Gavaging Zebrafish Adulto

Summary

O uso crescente de peixe-zebra como um modelo animal requer o desenvolvimento de métodos eficazes para a entrega de quantidades conhecidas de compostos e soluções. O procedimento de gavagem descrito abaixo permite a distribuição oral de volumes precisos de solução fiável, segura e eficiente de peixe-zebra adultos.

Abstract

O peixe-zebra tornou-se um importante modelo in vivo na pesquisa biomédica. Métodos eficazes devem ser desenvolvidos e utilizados para fornecer compostos ou agentes em soluções para a investigação científica. Os métodos atuais para a administração de compostos oralmente para zebrafish adultos são imprecisos devido à variabilidade no consumo voluntário pelos peixes. Um procedimento de gavagem foi desenvolvido para entregar quantidades precisas de agentes infecciosos para peixe-zebra para o estudo em pesquisa biomédica. Peixe-zebra adultos com mais de 6 meses de idade, foram anestesiados com 150 mg / L de tamponada MS-222 e gavaged com 5 mL de solução usando implantação tubo flexível do cateter ligada a um corte de 22 L da ponta de agulha. O tubo flexível foi baixada para dentro da cavidade oral do peixe-zebra, até a ponta do tubo estendida para além das guelras (aproximadamente 1 cm). A solução foi então injectada lentamente no tracto intestinal. Este método foi eficaz 88% do tempo, com peixe recuperação sem intercorrências. Esteprocedimento também é eficaz como uma pessoa pode gavagem 20-30 peixes em uma hora. Este método pode ser utilizado para administrar agentes precisamente para estudos de doenças infecciosas, ou estudos de outros compostos em peixes-zebra adultos.

Introduction

Os métodos atuais para a administração de compostos oralmente para zebrafish incluem compostos administração top-revestidos para alimentação, misturados em dietas de gelatina ^1, bioencapsulated em salmoura camarão ^2, misturado com dietas lipídicas encapsuladas ^3, cera contas de pulverização ⁴ e via dietas à base de glúten. ⁵ Limitações estes métodos de administração oral incluem altas taxas de lixiviação e consumo composto incompleta ou imprevisível por peixes individual. Essas variáveis ​​são problemáticas porque em estudos de doenças infecciosas, sabendo que a dose infecciosa administrado ao peixe pode ser fundamental para o sucesso do estudo. Além disso, o trabalho anterior tenha mostrado que certos compostos administrados em banhos de água causar lesão tóxica para as guelras do peixe-zebra intestinais antes que os efeitos que podem estar sob estudo ocorrem ^6.

Gavage é um método padrão usado em outras espécies de animais de laboratório para administrar quantidades precisas de um produto com akconcentração nown para estudo na investigação biomédica e farmacêutica. Só recentemente os métodos para gavaging peixe-zebra foram descritos na literatura. Uma técnica descrita é um método de duas pessoas utilizando uma bainha de cateter 24 G ligada a uma pipeta de 2-20 ul de entregar 5 ul de solução. ⁷ O método descrito teve uma taxa de mortalidade de 8,7% e 39% no primeiro e segundo ensaio, respectivamente, a maioria da mortalidade foi atribuída a fêmeas grávidas. A segunda técnica gavage descrito seringas gavage atraumáticas usados ​​para administrar 5 ml de solução para medakas (Oryzias latipes). ⁸ Informações sobre a mortalidade não foi fornecido eo processo exato de realizar a sonda não foi descrita. De acordo com a Canadian Council on Animal Care e do peixe-zebra de Laboratório, até 1% de peso do corpo do peixe, podem ser administrados através de sonda esofágica. ^9,10 nosso objectivo foi desenvolver um método repetitivo, segura e eficiente de fornecer volumes precisos de ptlibras por via oral para zebrafish adultos de ambos os sexos e em todas as fases de reprodução. Este procedimento seria aplicável para qualquer estudo em que é necessária a administração oral de um composto precisas.

Protocol

1. Preparar a solução anestésica Prepara-se uma solução de 150 mg / L de MS-222, em água do sistema a partir de uma solução estoque ou a partir da forma em pó. Verifique se o pH com um medidor de pH. Tampão de bicarbonato de sódio, como necessário, até que o pH está entre 7-7,5. Prepare um tanque de água do sistema livre de MS-222 para o peixe para se recuperar dentro O tempo de recuperação é normalmente menos de 1 min. 2. Prepar…

Representative Results

Ambos os sexos, de peixe, incluindo fêmeas grávidas foram gavaged com sucesso (Figura 1). Um procedimento bem sucedido, leva menos de um minuto com o líquido não visto saindo as brânquias ou a boca. A tubulação entra facilmente, sem força, sem sangue visto após a remoção do cateter. O procedimento é rápido, necessitando de aproximadamente 10 min, a administração por sonda 3-4 peixes, com uma média de 30-45 seg por peixe. Peixe-zebra não deve ser gavaged com …

Discussion

Significado

Esta técnica é um aperfeiçoamento e oferece várias vantagens em relação a ambas as técnicas descritas anteriormente para o peixe-zebra gavaging adulto. Em primeiro lugar, o uso de uma esponja para restringir os peixes permite que uma pessoa para realizar o procedimento, em oposição a uma técnica previamente descrita exige duas pessoas. Segunda ^7, o cateter de implante de tubagem é mais flexível do cateter IV, que pode ajudar a minimizar o trauma secundário de…

Materials

			Equipment
A sponge
1-cc luer lock syringe	Becton Dickinson & Co
22-G Micro-Renathane Implantation tubing (cut)	Braintree Scientific, Inc.
1 22-G needle (cut, if needed)	Becton Dickinson & Co
pH meter	Hanna probe
1 scalpel blade
			[header]
			Reagent/Material
MS-222 (Finquel)	Argent Laboratories