Gavaging vuxna zebrafisk
Summary
Den ökande användningen av zebrafisk som en djurmodell kräver utveckling av effektiva metoder för leverans av kända mängder av föreningar och lösningar. Den sondmatning förfarande som beskrivs nedan medger oral tillförsel av exakta volymer av lösning pålitligt, säkert och effektivt för vuxna zebrafisk.
Abstract
Den zebrafisk har blivit en viktig in vivo-modell i den biomedicinska forskningen. Effektiva metoder måste utvecklas och utnyttjas för att leverera föreningar eller medel i lösningar för vetenskaplig forskning. Nuvarande metoder för att administrera föreningarna oralt till vuxna zebrafisk är felaktiga på grund av variationer i frivillig konsumtion av fisk. En sondmatning förfarande har utvecklats för att ge exakta mängder av smittämnen som zebrafisk för studier i biomedicinsk forskning. Vuxna zebrafisk över 6 månaders ålder sövdes med 150 mg / L av buffrad MS-222 och sondmatades med 5 pl lösning med slangar kateter implantation bifogas ett snitt 22-G nål spets. Den flexibla slangen sänktes in i den orala håligheten hos zebrafisk tills spetsen av slangen utskjuten förbi gälarna (cirka 1 cm). Lösningen injicerades sedan långsamt i tarmkanalen. Denna metod var effektiv 88% av tiden, med fisk återhämtar händelselöst. Dettaförfarandet är också effektiv som en person kan sondmatning 20-30 fisk i en timme. Denna metod kan användas för att exakt administrera medel för infektionssjukdomar studier eller studier av andra föreningar i vuxen zebrafisk.
Introduction
Nuvarande metoder för att administrera föreningarna oralt till zebrafisk inkluderar administrering föreningar toppbelagd på foder, blandas in i gelatin dieter 1, bioencapsulated in artemia 2, blandat med lipid inkapslade dieter 3, vax sprej pärlor 4 och via gluten-baserade dieter. 5 Begränsningar av dessa metoder för oral administration inkluderar höga urlakningshastigheter och ofullständig eller oförutsägbara förening konsumeras av fisk. Dessa variabler är problematiskt eftersom i infektionssjukdomar studier, i vetskap om smittsam dos administreras till fisken kan vara kritisk för studier framgång. Dessutom har tidigare arbete visat att vissa föreningar administreras i vattenbad orsaka toxisk skada som zebrafisk gälar innan de intestinala effekter som kan vara under utredning sker. 6
Sondmatning är en vanlig metod som används i andra försöksdjurart att administrera exakta kvantiteter av en produkt med akNown koncentration för studier i biomedicinsk och farmaceutisk forskning. Först nyligen har metoder för gavaging zebrafisk har beskrivits i litteraturen. En teknik som beskrivs är en två-person som använder en 24-G katetermantel ansluten till en 2-20 l pipett för att leverera 5 pl lösning. 7 Den beskrivna metoden hade en dödlighet på 8,7% och 39% på den första och andra rättegång, respektive, de flesta av dödligheten tillskrevs dräktiga honor. Den andra sondmatning beskrivna tekniken används trubbig spets sondmatning sprutor för att administrera 5 pl lösning till medakas (Oryzias latipes). Var 8 Information om dödligheten inte tillhandahålls och den exakta processen att utföra sondmatning beskrevs inte. Enligt den kanadensiska rådet om Animal Care och Laboratoriet Zebrafish, upp till 1% av fiskens kroppsvikt kan administreras via sondmatning. 9,10 Vårt mål var att utveckla en repeterbar, säker och effektiv metod för att leverera precisa volymer compounds oralt till vuxna zebrafisk av båda könen och i alla stadier. Detta förfarande skulle gälla för någon studie där noggrann oral dosering av en förening krävs.
Protocol
Representative Results
Discussion
Signifikans
Denna teknik är en förbättring och ger flera fördelar över de två tidigare beskrivna tekniker för gavaging vuxna zebrafisk. Först tillåter användning av en svamp för att hålla tillbaka fisken en person att utföra proceduren, i motsats till en tidigare beskrivna tekniken kräver två personer. 7 det andra är kateter implantation slang mer flexibel än IV-katetrar, som kan hjälpa till att minimera sekundära trauma på grund till perforering på liknande sät…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The Rockefeller University Comparative Bioscience Center gav stöd för detta projekt. Vi tackar Janelle Monnas för tekniskt bistånd.
Materials
| Equipment | |||
| A sponge | |||
| 1-cc luer lock syringe | Becton Dickinson & Co | ||
| 22-G Micro-Renathane Implantation tubing (cut) | Braintree Scientific, Inc. | ||
| 1 22-G needle (cut, if needed) | Becton Dickinson & Co | ||
| pH meter | Hanna probe | ||
| 1 scalpel blade | |||
| [header] | |||
| Reagent/Material | |||
| MS-222 (Finquel) | Argent Laboratories |
References
- Royes, J. -. A. B., Chapman, F. . Preparing Your Own Fish Feeds. , (2009).
- Gomez-Gil, B., Cabanillas-Ramos, J., Paez-Brambila, A., Roque, A. Standardization of the bioencapsulation of enrofloxacin and oxytetracycline in Artemia fransciscana Kellogg. Aquaculture. 196, 1-12 (1906).
- Langdon, C. Microparticle types for delivering nutrients to marine fish larvae. Aquaculture. 227, 259-275 (2003).
- Langdon, C., Nordgreen, A., Hawkyard, M., Hamre, K. Evaluation of wax spray beads for delivery of low-molecular weight, water soluble nutrients and antibiotics to Artemia. Aquaculture. 284, 151-158 (2008).
- Zang, L., Morikane, D., Shimada, Y., Tanaka, T., Nishimura, N. A Novel Protocol for the Oral Administration of Test Chemicals to Adult Zebrafish. Zebrafish. 8, 203-210 (2011).
- Goldsmith, J. R., Jobin, C. Think Small: Zebrafish as a Model System of Human pathology. Journal of Biomedicine and Biotechnology. , (2012).
- Tysnes, K. R., Jorgensen, A., Poppe, T., Midtlyng, P. J., Robertson, L. J. Preliminary expermients on use of zebrafish as a laboratory model for Giardia duodenalis infection. Acta Parasitologica. 57, 1-6 (2012).
- Marie, B., Huet, H., et al. Effects of a toxic cyanobacterial bloom (Planktothris agardhii) on fish: Insights from histopathological and quantitative proteomic assessments following the oral exposure of medaka fish (Oryzias latipes). Aquatic Toxicology. 114-115, 39-48 (2012).
- Canadian Council on Animal Care. . CCAC guidelines on: the care and use of fish in research, teaching and testing. , (2005).
- Harper, C., Lawrence, C. . The Laboratory Zebrafish. , (2011).
- De Tolla, L. J., Srinivas, S., et al. Guidelines for the Care and Use of Fish in Research. ILAR Journal. 37 (4), (1995).
- Topic Popovic, N., Strunjak-Perovic, I., et al. Tricaine methane-sulfonate (MS-222) application in fish anaesthesia. Journal of Applied Ichthyology. 28, 553-564 (2012).
- Field, H. A., Kelley, K. A., Martell, L., Goldstein, A. M., Serluca, F. C. Analysis of gastrointestinal physiology using a novel intestinal transit assay in zebrafish. Neurogastroenterology & Motility. 21, 304-312 (2009).
