마우스의 자발적인 전이성 신장 세포 암 (mRCC)를 모델링에 따라 신장 절제술

요약

자발 전이성 신장 세포 암종 (RCC) 질병 진행의 모델은 관련 임상 설정에서 치료를 평가하는 데 사용될 수있다. 이 프로토콜은 동소 신장 종양 세포 주입, 적절한 절제를위한 다른 절차를 설명하고, 마지막으로 전이성 부담 및 현지화의 시각 및 생물 발광 점수에 대한 부검 가이드를 간략하게 설명합니다.

초록

신장 세포 암 (RCC)에 새로운 실험 치료학의 향상 테스트의 핵심 과제 중 하나는 충실 초기와 말기 전이성 질환의 진행을 요점을 되풀이 모델의 개발이다. 일반적인 종양 이식 모델은 자궁외 또는 소성을 기본 종양 주입을 사용하지만, 몇 가지 임상을 모방 전신 자연 전이성 질환이 (가) 있습니다. 이 프로토콜은 RCC의 질병의 진행은 환자와 유사한 스테이지 개발하는 주요 단계를 설명합니다. 첫째, 동소 종양 세포 주입을 보여 동계 모델 높게 전이성 마우스 종양 세포주를 사용한다. 방법 누출 및 조기 확산을 방지하기 위해 리겔과 함께 세포와 하위 캡슐 공간으로 표면 및 내부 주입이 (가) 있습니다. 다음은 중요한 사전 및 사후 수술 마우스주의, 종양 베어링 신장 (신장 절제술)의 절단에 대한 절차를 설명합니다. 마지막으로, 그것은 모니터링 및 평가하는 데 필요한 단계를 설명마이크로뿐만 아니라 발광 생물 이미징을 포함하여 매크로 전이성 질병의 진행은, 전신 질환 분포를 점수에 대한 자세한 시각적 부검의 가이드를 제공합니다. 프로토콜이 설명의 목적은 미래의 치료 시험의 예측값을 개선하기 위해 임상 적 전이성 RCC 모델의 광범위한 사용을 용이하게하는 것이다.

서론

신장 세포 암 (RCC) 환자에서 사망의 주요 원인은 일반적으로 신장에서 성장하는 차 종양 제거 수술을 다음 발생 전신 전이성 질환이다. 그러나 생쥐의 실험적인 치료를 평가하는 거의 임상 종양 모델은 전이성 질환을 포함, 적은 여전히 충실하게 현지화 성장, 수술, 그리고 자연 미세 전이 개시 및 진행 ^1-3의 임상 단계를 요점을 되풀이하다. 테스트에서이 차이는 때때로 동물 모델에서 볼 눈에 띄는 항 종양 효과는 항상 환자 ⁴ 유사 성공적인 치료로 번역되지 않은 새로운 치료법의 평가에서 점점 중요 해지고있다. 결과에 이러한 차이는 지역화 자궁외 또는 소성을 기본 종양 모델과 말기 전이성 질환 ^5-7 사이의 차이 약물 효능에서 줄기 수 있습니다. RCC의 경우에는, 단지 몇 가지 연구가 확립 채용했다일반적으로 종양 베어링 신장 있었다 모방 환자가 전체 또는 부분적으로 ^2,3를 제거 자연 재발이 포함 nimal 프로토콜. 마우스 모델 시험이 부족에 대한 이유는 다양합니다. 첫째, 높은 동물의 비용과 종양 세포의 선택 및 전이성 잠재력을 내재 변동성이있다. (예 : 인간 세포주 유도 ^8-10의 설명 참조) 예를 들어, 사람의 신장 세포주 거의 전이되지 경향이 있고, 소성을 기본 착상 일관 보급 먼 병....

프로토콜

1. 동소 신장 종양 이식

1. 세포 배양
   1. 이전 동소 이식에 75 %의 포화 상태에 단층으로 마우스 RENCA ^{LUC 세포를} 성장.
   2. 5 % FBS 함유 미디어, 1,000 rpm에서 원심 분리기 세포, 5 분 동안 4 ° C, PBS에 세척을 3 회 반복의 트립신 처리 및 재 부유 다음과 같습니다. 그런 다음 5 × ⁴ RENCA ^LUC / 5 μL의 혈청이없는 미디어의 농도로 혈청이없는 배지에서 세포를 재현 탁.
      참고 : 변형 또는 사용되는 세포주에 따라 세포가 주입 후 매우 공격적인 마우스 세포의 성장과 보급을 느리게하는 리겔 혈청 무료 매체의 1:1 비율로 재현 탁 할 수있다.
2. 수술과 세포 이식
   참고 : 모든 동물 연구 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC) P에 따라 수행 된 실험 엔드 포인트의 유지 보수 및 결정을 포함하여 여기서 설명rotocol 로스웰 파크 암 연구소의 승인을.
   1. 아이소 플루 란 (2-3 %)을 사용하여 하나의 Balb / C 마우스를 마취. 발을 조이고 충분한 마취를 보장하기 위해 반사를 확인합니다. 건조를 막기 위해 눈에 수의사 연고를 적용합....

