병원균 감염에 대한 숙주 면역 반응은 긴밀하게 규제 과정이다. 생쥐의 리포 다당류 폐 노광 모델을 이용해서, 그 질병 병인과 관련된 복잡한 메커니즘은 고해상도 평가를 수행하는 것이 가능하다.
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이 논문에서
요약
초록
병원체에 대한 숙주 면역 반응은 복잡한 생물학적 과정이다. 생체 내 연구의 대부분은 고전적인 호스트 병원체 상호 작용이 생쥐를 선택 세균이나 병원균 관련 분자 패턴 (PAMPS)의 복강 내 주사의 장점을 특성화하기 위해 사용. 이러한 기술은 감염증 한테 진찰 Pathobiology와 관련된 엄청난 데이터를 산출하고 있지만, 복강 내 주사 모델은 항상 폐에 호스트 병원체 상호 작용 연구에 적합하지 않다. 생쥐의 급성 폐 염증 모델을 이용해서, 그 선천적 면역 반응은 리포 폴리 사카 라이드 (LPS)를 이용하여 호스트의 고해상도 분석을 수행 할 수있다. 여기서는, 비수술 인두 기관 내 투여를 이용하여 LPS를 관리 질병 병인과 관련된 임상 매개 변수를 모니터링하고, 숙주 면역 반응을 평가하기 위해 기관지 세정액을 활용하는 방법을 설명한다. 설명하는 기술PAMPS 및 병원균의 다양한 범위에 호스트 타고난 면역 반응을 연구하는데 널리 적용 할 수있다. 마찬가지로, 약간의 수정과 함께, 이들 기술은 또한 알레르기 성기도 염증을 평가 연구 및 약리학 애플리케이션에 적용될 수있다.
서론
병원성 박테리아 종과 관련된 폐 감염은 글로벌 병적 상태와 사망률의 흔한 원인이다. 이들 병원균에 대한 숙주 면역 반응을 구동 메커니즘을 결정하는 것은 이러한 감염의 영향을 약하게 할 신규 예방 전략 및 치료제의 개발을 촉진 할 것이다. 여기에 설명 된 프로토콜의 전반적인 목표는 생균에 대한 대리 병원체 관련 분자 패턴 (PAMP)를 사용하여 병원균 감염에 대한 숙주 선천성 면역 반응을 평가하기 위해 유연한 방식으로 사용자에게 제공하는 것이다. 박테리아 숙주 선천성 면역 반응을 평가하기 이전 연구의 대부분은 의한 실행의 상대적 용이성 복막 모델에 초점을 맞추고있다. 이 모델은 매우 유용하고 호스트 병원체 상호 작용과 전신 염증의 분야에서 상당한 발전시킬 수도 있지만,이 모델에서 생성 된 데이터는 항상 연구에 적합하지 involvi호흡기를 겨. 여기서, 급성 폐 염증의 폐 모델은 고전 복강 내 (IP) 주입 모델과 실제 임상 적으로 관련된 확장으로서 제안되어있다. 제안 된 기술은 특정 장기 모델 시스템에서의 선천성 면역 반응의 평가를 위해 로컬 허용한다.
여기서 설명한 방법은 사용자가 공통 PAMP이다 LPS에 숙주 면역 반응을 평가할 수있는 간단하고 강력한 기술을 제공하도록 설계된다. 방법은 기관 내 마우스 및 호흡기 질환 및 급성 폐 손....
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프로토콜
모든 연구는 버지니아 공대의 기관 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 승인하에 및 실험 동물의 관리 및 사용을위한 건강 가이드의 국립 연구소에 따라 수행 하였다.
1. 구인두 관리를 사용하여 LPS의 기관 내 (IT) 예방 접종
- 각 동물의 고유 귀 펀치, 귀 태그, 또는 다른 제도적으로 승인 된 방법 중 하나를 사용하여 식별되어 있는지 확인합니다.
- 기준 체중과 각각의 동물에 대한 몸의 온도를 기록한다.
- LPS의 작업 주식을 준비합니다. 각 마우스 1X 인산염 완충 생리 식염수 (PBS) 1 ㎎ / ㎏ LPS의 50 μL의 복용량을 받게됩니다. 모의 치료 동물은 1X PBS의 50 μl의 선량을 받게됩니다.
- 다음 드롭 방법을 사용하여 이소 플루 란을 투여에 적합한 실을 준비합니다. 기관 지침으로 시작할 수있는 이소 플루 란과 다른 마취제와 이전의 사용에 관한 다양어떤 연구를 보내고, 사람은 모든 지침을 적절하게 충족 보장하기 위해 동물 보호 / 복지의 자신의 기관의 부서에 문의해야합니다. 드롭 방법 이소 플루 란이 옵션을 선택하지 않으면, 다른 마취제는 대체가 있습니다.
- 적절한 안전 캐비닛에, 500 ㎖ 비커의 바닥에 접혀 흡수 종이 타월과 ....
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결과
그람 음성 박테리아의 세포벽은 환경에 매우 풍부 LPS로 구성된다. 민감한 인간의 인구에 LPS를 흡입하면기도 반응성을 악화하고 강력한 면역 response11을 트리거 할 수 있습니다. LPS는 또한 강력한 선천성 면역 반응을 유도하도록 마우스 모델에서 사용되는 일반적인 PAMP이다. 프로토콜이 여기에 설명에서는, 마우스는 E.에서 격리 LPS의 그것의 복용량을받은 대장균 : 인두 IT 관리를 사용하여 (혈청 형 0111 B4). LPS 노출 모델에서 체온과 체중 모두 동물의 사망률과 질병의 진행의 전형적인 대리 마커입니다. LPS의 문제는 점차적으로 24 시간 (그림 1A)의 과정을 통해 다시 기준선에 증가하는 최초의 6 시간 내에 체온 크게 감소의 원인이됩니다. 이 피크 서서히 N에 복구 곳에 그러나 체중은 꾸준히, 24 시간의 과정 (그림 1B) 이상 감소 할 것이다48 ~ 72 시간 내선. 따라서, 체온은 염증의 개시의 초기 .......
