Постоянно растет резец мыши обеспечивает модель для изучения обновление тканей зуба из зубного эпителия стволовых клеток (десков). Надежная система для последовательно и надежно получения этих клеток из резца и расширение их в пробирке, как сообщается здесь.
Понимание клеточные и молекулярные механизмы, лежащие в основе регенерации зубов и продление стала тема представляет большой интерес 1-4, а резец мыши обеспечивает модель для этих процессов. Этот замечательный орган постоянно растет в течение всей жизни животного и генерирует все необходимые типы клеток из активных пулов взрослых стволовых клеток, расположенных в его губной (к губе) и язычной (в сторону языка) шейки петли (CL) регионы. Только стоматологические стволовые клетки из губной CL привести к ameloblasts, которые генерируют эмаль, внешнее покрытие зубов, на губной поверхности. Это образование асимметричный эмаль позволяет истиранию на кончике резца, и клетки-предшественники и стволовые клетки в проксимальном резца гарантировать, что зубные ткани постоянно пополняется. Возможность изолировать и вырастить эти предшественники или стволовые клетки в пробирке позволяет их расширение и открывает двери для многочисленных экспериментов не достижимых в естественных условиях, например, чкайф пропускная тестирование регуляторных факторов потенциал стволовых клеток. Здесь мы описываем и продемонстрировать надежную и последовательный метод для культивирования клеток от губной CL резца мыши.
Одной из уникальных характеристик позвоночных является эволюция зубов. Зуб стал важным модельной системой для многих областях исследований, как молекулярные пути и морфологические специализации, имеющих отношение к этому органу были исследованы с нескольких точек зрения, в том числе путем развития и эволюционных биологов 5. Совсем недавно, в поле регенеративной медицины начал получить ценную информацию с помощью зуб в качестве модели. В частности, открытие стоматологических эпителиальных стволовых клеток была важным шагом вперед 6-13.
Все грызуны обладают постоянно растущих резцов, чей рост подпитывается стволовых клеток, что делает эти зубы доступную модель системы для изучения регуляции взрослых стволовых клеток. Эксперименты маркировки в 1970-х годах 10,11, а затем генетической линии розыска экспериментов 8,9,12,14, показали, что десков проживают в проксимальной области резца. Стебельклеток потомство в эпителиальной отсек на губной стороны выйти из предполагаемого нише, известный как губной шейки петли (CL), и внести вклад в популяции клеток, называемых транзитных усиления (TA) клетки (рис. 1). В частности, десков проживают в наружной эмали эпителия (OEE) и звездчатого ретикулума (СР) 8,9,14, а внутренний эмаль эпителий (НВО) приводит к клеткам TA, что прогресс через ограниченное число циклов клеток, а затем ход дистально по длине резца (рис. 1). , Отличительным ameloblasts в резца мыши продолжать двигаться дистально вдоль резца на замечательной скоростью около 350 мкм в один день 15,16. Как они двигаются, клетки дифференцируются в зрелые ameloblasts и слой Intermedium (СИ) клеток. После нанесения полную толщину эмаль-матки, многие из ameloblasts апоптоз, а остальные клетки уменьшаться в размерах и регулируют созревание эмали <вир> 17. Родословная других типов клеток в губной CL, например, СР, менее ясно, и данные, касающиеся стволовых клеток в мезенхиме 18 и в языковой CL только начинают появляться.
Использование резцов модель мыши, ряд групп работали, чтобы выяснить генетические пути и биологические процессы клеток, участвующих в естественной основе клеток возобновления органов штока. Тем не менее, губной CL содержит относительно небольшое количество клеток, по оценкам, около 5000 за мыши резца, что делает работу с первичные элементы сложной. Таким образом, были предприняты усилия к культуре и расширить эти клетки в пробирке 6,16,19,20, чтобы открыть новые двери для экспериментальных подходов, которые не достижимы в естественных условиях. Самое последнее исследование продемонстрировало, что эти клетки могут как самообновлению и дифференцировке в амелогенина экспрессирующих клеток при культивировании 13. Здесь мы описываем и продемонстрировать способ-гоэ надежным и последовательным культура клеток из мыши губной CL.
Эпителиальные клетки были впервые успешно культивируют более 40 лет назад 21-24, а в последнее время, успешный изоляция эпителиальных стволовых клеток 25-27 продвинулась наши знания о эпителиальной биологии. Мы сообщаем протокол для выделения десков резца взрослых мышей, относ?…
The authors have nothing to disclose.
Авторы благодарят Сю-Ping Wang и проконсультироваться с DESC культур. Авторы частично финансируется за счет стипендий и грантов от Национального института здоровья (K99-DE022059 до AHJ, К12-GM081266 в MGC, K08-DE022377-02 до О, и R01-DE021420 к ОДК).
Forceps, size 5 | Fine Science Tools | 11251-30 | FST by Dumont, Dumoxel, |
Forceps Straight, fine, 3.5 | Roboz | RS5070 | |
Razorblades | Electron Microscopy Services | #71960 | |
Scalpel Handle No.3 | VWR | ||
Feather Blade No. 15 | Electron Microscopy Services | #72044-15 | Surgical Stainless Steel |
Collagenase Type-1 filtered | Worthington Biochemical Corporation | #4214 | |
Insulin syringe | BD | #329424 | |
Accumax | EMD Millipore | #SCR006 | |
DMEM/F12 | Gibco | 11320-033 | |
EGF | R&D | 2028-EG-200 | |
FGF2 | R&D | 233-FB-025 | |
B27 Supplement | Gibco | 10889-038 |