Gavaging דג הזברה למבוגר
Summary
השימוש הגובר של דג הזברה כמודל חיה דורש פיתוח שיטות יעילות לאספקה של כמויות ידועות של תרכובות ופתרונות. ההליך המתואר להלן gavage מאפשר משלוח האוראלי של כמויות מדויקות של פתרון אמין, בטוח ויעיל לדג זברה מבוגר.
Abstract
דג הזברה הפכה חשובה במודל vivo במחקר ביו. שיטות יעילות חייבים להיות מפותחות ומנוצלות כדי לספק תרכובות או סוכנים בפתרונות למחקר מדעי. שיטות קיימים כיום למתן דרך הפה לתרכובות דג הזברה למבוגרים הן לא מדויקות בגלל שונות בצריכה בהתנדבות על ידי הדג. הליך gavage פותח כדי לספק כמויות מדויקות של חומרים מזהמים לדג הזברה למחקר במחקר ביו. דג הזברה מבוגר מעל גיל 6 חודשים היו מורדם עם 150 מ"ג / ליטר של נאגר MS-222 וgavaged עם 5 μl של פתרון באמצעות צינורות השתלת צנתר גמישים המחובר לקצה מחט 22-G לחתוך. הצינור גמיש שהוריד לתוך חלל הפה של דג הזברה עד הקצה של הצינור הוארך בעבר את הזימים (כ 1 ס"מ). הפתרון היה לאחר מכן הזריק לאט לתוך המעי. שיטה זו הייתה יעילה 88% מהזמן, עם דג מחלים ללא אירועים מיוחדים. זההליך הוא גם יעיל כאדם אחד יכול gavage 20-30 דגים בשעה אחת. שיטה זו יכולה לשמש לניהול סוכנים דווקא ללימודי מחלות זיהומיות, או מחקרים של תרכובות אחרות בדג זברה מבוגר.
Introduction
שיטות קיימים כיום למתן דרך הפה לדג זברת תרכובות כוללות תרכובות בניהול עליונה מצופות על הזנה, מעורבב לדיאטות ג'לטין 1, bioencapsulated למלח שרימפס 2, מעורבב עם שומני דיאטות כמוס 3, שעוות חרוזים תרסיס 4 ובאמצעות דיאטות המבוססות על גלוטן. 5 מגבלות שיטות של אוראלי אלה כוללות שיעורי שטיפה גבוהים וצריכת מתחם שלמה או בלתי צפויה על ידי דגים בודדים. המשתנים האלה הם בעייתיים, כי במחקרים למחלות זיהומיות, ביודעו את מינון התולעת ניתן לדגים עשוי להיות קריטי להצלחת מחקר. כמו כן, עבודה קודמת הראתה כי תרכובות מסוימות המנוהלות באמבטיות מים לגרום לנגע רעיל לדג הזברה זימים לפני שפעת המעיים שעשויות להיות תחת מחקר להתרחש. 6
Gavage הוא שיטה סטנדרטית המשמשת במינים של בעלי חיים במעבדה אחרים כדי לנהל את הכמויות מדויקות של מוצר עם AKריכוז Nown למחקר במחקר ביו ותרופות. רק לאחרונה יש שיטות לgavaging דג הזברה תואר בספרות. טכניקה אחת היא שיטה שתוארה שני אדם באמצעות נדן קטטר 24-G המחובר לפיפטה μl 2-20 כדי לספק 5 μl של פתרון. 7 השיטה המתוארת היה שיעור תמותה של 8.7% ו -39% ביום הראשון והשני משפט, בהתאמה; ביותר של התמותה יוחס לנשים הרות להולדת. הטכניקה השנייה gavage תאר מזרקים gavage קהה שקצהו המשמש לניהול של 5 μl פתרון לmedakas (latipes Oryzias). 8 מידע על תמותה לא היה קיים ואת התהליך של ביצוע gavage לא תואר מדויק. לדברי המועצה הקנדית בטיפול בבעלי חיים ובמעבדת דג הזברה, עד 1% ממשקל גופו של הדג יכולה להינתן דרך gavage. 9,10 המטרה שלנו הייתה לפתח שיטת הדיר, יעילה ובטוחה של אספקת כמויות מדויקות של comק"ג במתן דרך פה לדג זברה מבוגר משני המינים ובכל השלבים של רבייה. הליך זה יהיה רלוונטי לכל מחקר שבו נדרש מינון אוראלי מדויק של מתחם.
