<em> ओवो में</emसारकोमा के लिए एक Xenograftmodel रूप> सीएएम परख
Summary
<em> ओवो में</em> Chorioallantoic झिल्ली (सीएएम) ताजा सार्कोमा व्युत्पन्न ट्यूमर ऊतकों, उनकी एकल कक्ष निलंबन, और स्थायी और क्षणिक fluorescently लेबल स्थापित सार्कोमा सेल लाइनों के साथ grafted है. मॉडल भ्रष्टाचार (व्यवहार्यता, Ki67 प्रसार सूचकांक, परिगलन, घुसपैठ) और मेजबान (तंतुप्रसू घुसपैठ, संवहनी अंतर्वृद्धि) व्यवहार का अध्ययन करने के लिए प्रयोग किया जाता है.
Abstract
सारकोमा सभी नए उपचारों के विकास में बाधा, प्रकृति में विषम है कि एक बहुत ही दुर्लभ बीमारी है. सारकोमा रोगियों को इस रोग के लिए एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और कम लागत xenotransplant मॉडल को विकसित करने में वर्तमान ब्याज समझा, स्तरीकरण के बाद व्यक्तिगत दवा के लिए आदर्श उम्मीदवार हैं. लड़की chorioallantoic झिल्ली प्रजाति विशेष के प्रतिबंध के बिना grafted ऊतकों और कोशिकाओं को बनाए रखने में सक्षम एक प्राकृतिक immunodeficient मेजबान है. इसके अलावा, यह आसानी से पहुँचा छेड़छाड़ और ऑप्टिकल और प्रतिदीप्ति stereomicroscopy उपयोग imaged है. प्रोटोकॉल आगे heterotypic सेलुलर बातचीत का विस्तृत विश्लेषण की अनुमति देता है.
इस प्रोटोकॉल में विस्तार से वर्णन किया गया है ताजा सार्कोमा व्युत्पन्न ट्यूमर ऊतकों, उनकी एकल कक्ष निलंबन, और स्थायी और क्षणिक fluorescently लेबल स्थापित सार्कोमा सेल लाइनों (Saos -2 और SW1353) के साथ chorioallantoic झिल्ली की ग्राफ्टिंग ओवो में. लड़की अस्तित्व चूहातों 75% तक कर रहे हैं. मॉडल भ्रष्टाचार (व्यवहार्यता, Ki67 प्रसार सूचकांक, परिगलन, घुसपैठ) और मेजबान (तंतुप्रसू घुसपैठ, संवहनी अंतर्वृद्धि) व्यवहार का अध्ययन करने के लिए प्रयोग किया जाता है. एकल कक्ष निलंबन की ग्राफ्टिंग स्थानीयकृत लिए, ईसीएम जेल निष्क्रिय रोकथाम सामग्री से अधिक महत्वपूर्ण लाभ प्रदान करता है. Ki67 प्रसार सूचकांक सीएएम की सतह से कोशिकाओं की दूरी और सीएएम, चिकित्सकीय उत्पादों के अलावा के लिए एक समय सीमा निर्धारित करने के उत्तरार्द्ध पर आवेदन की अवधि से संबंधित है.
Introduction
सारकोमा चिकित्सा प्रतिरोध 1,2 के कारण एक उच्च मृत्यु दर के साथ संयोजी ऊतक का एक दुर्लभ ट्यूमर है. रोगी अस्तित्व में प्रगति उनके कम वार्षिक घटना, उनके व्यापक विविधता, और सार्कोमा कोशिकाओं इन विट्रो 3,4 में संस्कृति के लिए मुश्किल होने की सूचना है कि इस तथ्य से प्रभावित होता है.
पूर्व नैदानिक चिकित्सा मूल्यांकन के लिए संवर्धित कोशिकाओं का उपयोग इन विट्रो में नए, जाहिरा तौर पर सक्रिय अणुओं हमेशा नैदानिक सेटिंग में परिणामों को नहीं दर्शाती है कि पता चला है. इसके अलावा, जीन अभिव्यक्ति से पता चला जीनोम aberrations हमेशा 5-7 व्यक्ति रोगी में ट्यूमर व्यवहार विशेषताओं के लिए सहसंबद्ध नहीं कर रहे हैं. इन समस्याओं के लिए प्रयास करें और हल करने के लिए, व्यक्तिगत दवा xenograft मॉडल 8-12 के लिए वृद्धि की खोज में परिलक्षित होता है जो महत्व है, में इजाफा हुआ है.
