Gavaging взрослых данио рерио
Summary
Все более широкое использование данио в качестве животной модели требует разработки эффективных методов для доставки известных количеств соединений и решений. Желудочный зонд описанной ниже процедуры позволяет пероральной доставки точной объемы раствора надежно, безопасно и эффективно для взрослых данио.
Abstract
Данио стала важной в естественных условиях модель в биомедицинских исследованиях. Эффективные методы должны быть разработаны и использованы для доставки соединений или агентов в растворах для научных исследований. Современные методы введения соединений устно взрослых данио являются неточными из-за изменчивости добровольное потребление рыбы. Зонда была разработана процедура обеспечивает точное количество инфекционных агентов данио для исследования в биомедицинских исследованиях. Взрослых данио в течение 6-месячного возраста анестезировали 150 мг / л буфера MS-222 и которым вводили 5 мкл раствора с использованием гибких труб имплантации катетера прикреплен к сокращению 22-G иглы. Гибкий шланг был опущен в полости рта данио до кончика трубки продлил мимо жабры (около 1 см). Затем раствор медленно вводят в желудочно-кишечном тракте. Этот метод был эффективным 88% времени, с рыбой восстановления без осложнений. ЭтоПроцедура также эффективна, как один человек может зондовым 20-30 рыб в течение одного часа. Этот метод может использоваться, чтобы точно управлять средств по поводу инфекционных заболеваний исследования или исследования других соединений в взрослых данио.
Introduction
Современные методы введения соединений устно данио включают введение соединений верхним покрытием на корм, смешанный в желатиновые диеты 1, bioencapsulated в артемии 2, смешанные с липидной инкапсулированные диет 3, воск спрей бисера 4 и через клейковины на основе диеты. 5 Ограничения этих методов перорального введения включают высокие темпы выщелачивания и неполным или непредсказуемые соединения потребления отдельных рыб. Эти переменные являются проблематичным, поскольку в исследованиях инфекционных болезней, зная, инфекционная доза вводится рыба может иметь решающее значение для успеха исследования. Кроме того, предыдущие исследования показали, что некоторые соединения вводят в воду ванны вызывают токсическое поражение для рыбок данио жабры перед кишечных эффектов, которые могут находиться под исследование произойти. 6
Зонд является стандартным методом, используемым в других видах лабораторных животных для администрирования точное количество продукта с АКNown концентрации для исследования в биомедицинских и фармацевтических исследований. Лишь недавно методы gavaging данио были описаны в литературе. Один из методов, описанных в двух человек методом с использованием 24-G оболочка катетера прикреплен к 2-20 мкл пипеткой доставить 5 мкл раствора. 7 Метод, описанный была смертность от 8,7% и 39% на первом и втором судебного разбирательства, соответственно, большая часть смертности объясняется беременных самок. Второй зонд использовали методику, описанную тупым наконечником зонда шприцы для введения 5 мкл решение medakas (Oryzias latipes). 8 Информация на смертность не была предоставлена и точный процесс выполнения зонд не был описан. По данным Канадского совета по уходу за животными и данио рерио лаборатории, до 1% от массы тела рыбы можно вводить через зонд. 9,10 Нашей целью была разработка повторяемой, безопасным и эффективным способом доставки точные объемы COMфунтов устно взрослых данио обоих полов и на всех стадиях воспроизводства. Эта процедура будет применяться для любого исследование, в котором точные перорального введения соединения не требуется.
Protocol
Representative Results
Discussion
Значение
Этот метод улучшения и обеспечивает несколько преимуществ по сравнению с двумя ранее описанных методов gavaging взрослых данио. Во-первых, использование губки сдерживать рыбы позволяет одному человеку для выполнения процедуры, в отличие от описанных ранее метод, т?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Университет Рокфеллера Сравнительный Bioscience Центр оказал поддержку этому проекту. Мы благодарим Janelle Monnas за техническую помощь.
Materials
| Equipment | |||
| A sponge | |||
| 1-cc luer lock syringe | Becton Dickinson & Co | ||
| 22-G Micro-Renathane Implantation tubing (cut) | Braintree Scientific, Inc. | ||
| 1 22-G needle (cut, if needed) | Becton Dickinson & Co | ||
| pH meter | Hanna probe | ||
| 1 scalpel blade | |||
| [header] | |||
| Reagent/Material | |||
| MS-222 (Finquel) | Argent Laboratories |
References
- Royes, J. -. A. B., Chapman, F. . Preparing Your Own Fish Feeds. , (2009).
- Gomez-Gil, B., Cabanillas-Ramos, J., Paez-Brambila, A., Roque, A. Standardization of the bioencapsulation of enrofloxacin and oxytetracycline in Artemia fransciscana Kellogg. Aquaculture. 196, 1-12 (1906).
- Langdon, C. Microparticle types for delivering nutrients to marine fish larvae. Aquaculture. 227, 259-275 (2003).
- Langdon, C., Nordgreen, A., Hawkyard, M., Hamre, K. Evaluation of wax spray beads for delivery of low-molecular weight, water soluble nutrients and antibiotics to Artemia. Aquaculture. 284, 151-158 (2008).
- Zang, L., Morikane, D., Shimada, Y., Tanaka, T., Nishimura, N. A Novel Protocol for the Oral Administration of Test Chemicals to Adult Zebrafish. Zebrafish. 8, 203-210 (2011).
- Goldsmith, J. R., Jobin, C. Think Small: Zebrafish as a Model System of Human pathology. Journal of Biomedicine and Biotechnology. , (2012).
- Tysnes, K. R., Jorgensen, A., Poppe, T., Midtlyng, P. J., Robertson, L. J. Preliminary expermients on use of zebrafish as a laboratory model for Giardia duodenalis infection. Acta Parasitologica. 57, 1-6 (2012).
- Marie, B., Huet, H., et al. Effects of a toxic cyanobacterial bloom (Planktothris agardhii) on fish: Insights from histopathological and quantitative proteomic assessments following the oral exposure of medaka fish (Oryzias latipes). Aquatic Toxicology. 114-115, 39-48 (2012).
- Canadian Council on Animal Care. . CCAC guidelines on: the care and use of fish in research, teaching and testing. , (2005).
- Harper, C., Lawrence, C. . The Laboratory Zebrafish. , (2011).
- De Tolla, L. J., Srinivas, S., et al. Guidelines for the Care and Use of Fish in Research. ILAR Journal. 37 (4), (1995).
- Topic Popovic, N., Strunjak-Perovic, I., et al. Tricaine methane-sulfonate (MS-222) application in fish anaesthesia. Journal of Applied Ichthyology. 28, 553-564 (2012).
- Field, H. A., Kelley, K. A., Martell, L., Goldstein, A. M., Serluca, F. C. Analysis of gastrointestinal physiology using a novel intestinal transit assay in zebrafish. Neurogastroenterology & Motility. 21, 304-312 (2009).
