用于识别传染性朊病毒通过后通过一个鸟类的消化系统程序

Summary

清除剂具有潜在的易位感染传染性海绵状脑病朊病毒在其粪便到无病的区域。我们用来确定是否通路虽然美国乌鸦的消化道（ 乌鸦brachyrhynchos），死亡动物的共同消费后小鼠适应痒病朊病毒保持传染性细节的方法。

Abstract

传染性朊病毒（PrP的^住宅 ）的材料很可能是致命的，神经退行性传染性海绵状脑病（TSE）的疾病病因^1。谢性疾病，如慢性消耗性疾病（CWD）的传输，被假定为从动物到动物^2,3以及从环境来源^4-6。清除剂和食肉动物有潜力通过消费和CWD污染腐肉的排泄，转运的PrP ^住宅材料。最近的工作已经通过美国乌鸦的消化系统（ 乌鸦座brachyrhynchos），一个共同的北美清道夫⁷记载的PrP的^住宅的材料通过。

我们描述的程序用于通过美国乌鸦记录的PrP的^住宅的材料通过。乌鸦被灌服RML株小鼠适应痒病和他们的粪便收集4小时后灌服。乌鸦粪便，然后汇集和腹腔注射进C57BL / 6小鼠。小鼠每天监测，直到他们表示鼠标瘙痒病的临床症状，并随后实施安乐死。无症状的小鼠进行了监测，直到接种365天岗位。 Western blot分析进行确认疾病状态。结果表明，朊病毒通过乌鸦消化系统行驶后保持感染性和存在于粪便中，引起疾病中测试小鼠。

Introduction

传染性海绵状脑病（TSE）是致命的感染性神经退行性疾病，影响野生动物，家养动物和人类。谢疾病的传染性病原体似乎是朊蛋白¹的错误折叠或致病亚型（PRP ^住宅 ）。动物TSE疾病包括慢性消耗性疾病（CWD）的黑尾鹿（ 白尾野驴 ），白尾鹿（ 白尾virginianus）来说 ，麋鹿（ 马鹿 ），和驼鹿（ 驼鹿 ）;痒病的绵羊和山羊，牛海绵状脑病（ BSE）在国内的牛，在养殖水貂传染性水貂脑病;猫猫海绵状脑病，在异国情调的异国情调的动物园有蹄类动物海绵状脑病反刍的牛科家族;及海绵状脑病在非人灵长类动物^8。单人谢氏病，变异型克雅氏病，是罕见的，认为通过消耗PrP的^住宅 -康泰明收购ATED食物^9。同样，疯牛病可以感染人类，如果被污染的牛肉消耗^10。所有TSE疾病，痒病和CWD是仅有的两个具有自我维持的流行病和源感染被假定为从动物到动物^2,3,11以及从环境源^4-6。研究表明，大多数TSE疾病需要从PrP的^住宅的材料自然暴露事件显着延长潜伏期的临床症状表现^2-4,6,8和表观物种界限减少，但不排除对，种间传播^12-14的潜力。

识别机制传染性朊病毒（PrP的^住宅 ）物质的扩散是回答有关TSE疾病在景观是如何移动的问题极为重要。实验研究表明，昆虫^15,16，家禽和猪^17日 ，美国和乌鸦（ 乌鸦座曼布拉克^{hyrhynchos）7,18}是PrP的^住宅材料的被动载体或传播者。通过乌鸦的消化系统通道的PrP的^住宅的材料最近被记录在案，这表明他们在谢病⁷分散可能发挥的作用。这些结果使得合理的，乌鸦，一个清道夫，可能会遇到，消费，并通过粪便沉积运输传染性物质，对无病的地区。

我们在这里展示的程序是用来通过乌鸦的消解系统记录的PrP的^住宅的材料通道，将极大地促进这些方法应用到其他净化剂和食肉动物物种特异性的车型在今后的相关研究。在这项研究中传统的方法被用来研究人口贩运的PrP ^住宅材料，这可能有助于PrP的^住宅材料的扩散和总体负担的非常规手段。

Protocol

我们的协议是改编自一个大家此前公布的7。所有涉及动物的程序已获农业部美国农业部（USDA），动植物健康检验局（APHIS），野生动物服务（WS），国家野生动物研究中心（NWRC）的机构动物护理和使用委员会。 1。乌鸦Gavaging 通过美国乌鸦的消化道估计的“伪大脑物质”通过时间。 将5毫升煮和炒鸡蛋全用蓝色染料和灌胃1乌鸦用灌胃针2（ 图1）。<…

Representative Results

所使用的程序表明，乌鸦的消化系统并不之后的痒病脑匀浆7口灌胃消除朊病毒住宅感染4小时。这是灌服PrP的住宅的材料全部20只乌鸦随后通过粪便传播的PrP 住宅材料老鼠。病鼠均经临床鼠标痒病体征和疾病的确认通过Western blot分析完成的体现。 通过消化道的灌胃乌鸦为4小时，根据染料的粪便中存在（ 图1）的材料由乌鸦摄入的?…

Discussion

我们展示了一个过程，通过乌鸦的消化系统记录的PrP的^住宅的材料通过。我们所用的常规方法，以确定是否有乌鸦易位的PrP ^住宅材料到无病的地理区域的能力。他人已经评估的PrP ^分辨率的电阻给反刍^19-21和啮齿类^22,23消化液，两者不能消除它。这些技术未来的应用应该可以应用到其他食肉动物^24，因为他们也有可能遇到的PrP ^住宅材料腐肉?…

Materials

RML Chandler strain mouse-adapted scrapie	Rocky Mountain Laboratories
RC57BL/6 mice	Hilltop Lab Animals
American crows	wild captured
Pen/Strep	Invitrogen	15140-122
Phosphate buffered Saline	Invitrogen	70011-044
Sonicator	Misonix
Proteinase-K solution	Roche	3115887001
Loading buffer	Invitrogen	NP0007 and 0009
Bis-tris SDS PAGE 12% gel	Invitrogen	NP0342
Immobilon PVDF membrane	Millipore	1SEQ00010
Tween 20	Sigma Aldrich	P2287
Bullet blender homogenizer	Braintree Scientific	BBX24B
2.3 mm Zirconia/silica beads	BioSpec Products	11079125Z
Bar224 anti-PrP monoclonal antibody	Cayman Chemical	10009035
Superblock	Thermo Scientific	37517
chemiluminescent substrate	Millipore	WBKLS0500
G-box gel documentation system	Syngene