Protocol
Representative Results
Discussion
משמעות
טכניקה זו היא שיפור ומספקת מספר יתרונות על פני שתי הטכניקות המתוארות בעבר לgavaging דג הזברה מבוגר. ראשית, שימוש בספוג כדי לרסן את הדגים מאפשר לאדם אחד כדי לבצע את ההליך, בניגוד לטכניקה שתוארה לעיל דורשת שני אנשים. 7 שנית, צ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
המרכז השוואתי באוניברסיטת רוקפלר Bioscience סיפק תמיכה לפרויקט זה. אנו מודים Monnas janelle לקבלת סיוע טכני.
Materials
| Equipment | |||
| A sponge | |||
| 1-cc luer lock syringe | Becton Dickinson & Co | ||
| 22-G Micro-Renathane Implantation tubing (cut) | Braintree Scientific, Inc. | ||
| 1 22-G needle (cut, if needed) | Becton Dickinson & Co | ||
| pH meter | Hanna probe | ||
| 1 scalpel blade | |||
| [header] | |||
| Reagent/Material | |||
| MS-222 (Finquel) | Argent Laboratories |
References
- Royes, J. -. A. B., Chapman, F. . Preparing Your Own Fish Feeds. , (2009).
- Gomez-Gil, B., Cabanillas-Ramos, J., Paez-Brambila, A., Roque, A. Standardization of the bioencapsulation of enrofloxacin and oxytetracycline in Artemia fransciscana Kellogg. Aquaculture. 196, 1-12 (1906).
- Langdon, C. Microparticle types for delivering nutrients to marine fish larvae. Aquaculture. 227, 259-275 (2003).
- Langdon, C., Nordgreen, A., Hawkyard, M., Hamre, K. Evaluation of wax spray beads for delivery of low-molecular weight, water soluble nutrients and antibiotics to Artemia. Aquaculture. 284, 151-158 (2008).
- Zang, L., Morikane, D., Shimada, Y., Tanaka, T., Nishimura, N. A Novel Protocol for the Oral Administration of Test Chemicals to Adult Zebrafish. Zebrafish. 8, 203-210 (2011).
- Goldsmith, J. R., Jobin, C. Think Small: Zebrafish as a Model System of Human pathology. Journal of Biomedicine and Biotechnology. , (2012).
- Tysnes, K. R., Jorgensen, A., Poppe, T., Midtlyng, P. J., Robertson, L. J. Preliminary expermients on use of zebrafish as a laboratory model for Giardia duodenalis infection. Acta Parasitologica. 57, 1-6 (2012).
- Marie, B., Huet, H., et al. Effects of a toxic cyanobacterial bloom (Planktothris agardhii) on fish: Insights from histopathological and quantitative proteomic assessments following the oral exposure of medaka fish (Oryzias latipes). Aquatic Toxicology. 114-115, 39-48 (2012).
- Canadian Council on Animal Care. . CCAC guidelines on: the care and use of fish in research, teaching and testing. , (2005).
- Harper, C., Lawrence, C. . The Laboratory Zebrafish. , (2011).
- De Tolla, L. J., Srinivas, S., et al. Guidelines for the Care and Use of Fish in Research. ILAR Journal. 37 (4), (1995).
- Topic Popovic, N., Strunjak-Perovic, I., et al. Tricaine methane-sulfonate (MS-222) application in fish anaesthesia. Journal of Applied Ichthyology. 28, 553-564 (2012).
- Field, H. A., Kelley, K. A., Martell, L., Goldstein, A. M., Serluca, F. C. Analysis of gastrointestinal physiology using a novel intestinal transit assay in zebrafish. Neurogastroenterology & Motility. 21, 304-312 (2009).
