संवर्धन और अनुरक्षण<em> क्लोस्ट्रीडियम बेलगाम</em> एक anaerobic वातावरण में
Summary
क्लोस्ट्रीडियम बेलगाम एक सख्त अवायुजीव है और एंटीबायोटिक जुड़े दस्त (एएडी) का कारण बनता है कि एक रोगजनक जीवाणु है. इधर, अलग, संवर्धन और सी. बनाए रखने के लिए तरीके बेलगाम वनस्पति कोशिकाओं और बीजाणुओं वर्णित हैं. इन तकनीकों में इष्टतम सी. के लिए उचित शर्तों को सुनिश्चित करने के लिए नियमित रखरखाव की आवश्यकता है, जो एक anaerobic चैम्बर की जरूरत बेलगाम खेती.
Abstract
क्लोस्ट्रीडियम बेलगाम एंटीबायोटिक जुड़े दस्त (एएडी) के लिए मुख्य रूप से जिम्मेदार है और एक महत्वपूर्ण nosocomial रोगज़नक़ है कि एक ग्राम पॉजिटिव, अवायवीय, sporogenic जीवाणु है. सी. बेलगाम को अलग करने और खेती के लिए बेहद मुश्किल है और वातावरण में ऑक्सीजन का भी निम्न स्तर को अत्यंत संवेदनशील है. इधर, सी. के लिए अलग तरीकों मल के नमूने से बेलगाम और बाद में संवर्धन सी. लंबी अवधि के भंडारण के लिए ग्लिसरॉल शेयरों की तैयारी के लिए बेलगाम प्रस्तुत कर रहे हैं. माइक्रोस्कोपी और जानवरों के अध्ययन सहित बहाव के अनुप्रयोगों की एक किस्म के लिए प्रयोगशाला में बीजाणु शेयरों की तैयारी और गणना के लिए तकनीक भी वर्णित हैं. इन तकनीकों में इष्टतम सी. के लिए उचित शर्तों को सुनिश्चित करने के लिए एक सुसंगत anaerobic वातावरण बनाए रखता है जो एक anaerobic कक्ष, जरूरत बेलगाम वृद्धि. हम सीए के बिना चैंबर के अंदर और बाहर सामग्री के हस्तांतरण के लिए प्रोटोकॉल प्रदानकुशल और लगातार सी. के लिए उपयुक्त anaerobic वातावरण बनाए रखने के लिए आवश्यक नियमित रखरखाव के लिए सुझावों के साथ महत्वपूर्ण ऑक्सीजन संदूषण का उपयोग बेलगाम खेती.
Introduction
क्लोस्ट्रीडियम बेलगाम एक लाचार अवायुजीव और मनुष्यों और पशुओं की एक घातक जठरांत्र रोगज़नक़ है कि एक ग्राम पॉजिटिव, बीजाणु के गठन जीवाणु है. शुरू में नवजात शिशुओं 1, सी से मल के नमूने में पाया एक खानेवाला जीव के रूप में 1935 में वर्णित बेलगाम बाद में एंटीबायोटिक उपचार 2 के साथ जुड़े कृत्रिम कोलाइटिस की प्रेरणा का एजेंट होने का प्रदर्शन किया गया. सी. बेलगाम संक्रमण (CDI) आम तौर पर सी के लिए एक जगह बनाने, सामान्य colonic वनस्पतियों के विघटन में परिणाम है जो एंटीबायोटिक उपचार से पहले कर रहे हैं बेलगाम 2 फूलने के लिए. सी. बेलगाम fecal-मौखिक मार्ग के माध्यम से एक निष्क्रिय बीजाणु रूप में प्रसारित किया और बाद में कई विषाक्त पदार्थों को पैदा करने और गंभीर बीमारी और कोलाइटिस 3 पैदा करने में सक्षम वनस्पति कोशिकाओं के उत्पादन, जठरांत्र पथ के भीतर अंकुरित है. CDI अक्सर परंपरागत उपचार और इन में करने के लिए आग रोक रहे हैंfections अक्सर 4 आवर्तक रहे हैं. नतीजतन, CDI संयुक्त राज्य अमेरिका 5-7 में स्वास्थ्य देखभाल की लागत में करने के लिए 4800000000 $ के लिए जिम्मेदार हैं.
सी. बेलगाम वातावरण में ऑक्सीजन का भी निम्न स्तर के लिए बहुत संवेदनशील है. सी के लिए बेलगाम वातावरण में जारी रहती है और कुशलता से की मेजबानी के लिए मेजबान से प्रेषित किया, एक पाचन निष्क्रिय बीजाणु के गठन के महत्वपूर्ण 8 है. क्योंकि सी. की प्रयोगशाला रखरखाव और जोड़ – तोड़ बेलगाम इन तकनीकों का एक anaerobic कक्ष के उपयोग की जरूरत, एक नियंत्रित, anaerobic वातावरण की आवश्यकता है. अवायवीय कक्षों का इस्तेमाल बढ़ा वसूली और लाचार anaerobes 9-11 से अलगाव में हुई है, और एक anaerobic वातावरण में प्रदर्शन किया जा आणविक तकनीक के एक नंबर की अनुमति दी है.