결과

그림 1A는이 프로토콜의 개요에 설명 된 절차를 요약 한 회로도를 보여줍니다. 몇 가지 중요한 요인은 각 단계에 대한 고려되어야한다. 예를 들어, 단계 1에서 그 신장에 서브 캡슐 종양 세포 이식을위한 두 가지 방법을 도시한다. 종양 세포는 바늘의주의 제거와 보라고 초과 탈출 유체 (그림 1B-I)에 의해 방지 누설 세포의 지역화 된 위치를 확인하는 작은 흰색 거품과 서브 캡슐 공간에 이식 할 수 있습니다. 누출을 방지하기 위해, 셀은 서브 캡슐 형상의 공간 (도 1b-II)에 도달하기 위해 내부적으로 제 주입 및 혈류로 종양 세포의 초기 분포를 방지하기 위해 매트 리겔과 결합 될 수있다. 신장의 외과 적 제거를 위해, 정확한 타이밍은 사용되는 세포주의 성장 및 전이 잠재력에 달려있다. 최적의 신장 절제술의 방법은 마우스의 고통과 회복을 최소화하기 위해 빠르고,하지만 제어, 수술을 포함한다. 티요관, 신장 동맥과 정맥을 닫습니다 Vicr.......

토론

이 프로토콜의 목적은 주입 / 절제 기술을 설명하기 위해 동계 종양 마우스 모델을 이용하여 임상 관련 자발적 전이성 질환을 평가하는 것이다. 현재, 새로운 실험적인 치료를 평가하는 전임상 연구의 대부분은 전이성 질환의 연구에 포함되지 않습니다 만 몇 가지 기본 종양의 성장, 수술 적 절제, 그리고 궁극적으로 자연 전이성 확산의 단계를 요점을 되풀이하다. 지금까지 유전자 조작 마우스 모델 (GEMMs가) 자발적 신장 세포 질병의 진행 (요약은 ¹⁴ 참조) 말기 전이와 수술 적 치료 전략을 포함하지 않는다을 유도하기 위해 생성 지금까지보고되지 않았다. 따라서, 자연 전이성 신 세포 암의 연구는 현재 동소 종양 세포 주입의 모델로 제한됩니다. 이 모델은 이전에 ^2,3를 개발되었습니다 만,이 프로토콜은 널리 특히에, 새로운 치료법의 평가에 사용되지그것이 가장 예측이있을 수 있습니다 수술 전후의 설정. 이 프로토콜은 세부 사항에 치료 평가에 더 광범위한 사용을 용이하게 할 수있다 필요한 절차를 단.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Pyr을 함유한 DMEM-높은 포도당. 및 L-글루타민	코닝	10-013-CV
FBS	Invitrogen	10437-028
0.25% 트립신 EDTA	Corning	25-053-CL
1x DPBS 칼슘 및 칼슘 없음; 마그네슘	코닝	21-031-CV
Matrigel	BD Biosciences	354234	얼음에 보관해야 합니다
인공 눈물 - 윤활제 안과 연고	Akorn Animal Health	17478-162-35
Pocket pro 애완 동물 트리머	Braintree 과학	CLP9931B
알코올 면봉	VWR	326895
Betadine 용액 면봉	VWR	67618-152-01
MICRO DISSECTING 시저 스트레이트, 블런트 - 25mm 블레이드 - 4.5"	Southpointe 외과	RS-5982
홍채 집게, 톱니 모양, 곡선, 10cm 길이	켄트 과학	INS15915	µ 중 두 개가 필요합니다
. l Hamilton 주사기	Hamilton	7635-01
30 G, 45도, RN 바늘	Hamilton	7803-07
멸균 면 팁 애플리케이터	VWR	10805-144
고온 코터리 키트	Kent 과학적	INS500392
5-0 코팅 Vicryl, 일반 절단 바늘	Ethicon	J834
Reflex 클립 어플리어 7mm 클립용	Kent scientific	INS500343
Reflex 클립, 7mm, 비멸균	Kent scientific	INS500344
집게 제거, 12cm 길이	Kent scientific	INS500347
0.9% 염화나트륨	Baxter Healthcare	2B1322
부프레노르핀 0.01mg/ml
25 G 5/8 "바늘	VWR	BD305122
1 ml 주사기 w/out 바늘	VWR	BD309659
D-Luciferin	골드 바이오 기술	LUCK-1G

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