Vivo परख में एक ग के बीच जटिल परस्पर क्रिया को दर्शाती का लाभ दिया हैकैंसर के प्रसार और आक्रमण 13 के लिए आवश्यक ancer कोशिकाओं और ठोस ट्यूमर में मेजबान ऊतक वातावरण,. वर्तमान में हम सार्कोमा 14,15 के लिए एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य xenograft मॉडल के रूप में Chorio-allantoic झिल्ली परख (सीएएम परख) के उपयोग का अध्ययन. यह परख व्यापक रूप से ट्यूमर angiogenesis 16,17 के अध्ययन के लिए प्रयोग किया जाता है. अन्य अध्ययनों से अलग प्रोटोकॉल 18,19 के अनुसार विकास या angiogenesis में एक स्पष्ट अंतर मनाया जबकि साहित्य में, हालांकि, हम इस परख के लिए अलग अलग प्रोटोकॉल पाया है.
इस लेख में हम ट्यूमर ग्राफ्ट, ट्यूमर व्युत्पन्न एकल कक्ष निलंबन और स्थापित सार्कोमा सेल संस्कृतियों का उपयोग सेल व्यवहार पर सीएएम परख की शर्तों में परिवर्तन के प्रभाव की जांच.
Protocol
Representative Results
Discussion
टीका और फसल का समय
टीकाकरण के दिन ईसीएम जेल (36 cams) में SAOS2 का उपयोग किया और भ्रूण विकास के दिन 5 और 10 के बीच विभिन्न था समय.
ऊष्मायन सुबह 9 से पहले, सीएएम लगातार हम लागू ईसीएम जेल का समर्थन कर…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SW1353 उपास्थि का एक दुर्दम अर्बुद सेल लाइन की कोशिकाएं कृपया प्रो डॉ. PCW Hogendoorn और Leiden विश्वविद्यालय, नीदरलैंड के प्रो डॉ. जे Bovée द्वारा प्रदान किया गया. हम अपने प्रोटोकॉल के अवलोकन के पेशेवर ड्राइंग के लिए जे Mestach और जी Wagemans उत्कृष्ट तकनीकी सहायता के लिए, और जी डी Bruyne धन्यवाद.
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalog Number |
| Cell Line Nucleofector Kit V | Amaxa | VCA-1003 |
| collagenase 2 solution (500 U/ml RPMI 1640) | Sigma Aldrich | C6885 |
| DMEM | Invitrogen | 41965-039 |
| DMSO | Sigma | D8418 |
| Dnase solution | Sigma Aldrich | DN25 |
| G418 | Invitrogen | 11811031 |
| Matrigel | Sigma-Aldrich | E1270 |
| mouse primary monoclonal antibody Ki67 | Dako Denmark | MIB-1 |
| Paraformaldehyde | Fluka | D76240 |
| PBS | Invitrogen | 20012019 |
| PBSD | Invitrogen | 14040083 |
| peGFP-C1 vector | Clontech | 632470 |
| Penicillin/streptomycin | Invitrogen | 15140163 |
| RPMI | Invitrogen | 22409-015 |
| Trypsin-EDTA solution | Invitrogen | 25300054 |
| Vybrant cell-labeling DiI | Lifetechnologies | 22885 |
| Name of Equipment | Company | Catalog Number |
| Countess Automated Cell Counter | Invitrogen | C10227 |
| digital color camera | Leica | DFC 340 FX |
| Digital Egg Incubator | Auto Elex Co | R-COM 50 |
| FACS | BD Biosciences | FACSAriaIII |
| Gentlemacs C-Tube | Miltenyi Biotech | 130-093-237 |
| Gentlemacs Dissociator | Miltenyi Biotech | 130-093-235 |
| Gentlemacs Dissociator User Manual containing h_tumor protocol | Miltenyi Biotech | |
| semipermeable adhesive film (Suprasorb F) | Lohmann&Rauscher | 20468 |
| stereo fluorescence microscope | Leica | M205 FA |
| Tissue-Tek Film automated Coverslipper | Sakura | 6400 |
| ultraView Universal DAB Detection Kit | Ventana Medical Systems Inc | 760-500 |
| Ventana Automated Slide Stainer | Ventana Medical Systems | Benchmark XT |
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