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토론
다음과 같이 성공적으로 마우스의 폐에서 호스트 면역 반응을 평가하기위한 가장 중요한 단계는 다음과 같습니다 1) 평가중인 모델에 대한 적절한 마우스 긴장과 섹스를 선택; 2) 폐에 PAMP 전달을 최적화; 3) 제대로 수집하고 BALF를 처리; 4) 제대로 해결 및 조직 병리학 적 평가를위한 폐의 준비.
마우스 균주의 선택은 숙주의 면역 반응을 평가하는 중요한 요소이다. C57BL / 6 마우스는 일반적으로 인해 대부분의 PAMPS에 자신의 TH1 기울이기 강력한 대응에 선천성 면역 연구를위한 최적의 마우스 배경으로 간주됩니다. 마찬가지로, BALB / c 마우스는 일반적으로 인해 TH2의 기울이기로 알레르기 질환 모델 연구에 사용됩니다. 폐암 모델에서 세 번째 일반적으로 사용되는 균주는 유전자 변형 동물을 생성하는 공통의 사용으로 인해 129SvEv 배경에 마우스입니다. 모든 경우에,주의는 실험 설계와 가능하면, 연령과 성별에 엄마시주의해야한다tched 리터 메이트 대조.......
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공개 사항
저자는 더 경쟁 재정적 이익을 선언하지 않습니다.
감사의 글
저자는이 프로젝트의 핵심 및 기술 지원을 제공하는 동물 용 의약품의 VA-MD 지역 대학 감사합니다. 이 작품은 NIH 경력 개발 상 (K01DK092355)에 의해 지원된다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| C57Bl/6J | 잭슨 연구소 | 주식 000664 | |
| 컴팩트 스케일 | Ohaus Scale Corporation | 71142845 | |
| 소형 동물 직장 온도계 | Braintree Scientific | TH 5 | |
| 직장 프로브 | Braintree Scientific | RET 3 | |
| 귀 펀치 | Braintree Scientific | EP-S 901 | |
| E. coli 0111:B4 | InvivoGen | LPS-EB | |
| 1x Phosphate Buffered Saline Life Technologies | 10010-023 | ||
| Isoflurane | Baxter | 40032609 | |
| Intratrachael Administration and Lung Inflation Stand | ICAP Manufacturing | n/a | |
| 설치류 삽관 스탠드 | Braintree Scientific | RIS 100 | |
| 가위(무디기/날카로움) | Fisher Scientific | 13-806-2 | |
| 집게(직선) | Fisher Scientific | 22-327-379 | |
| 집게(45º, 곡선) | Fisher Scientific | 10-275 | |
| 가위(뭉툭한/뭉툭한) | Fisher Scientific | 08-940 | |
| 피펫(200 &마이크로; l 용량) | Gilson | F123601 | |
| Ethanol | Sigma | 459844 | |
| 1 ml 주사기 | BD Medical | 301025 | |
| 10 ml 주사기 | BD Medical | 301604 | |
| 27 G x 0.5 in Needle | BD Medical | 305109 | |
| Refrigerated Microcentrifuge | Fisher Scientific | 13-100-676 | |
| 1.2mm 기관 캐뉼라, 루어 어댑터가 있는 | 하버드 장치 | 732836 | |
| Hank's Balanced Salt Solution | Life Technologies | 14025-076 | |
| 4-0 실크 꼰 외과용 봉합사 | Ethicon | A183 | |
| 루어-튜브 커넥터 키트 | 하버드 장치 | 721406 | |
| 루어 스톱콕 키트 | 하버드 장치 | 721664 | |
| Tygon formula E-3603 실험실 튜빙 | Sigma | R-3603 | |
| 포르말린 솔루션, 중성 버퍼, 10% | Sigma | HT501128-4L | |
| 마우스 IL-1β OptEIA ELISA 키트 | BD Biosciences | 559603 | |
| 마우스 IL-6 OptEIA ELISA 키트 | BD Biosciences | 550950 | |
| 마우스 TNF-α OptEIA ELISA Kit | BD Biosciences | 560478 | |
| 혈구계 | Hausser Scientific | 3520 | |
| 혈구계 커버 안경 | Thermo Scientific | 22-021-801 | |
| Trypan Blue | Thermo Scientific | SV3008401 | |
| 세포학 깔때기 클립 | Fisher | Scientific 10-357 | |
| 세포학 깔때기 | Fisher Scientific | 10-354 | |
| 필터 카드 | Fisher Scientific | 22-030-410 | |
| 현미경 슬라이드 | Fisher Scientific | 12-544-1 | |
| 커버 안경 | Fisher Scientific | 12-540A | |
| 사이토스핀 세포 원심분리기 | Thermo Scientific | A78300003 | |
| Diff 빠른 염색 키트 | Fisher Scientific | ||
| 퍼마운트 마운팅 미디엄 | Fisher Scientific | SP15-500 |
참고문헌
- Matute-Bello, G., et al. An official American Thoracic Society workshop report: features and measurements of experimental acute lung injury in animals. Am. J. respir. Cell Mol. Biol. 44, 725-738 (2011).
- Egger, C., et al.
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