조류 종의 소화 기관을 통과 한 후 감염성 프리온을 확인하기위한 절차
Summary
청소부는 질병이없는 지역에 자신의 배설물에 전염성 전염성 해면상 뇌증의 프리온을 이동시키다 수있는 가능성이있다. 우리 마우스 적응 스크래피 프리온은 미국의 까마귀의 소화 기관 (까마귀 brachyrhynchos), 죽은 동물의 일반적인 소비자 비록 통과 후 감염성 유지 여부를 확인하는 데 사용 세부 방법.
Abstract
감염성 프리온 PRP (해상도) 재료는 가능성이 치명적인 신경 퇴행성 전염성 해면상 뇌증 (TSE) 질병 (1)의 원인이된다. 만성 소모성 질병 (CWD) 등 TSE 질병의 전송은, 동물 2,3에 동물에서뿐만 아니라 환경 소스를 4-6로 추정된다. 청소부와 육식 소비와 CWD 오염 된 썩은 고기의 배설물을 통해의 PrP 해상도 물질을 이동시키다하는 가능성이있다. 최근 작품은 미국의 까마귀의 소화 시스템 (까마귀 brachyrhynchos), 공통 북미 헤매다 ~ 7의 PrP 해상도 물질의 통과를 기록했다.
우리는 미국의 까마귀를 통해 고해상도의 PrP 물질의 통과를 문서화하는 데 사용되는 절차에 대해 설명합니다. 크로우는 RML 변형 마우스 적응 스크래피와 gavaged하고, 배설물은 4 시간 포스트 위관을 수집 하였다. 까마귀 배설물로 다음 풀링 및 복강 주사 하였다C57BL / 6 마우스. 그들은 마우스 스크래피의 임상 증상을 표현하고, 그 후 안락사 될 때까지 마우스는 매일 관찰 하였다. 증상이 마우스는 365 일 후 접종 할 때까지 감시했다. 웨스턴 블롯 분석은 질병 상태를 확인하기 위하여 실시 하였다. 결과 프리온 테스트 마우스에있는 질병을 일으키는 원인이 까마귀의 소화 시스템을 통해 여행 후 감염을 유지하고 배설물에 존재하는 것으로 나타났다.
Introduction
전염성 해면상 뇌증 (TSE)는 야생 동물에 영향을 미치는 치명적인 전염성 신경 퇴행성 질환, 가축, 인간입니다. TSE 질병의 전염 물질은 프리온 단백질 1의 잘못 폴딩 또는 병원성 이소 PRP (해상도)이 나타납니다. 양과 염소의 스크래피,, 소 해면상 뇌증 (동물 TSE 질환 노새 사슴 (Odocoileus의 hemionus), 흰 꼬리 사슴 (Odocoileus의 virginianus), 엘크 (Cervus의의 elaphus), 그리고 사슴 (에 Alces alces)에 만성 소모성 질병 (CWD)를 포함 국내 가축의 BSE) 으 농장 밍크의 전염성 밍크 뇌증, 고양이의 고양이 해면상 뇌증, 인간이 아닌 영장류 8과 해면상 뇌증, 이국적인 동물원에 이국적인 유제 해면상 뇌증은 가족 Bovidae의 반추. 하나의 인간 TSE 질환, 변종 크로이츠 펠트 – 야콥 병은 희귀의 PrP RES-contamin 소비에 의해 인수 될 것으로 생각됩니다ated 음식 9. 오염 된 쇠고기가 10을 소비하는 경우 마찬가지로, BSE가 인간을 감염시킬 수 있습니다. 모든 TSE 질환, 스크래피와 CWD는 동물에서 동물 2,3,11뿐만 아니라 환경 소스를 4-6로 추정되는 자립 전염병 감염에 대한 근원을 가진 유일한 두 가지입니다. 연구는 대부분의 TSE 질환은 임상 증상의 발현에의 PrP 해상도 재료의 자연적인 노출 사건에서 주목할만한 확장 배양 기간을 필요로 2-4,6,8 및 명백한 종의 장벽을 최소화하지만, 종간 전송 12-14의 가능성을 제거하지 않는 것이 좋습니다 .