सी. के अलावा बेलगाम, यहाँ वर्णित अवायवीय कक्ष का उपयोग और रखरखाव लागू कर रहे हैंइस तरह के अन्य Clostridial प्रजातियों (जैसे सी. perfringens), अन्य जठरांत्र प्रजातियों (जैसे Bacteroides प्रजातियों 12) और periodontal रोगजनकों (जैसे Peptostreptococcus प्रजातियों 13) के रूप में अन्य लाचार anaerobes को.
Protocol
Representative Results
Discussion
यहाँ वर्णित विधियों सी. के सरल और जल्दी ठीक होने के लिए अनुमति मनुष्य, चूहों और hamsters, साथ ही सी. की लंबी अवधि के भंडारण सहित मल के नमूने की एक किस्म से बेलगाम ग्लिसरॉल या बीजाणु शेयरों के रूप में …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हमारा अनुरोध है अवायवीय चैंबर के चित्र उपलब्ध कराने के लिए विनीत प्रयोगशालाओं को धन्यवाद देना चाहूंगा. इस काम के स्वास्थ्य अनुदान DK087763 (SMM) और एक कदम / HHMI पाठ्यक्रम विकास फैलोशिप (ANE) के राष्ट्रीय संस्थानों द्वारा समर्थित किया गया.
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
| Proteose Peptone no. 2 | BD | 212120 | |
| Na2HPO4 | Fisher | S373 | |
| KH2PO4 | Fisher | BP362 | |
| NaCl | Fisher | S27 | |
| MgSO4 (anhydrous) | Fisher | M65 | |
| ᴅ-Fructose | Fisher | L96 | |
| Sodium taurocholate | Sigma | T4009 | |
| ᴅ-cycloserine | Sigma | C6880 | |
| Cefoxitin | Fluka | C4786 | |
| Brain heart infusion medium | BD | 237300 | |
| Proteose Peptone | BD | 211684 | |
| (NH4)2SO4 | Sigma | A5132 | |
| Tris base | Fisher | BP152 | |
| Agar | BD | 214010 | |
| L-cysteine | Sigma | C7755 | |
| BactoPeptone | BD | 211684 | |
| Columbian sheep blood agar | Fisher | L21928 | |
| NaCl | Fisher | S27 | |
| KCl | Fisher | P217 | |
| Glycerol | Fisher | BP2291 | |
| Sterile inoculating loops | Fisher | 22363596 | |
| Sterile swabs | Fisher | 1495990 | |
| Coy Vinyl Anaerobic Chamber and Accessories | Coy Laboratory Products, Inc | Customer Specified | These items are custom ordered per laboratory needs |
| Materials | |||
| TCCFA agar Proteose peptone no. 2 (Difco) 40 g Na2HPO4 5 g KH2PO4 1 g NaCl 2 g MgSO4 (anhydrous) 0.1 g Fructose 6 g Agar 20 g Bring to 1 L with deionized water and autoclave at 121 °C for 20 min to sterilize. After autoclaving, add: 10 ml of 10% (w/v) sodium taurocholate, filter-sterilized (dissolve in water; final concentration, 0.1%) 25 ml of 10 mg/ml ᴅ-cycloserine, filter-sterilized (dissolve in water; final concentration, 250 μg/ml) 1.6 ml of 10 mg/ml cefoxitin, filter-sterilized (dissolve in water; final concentration, 16 μg/ml) BHIS Medium Brain heart infusion 37 g Yeast extract 5 g For plates, add 15 g agar. Bring to 1 L with deionized water and autoclave at 121 °C for 20 min to sterilize. Optional (add after autoclaving): 3 ml of 10% (w/v) L-cysteine (dissolve in water; final concentration, 0.03%) 10 ml of 10% (w/v) sodium taurocholate (dissolve in water; final concentration, 0.1%) SMC Sporulation Medium BactoPeptone 90 g Protease peptone 5 g (NH4)2SO4 1 g Tris base 1.5 g Agar 15 g Bring to 1 L with deionized water and autoclave at 121 °C for 20 min to sterilize. Optional (add after autoclaving): 3 ml of 10% (w/v) L-cysteine (dissolve in water; final concentration, 0.03%) 70:30 Medium BactoPeptone 63 g Protease peptone 3.5 g Brain heart infusion 11.1 g Yeast extract 1.5 g (NH4)2SO4 0.7 g Tris base 1.06 g For plates, add 15 g agar. Bring to 1 L with deionized water and autoclave at 121 °C for 20 min to sterilize. After autoclaving, add 3 ml of 10% (w/v) L-cysteine (final concentration, 0.03%). Blood agar The use of premade Columbia anaerobic sheep blood agar plates (Fisher Scientific, L21928)35 is recommended. 1X Phosphate buffered saline (PBS) NaCl 8.01 g KCl 0.2 g Na2HPO4 1.44 g KH2PO4 0.27 g Bring to 1 L with deionized water and adjust pH to 7.4 with HCl. Filter sterilize before use. |
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