تصلب الشرايين هو عملية التهابات مزمنة. يوضح هذا المخطوط وسيلة سهلة لاستخدام فيفو السابقين نموذج للتحقيق السباتي جديدة أو لويحات الشريان التاجي. السابقين فيفو النموذج يسمح للتحقيق في المواد المحتملة على الوسط التهابات في الآفات والنتائج تصلب الشرايين الإنسان يمكن تحليلها بطرق مختلفة.
تصلب الشرايين هو مرض التهابي مزمن في الأوعية الدموية. هناك طرق مختلفة لدراسة التهابات في مجمع آفات تصلب الشرايين. نماذج الماوس هي أداة مهمة للتحقيق في عمليات التهابات في تصلب الشرايين، ولكن هذه النماذج تعاني من الاختلافات المظهرية والوظيفية بين الفئران وجهاز المناعة البشري. في المختبر وتستخدم التجارب خلية لتقييم تحديدا تعتمد على نوع الخلية التغييرات الناجمة عن مادة من الفائدة، ولكن الاختلافات التي تعتمد على الثقافة وعدم القدرة على تحليل تأثير جزيئات محددة في سياق مجمع التهابات في آفات تصلب الشرايين لحد من تأثير النتائج. بالإضافة إلى ذلك، قياس مستويات جزيء من الفائدة في دم الإنسان يساعد على مواصلة التحقيق أهمية سريرية، ولكن هذا يمثل الالتهاب النظامية وليس المحلية. لذلك، نحن هنا تصف نموذجا ثقافة وحة لدراسة الآفة تصلب الشرايين الإنسان البيولوجيافيفو السابقين. باختصار، ويتم الحصول على لويحات جديدة من المرضى الذين يخضعون لاستئصال باطنة الشريان أو الشريان التاجي تطعيم وتخزينها في RPMI المتوسطة على الجليد حتى الاستخدام. يتم قطع العينات إلى قطع صغيرة تليها التوزيع العشوائي في لوحة 48 جيدا، تحتوي على RPMI المتوسطة بالإضافة إلى مادة ذات الأهمية مثل السيتوكينات أو كيموكينات وحدها أو في تركيبة لفترات محددة من الزمن. بعد الحضانة، والقطع البلاك يمكن تجميدها لصدمة مرنا العزلة، جزءا لا يتجزأ من البارافين أو أكتوبر لالمناعية تلطيخ أو حطم و lysed لالنشاف الغربية. علاوة على ذلك، قد تكون خلايا معزولة من لوحة للتحليل التدفق الخلوي. بالإضافة إلى ذلك، supernatants يمكن جمعها لقياس البروتين بواسطة ELISA. في الختام، يفتح فيفو السابقين النموذج المقدم إمكانية مواصلة دراسة البيولوجيا التقرحي التهابات، مما قد يؤدي إلى تحديد آليات المرض الرواية والأهداف العلاجية.
تصلب الشرايين ومرض التهابي مزمن هو واحد من الأسباب الرئيسية للوفاة في الدول الصناعية 1-2. مضاعفات تصلب الشرايين، ومتلازمة الشريان التاجي الحادة وخاصة، وقد تم ربط لتمزق الآفات الضعيفة، مما تسبب انسداد الأوعية atherothrombosis و3. يبدو المناعة الفطرية والتكيفية أن تشارك خلال جميع الخطوات من تصلب الشرايين 2،4-5. على الرغم من إحراز تقدم كبير في علاج احتشاء العضلة القلبية، والوقاية من تصلب الشرايين وفعالة الأحداث القلب والأوعية الدموية الضارة لا تزال دون حل. وبالتالي، ودراسة البيولوجيا التقرحي هو ضروري لزيادة المعرفة لدينا على الفيزيولوجيا المرضية من تصلب الشرايين والسماح تحديد أهداف علاجية جديدة وتطوير علاجات جديدة.
في كثير من الحالات، يتم استخدام نماذج الفئران للتحقيق في الفيزيولوجيا المرضية لأمراض معينة. ومع ذلك، ودراسة تصلب الشرايين باستخدام نماذج الماوس ACCOmpanied من قبل العديد من القيود: (1) عادة، يحصل تصلب الشرايين الفئران حمية عالية الكوليسترول. لا يمكن مقارنة مستويات الكولسترول في هذه النماذج مع تلك الموجودة في المرضى الذين يعانون من ارتفاع مستويات الكولسترول في الدم 6. (2) هناك اختلافات جوهرية بين الفئران ونظام المناعة البشري؛ وبالتالي foxp3 هو علامة معينة من الخلايا التائية التنظيمية الفئران، في حين أن التعبير foxp3 الإنسان في خلايا T الإنسان لا تضفي بالضرورة النمط الظاهري التنظيمية 7. أيضا، نموذج Th1/Th2 على النحو المحدد في البشر ليست قابلة للتحويل بشكل كامل لخلايا T الفئران. (3) وهناك عدد من العلامات التي تستخدم لتحديد حيدات الفئران والضامة مثل F4/80 وعلامات الكلاسيكية (M1) مقابل البديلة (M2) أنماط التنشيط غير موجود في خلايا الدم النخاعي الإنسان 8. (4) تم العثور على التعبير الجيني من الفئران والإنسان وحيدات الدم المحيطي أن تكون مختلفة إلى حد كبير 9.
وبالتالي، من أجل زيادة فهمنا للعمليات التهابات مزمنة في تصلب الشرايين البشرية، ونحن بحاجة إلى الاستفادة من نماذج العمل مع الأنسجة البشرية، والدم أو الخلايا. هنا، نحن تصف نموذجا للزراعة الأنسجة البلاك الإنسان، والذي يسمح التحقيق المواد الرواية المحتملة في مفهوم الإنسان البيولوجيا التقرحي التهابات.
نحن هنا لتقديم فيفو السابقين البلاك نموذج الثقافة لدراسة تأثير المواد ذات الصلة المحتملة على تصلب الشرايين الآفة علم الأحياء. والميزة الرئيسية لهذا الأسلوب فيفو السابقين هو القدرة على تقييم تأثير المواد المشار إليها على الخلايا الالتهابية وتفاعلها الخلو…
The authors have nothing to disclose.
نشكر نادين Wambsganss للحصول على المساعدة الفنية ممتازة. وأيد هذا العمل من قبل المؤسسة الألمانية للبحوث (DFG) ER 682/2-1 وراتبا البحوث من الجمعية الألمانية لأمراض القلب لC. اربل وكذلك راتبا من البحوث الأكاديمية الألمانية لخدمة هايدلبرغ L. تشاو.
Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
RPMI medium | Gibco | 21875-091 | n/a |
FCS | Gibco | 10270-106 | n/a |
Penicillin-streptomycin | Sigma | P-4458 | n/a |
15 ml tube | Sarstedt | 62,554,502 | n/a |
culture dish (60mm) | Orange Scientific | 5550200 | n/a |
LPS | Sigma | L4516 | n/a |
Cell Culture Plates 48-well | Greiner | 677102 | n/a |
Scalpel – single use | Feather | FEA200130011 | n/a |
TissueLyser | Precellys 24 Dual | Cat. No. EQ03119.200.RD010.0 | n/a |
RNeasy (Mini) Kit | Qiagen | Cat. No. 74104 | n/a |
Boehringer cDNA kit | Roche Diagnostics | Cat. No. 11483188001 | n/a |
Nanodrop Spectrophotometer | Thermo Fisher Scientific | n/a |