감염성 프리온 PRP (해상도) 물질의 확산 메커니즘을 식별 TSE 질환이 풍경을 가로 질러 이동하는 방법에 대한 질문에 대한 답변을 위해 매우 중요하다. 실험 조사는 15, 16, 가금류 및 돼지 17과 미국의 까마귀 (까마귀 풀어야 곤충 것을 제안했습니다hyrhynchos) 7,18가의 PrP 해상도 재료의 수동적 인 사업자 또는 분배기입니다. 까마귀의 소화 시스템을 통해의 PrP 해상도 물질의 통로는 최근에 그들이 TSE 질환 (7)의 분산에 재생할 수있는 역할을 시연, 설명되어 있습니다. 이러한 결과는, 까마귀, 헤매다가 발생할 수 있음이 그럴듯하게 소비하고, 질병이없는 지역에, 대변 증착을 통해 전염성 물질을 수송한다.
우리가 여기에서 설명하는 절차는 까마귀의 소화 시스템을 통해의 PrP 해상도 물질의 통과를 문서화하는 데 사용되었습니다 크게 관련 미래 연구의 다른 폐품과 육식 동물의 종 – 특정 모델에 이러한 방법의 적용을 용이하게합니다. 본 연구에서는 기존의 방법의 PrP 해상도 물질의 확산 및 전반적인 부담에 기여할 수의 PrP 해상도 재료를 인신 매매의 틀에 얽매이지 않는 방법을 연구하는 데 사용되었습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
우리는 까마귀의 소화 시스템을 통해의 PrP 해상도 물질의 통과를 문서화하는 과정을 보여줍니다. 우리는 까마귀는 질병이없는 지리적 영역의 PrP 해상도 물질을 이동시키다 수있는 능력을 가지고 있는지 확인하기 위해 기존의 방법을 사용했다. 다른 사람은 그것을 제거하는 데 실패 둘 다 19 ~ 21과 설치류 (22, 23) 소화 체액을 반추하는의 PrP 해상도의 저항?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는이 연구와 USDA에 사용 된 까마귀를 제공하기위한 S. 베르너에게 감사의 말씀을 전합니다, APHIS, 동물 관리 및 모니터링을위한 WS, NWRC 동물 관리 직원. 기재 또는 제품의 사용은 USDA의 보증을 의미하지는 않습니다. 이 연구를위한 자금 조달은 USDA, APHIS, 수의 서비스에 의해 제공되었다.
Materials
| RML Chandler strain mouse-adapted scrapie | Rocky Mountain Laboratories | ||
| RC57BL/6 mice | Hilltop Lab Animals | ||
| American crows | wild captured | ||
| Pen/Strep | Invitrogen | 15140-122 | |
| Phosphate buffered Saline | Invitrogen | 70011-044 | |
| Sonicator | Misonix | ||
| Proteinase-K solution | Roche | 3115887001 | |
| Loading buffer | Invitrogen | NP0007 and 0009 | |
| Bis-tris SDS PAGE 12% gel | Invitrogen | NP0342 | |
| Immobilon PVDF membrane | Millipore | 1SEQ00010 | |
| Tween 20 | Sigma Aldrich | P2287 | |
| Bullet blender homogenizer | Braintree Scientific | BBX24B | |
| 2.3 mm Zirconia/silica beads | BioSpec Products | 11079125Z | |
| Bar224 anti-PrP monoclonal antibody | Cayman Chemical | 10009035 | |
| Superblock | Thermo Scientific | 37517 | |
| chemiluminescent substrate | Millipore | WBKLS0500 | |
| G-box gel documentation system | Syngene |
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