<em> באוב</em> Chorioallantoic קרום (רמ"א) הוא מורכב עם רקמות טריות סרקומה הנגזרות סרטניים, השעיות התא בודדות שלהם, ושורות תאי סרקומה הוקמו כותרתו fluorescently קבועות וארעיות. המודל משמש ללמוד שתל (כדאיות, Ki67 מדד התפשטות, נמק, חדירה) ומארח (חדירה פיברובלסטים, ingrowth כלי דם) התנהגות.
סרקומה היא מחלה מאוד נדירה שהיא הטרוגנית בטבע, כל פוגעות פיתוח הטיפולים חדשים. חולי סרקומה הם מועמדים אידיאליים לרפואה אישית לאחר ריבוד, המסבירים את הריבית הנוכחית בפיתוח מודל xenotransplant לשעתק ועלות נמוכה למחלה זו. קרום chorioallantoic החומוס הוא מארח immunodeficient טבעי מסוגלים לקיים רקמות ותאים מורכבים ללא הגבלות מינים ספציפיות. בנוסף, ניתן לגשת בקלות, מניפולציות וצלם באמצעות stereomicroscopy אופטי וקרינה. היסטולוגיה נוספת מאפשרת ניתוח מפורט של אינטראקציות הסלולר heterotypic.
פרוטוקול זה מתאר בפירוט באובו השתלה של קרום chorioallantoic עם רקמות טריות סרקומה הנגזרות סרטניים, השעיות התא בודדות שלהם, וקווים קבועים וארעיים שכותרתו fluorescently הוקמו סרקומה סלולרי (Saos-2 וSW1353). עכברוש הישרדות החומוסes הוא עד 75%. המודל משמש ללמוד שתל (כדאיות, Ki67 מדד התפשטות, נמק, חדירה) ומארח (חדירה פיברובלסטים, ingrowth כלי דם) התנהגות. להשתלה מקומית של השעיות תא בודדות, ECM ג'ל מספק יתרונות משמעותיים על פני חומרי בלימה אינרטי. מדד ההתפשטות Ki67 קשור למרחק של התאים מפני שטח של CAM ואת משך הזמן של יישום ברמ"א, שהאחרון קביעת מסגרת זמן לתוספת של מוצרים טיפוליים.
סרקומה היא גידול נדיר של רקמות החיבור עם תמותה גבוהה בשל התנגדות 1,2 הטיפול. התקדמות בהישרדות חולה הקשתה על ידי שכיחותם הנמוכה השנתית, הגיוון הרחב שלהם, ואת העובדה שתאי סרקומה הם דיווחו להיות קשים לתרבות במבחנה 3,4.
השימוש בתאים בתרבית להערכת טיפול קליני גילו כי מולקולות חדשות, ככל הנראה פעילה במבחנה לא תמיד משקפות את התוצאות בסביבה הקלינית. יתר על כן, סטיות הגנום מתגלים על ידי מערכי ביטוי גנים הן לא תמיד קשורות למאפייני התנהגות סרטניים בחולה בודדת 5-7. על מנת לנסות ולפתור את הבעיות הללו, רפואה מותאמת אישית צברה בחשיבותו, אשר באה לידי ביטוי בחיפוש המוגבר לדגמי xenograft 8-12.
ב assay vivo יש את היתרון של המשקף הגומלין המורכב בין גתאי ancer וסביבת רקמת המארח בגידולים מוצקים, הנדרשים להתפשטות הסרטן והפלישה 13. נכון לעכשיו אנחנו לומדים את השימוש של assay ממברנה Chorio-allantoic (CAM-assay) כמודל לשחזור xenograft סרקומה 14,15. assay זה נעשה שימוש נרחב למחקר של אנגיוגנזה גידול 16,17. בספרות, לעומת זאת, מצאנו פרוטוקולים שונים עבור assay זה, בעוד שמחקרים אחרים שנצפו הבדל משמעותי בצמיחה או אנגיוגנזה על פי פרוטוקולים שונים 18,19.
במאמר זה אנו לחקור את ההשפעה של משתנה תנאים של CAM-assay על התנהגות תא סרטניים, באמצעות שתלי השעיות תא בודדות שמקורם בגידול בתרביות תאי סרקומה ומבוססות.
זמן של חיסון וקציר
תזמון היום של חיסון בוצע באמצעות SAOS2 בECM ג'ל (36 מצלמות) ונע בין יום התפתחות העוברי 5 ו -10.
לפני הדגירה יום 9, CAM לא באופן עקבי היה גדול מספיק כדי לתמוך ג'ל ECM אנחנו מוחלים. בקציר, …
The authors have nothing to disclose.
תאים משורת תאי כונדרוסרקומה SW1353 נמסרו באדיבותו של פרופ 'ד"ר PCW Hogendoorn ופרופ' ד"ר י בובי של אוניברסיטת ליידן, הולנד. אנו מודים לג' וג' Mestach Wagemans לקבלת סיוע טכני מעולה, וג' דה Bruyne לציור המקצועי של הסקירה של הפרוטוקול שלנו.
Name of Reagent | Company | Catalog Number |
Cell Line Nucleofector Kit V | Amaxa | VCA-1003 |
collagenase 2 solution (500 U/ml RPMI 1640) | Sigma Aldrich | C6885 |
DMEM | Invitrogen | 41965-039 |
DMSO | Sigma | D8418 |
Dnase solution | Sigma Aldrich | DN25 |
G418 | Invitrogen | 11811031 |
Matrigel | Sigma-Aldrich | E1270 |
mouse primary monoclonal antibody Ki67 | Dako Denmark | MIB-1 |
Paraformaldehyde | Fluka | D76240 |
PBS | Invitrogen | 20012019 |
PBSD | Invitrogen | 14040083 |
peGFP-C1 vector | Clontech | 632470 |
Penicillin/streptomycin | Invitrogen | 15140163 |
RPMI | Invitrogen | 22409-015 |
Trypsin-EDTA solution | Invitrogen | 25300054 |
Vybrant cell-labeling DiI | Lifetechnologies | 22885 |
Name of Equipment | Company | Catalog Number |
Countess Automated Cell Counter | Invitrogen | C10227 |
digital color camera | Leica | DFC 340 FX |
Digital Egg Incubator | Auto Elex Co | R-COM 50 |
FACS | BD Biosciences | FACSAriaIII |
Gentlemacs C-Tube | Miltenyi Biotech | 130-093-237 |
Gentlemacs Dissociator | Miltenyi Biotech | 130-093-235 |
Gentlemacs Dissociator User Manual containing h_tumor protocol | Miltenyi Biotech | |
semipermeable adhesive film (Suprasorb F) | Lohmann&Rauscher | 20468 |
stereo fluorescence microscope | Leica | M205 FA |
Tissue-Tek Film automated Coverslipper | Sakura | 6400 |
ultraView Universal DAB Detection Kit | Ventana Medical Systems Inc | 760-500 |
Ventana Automated Slide Stainer | Ventana Medical Systems | Benchmark XT |