는 CAM의 표면에서 세포의 거리와 CAM, 치료 제품의 추가에 대한 시간 프레임을 결정하는 후자의 응용 프로그램의 지속 기간에 관련되어 있습니다.
Introduction
육종 치료 저항 1,2로 인해 높은 사망률을 가진 결합 조직의 드문 종양이다. 환자의 생존에 진행 그들의 낮은 연간 발생률, 자신의 폭 넓은 다양성 및 육종 세포가 체외 3,4의 문화를 열심히보고 있다는 사실에 의해 방해된다.
임상 치료 평가를위한 배양 세포의 사용은 체외에서 새로운, 분명히 활성 분자가 항상 임상 결과를 반영하지 않는 것으로 나타났습니다. 또한, 유전자 발현 배열에 의해 밝혀 게놈 변이는 항상 5-7 개별 환자에서 종양의 행동 특성에 상관하지 않습니다. 이러한 문제를 시도하고 해결하기 위해, 맞춤 의학은 이종 이식 모델에 8-12에 대한 증가 된 검색에 반영됩니다 중요성에 얻고있다.
생체 분석의는 C 사이의 복잡한 상호 작용을 반영하는 장점이 있습니다암 증식과 침윤 13에 필요한 ancer 세포와 고체 종양의 호스트 조직 환경. 현재 우리는 육종 14,15을위한 재현 이종 이식 모델로 리오 – Allantoic 막 분석 (CAM-분석)의 사용을 공부합니다. 이 분석은 널리 종양의 혈관 신생 16,17의 연구에 사용됩니다. 다른 연구는 서로 다른 프로토콜 18,19에 따라 성장 또는 혈관에 표시된 차이를 관찰하면서 문학에서는, 그러나, 우리는이 분석을 위해 다른 프로토콜을 발견했습니다.
이 문서에서 우리는 종양 이식, 종양 파생 된 단일 세포 현탁액과 전통 육종 세포 배양을 사용하여 세포 행동에 CAM-분석의 조건을 변화의 효과를 조사합니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
접종 수확 시간
예방 접종의 날이 ECM 젤 (36 캠의)에 SAOS2을 사용하여 수행 및 배아 발달의 날 5와 10 사이에서 변화시켰다 타이밍.
배양 9 일 전에, CAM는 지속적으로 우리가 적용 ECM 젤을 지원하기에 충분히 큰되지 않았습니다. 수확에서 종양 세포는 때때로 깊은 CAM에서 검색 할 수 있고, 일부 ECM 젤 샘플은 알부민 또는 CAM에 느슨한 거짓말을 하였다. 일 5, 6, ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SW1353 연골 세포주의 세포는 친절 교수 PCW Hogendoorn와 라이덴 대학, 네덜란드의 교수 J. Bovée에 의해 제공되었다. 우리는 우리의 프로토콜의 개요의 전문적인 드로잉 J. Mestach 및 G. Wagemans 우수한 기술 지원 및 G. 드 Bruyne 감사합니다.
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalog Number |
| Cell Line Nucleofector Kit V | Amaxa | VCA-1003 |
| collagenase 2 solution (500 U/ml RPMI 1640) | Sigma Aldrich | C6885 |
| DMEM | Invitrogen | 41965-039 |
| DMSO | Sigma | D8418 |
| Dnase solution | Sigma Aldrich | DN25 |
| G418 | Invitrogen | 11811031 |
| Matrigel | Sigma-Aldrich | E1270 |
| mouse primary monoclonal antibody Ki67 | Dako Denmark | MIB-1 |
| Paraformaldehyde | Fluka | D76240 |
| PBS | Invitrogen | 20012019 |
| PBSD | Invitrogen | 14040083 |
| peGFP-C1 vector | Clontech | 632470 |
| Penicillin/streptomycin | Invitrogen | 15140163 |
| RPMI | Invitrogen | 22409-015 |
| Trypsin-EDTA solution | Invitrogen | 25300054 |
| Vybrant cell-labeling DiI | Lifetechnologies | 22885 |
| Name of Equipment | Company | Catalog Number |
| Countess Automated Cell Counter | Invitrogen | C10227 |
| digital color camera | Leica | DFC 340 FX |
| Digital Egg Incubator | Auto Elex Co | R-COM 50 |
| FACS | BD Biosciences | FACSAriaIII |
| Gentlemacs C-Tube | Miltenyi Biotech | 130-093-237 |
| Gentlemacs Dissociator | Miltenyi Biotech | 130-093-235 |
| Gentlemacs Dissociator User Manual containing h_tumor protocol | Miltenyi Biotech | |
| semipermeable adhesive film (Suprasorb F) | Lohmann&Rauscher | 20468 |
| stereo fluorescence microscope | Leica | M205 FA |
| Tissue-Tek Film automated Coverslipper | Sakura | 6400 |
| ultraView Universal DAB Detection Kit | Ventana Medical Systems Inc | 760-500 |
| Ventana Automated Slide Stainer | Ventana Medical Systems | Benchmark XT |
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