칠성 장어는 완전 척수 손상 후 운동을 복구 할 수 있습니다. 그러나 일부 척추 - 투사 뉴런 좋은 재생기하고 다른 사람은 없습니다. 이 문서는 완전한 척수 transections 생산 및 현장 하이브리드에 대한 wholemount 뇌와 척수를 준비, 주택 바다 칠성 장어 유생 (최근 변화 성인)에 대한 기술을 보여줍니다.
칠성 장어는 완전 척수 손상 후 운동을 복구 할 수 있습니다. 그러나 일부 척추 - 투사 뉴런 좋은 재생기하고 다른 사람은 없습니다. 이 문서는 완전한 척수 transections 생산 및 현장 하이브리드에 대한 wholemount 뇌와 척수를 준비, 주택 바다 칠성 장어 유생 (최근 변화 성인)에 대한 기술을 보여줍니다.
완전 척수 손상 후 처음 바다 칠성 장어는 절개의 수준 이하로 마비된다. 그러나, 몇 주 후에 운동력을 복구하고,이 propriospinal 축삭 및 뇌간으로부터 돌출-척수 축삭의 재생 단거리 (몇 mm)을 동반한다. 36 대 식별 척추 - 투사 신경 세포 중 일부는 좋은 재생기가 있고 다른 사람은 나쁜 재생기입니다. 이 신경 세포는 쉽게 wholemount CNS 준비에 식별 할 수 있습니다. 선호하는 신경 세포 고유의 메커니즘을 이해하거나 척추 동물의 중추 신경계에 손상 후 축삭 재생을 억제하기 위해, 우리는 좋고 나쁜 재생기 간의 유전자 발현의 차이를 결정하는 방법과 표현은 척수 절개에 의해 영향을 받는다. 이 논문은 미세한 비전 아래 완전 척수 transections을 생산하고, BR을 준비하고, 신선한 물 탱크에서 주택 애벌레에 대한 기술과 최근 변화 성인 바다 칠성 장어를 보여줍니다아인 및 현장 하이브리드에 대한 척수 wholemounts. 간단히, 동물은 16로 유지됩니다 C를 °와 칠성 장어의 벨소리에 1 %의 벤조 카인에 마취. 척수 등쪽 접근 방식을 통해 홍채 절제술 가위로 가로로하고, 동물은 23 ° C에서 신선한 물 탱크에 복구 할 수 있습니다. 현장 하이브리드의 경우, 동물 reanesthetized하고 뇌와 코드가 지느러미 접근 방식을 통해 제거했다.
포유 동물에서 척수 손상 (SCI)는 부상 축삭은 외상 영역을 통해 재생과 적절한 대상에 다시 연결하지 않기 때문에 부상의 사이트 아래 기능의 영구적 인 손실로 이어지는 치명적인 조건이다. 포유류는 달리, 칠성 장어는 완전한 척수 손상 후 운동력을 복구. 1 흥미롭게 칠성 장어 때문에 그들의 큰 크기 2,3 (도 1)의 뇌 제제 마운트 전체 36 척수에서 개별적으로 식별되어 뉴런 돌출 세트를 가지고 . 이러한 척추-돌출 뉴런은 모두 높은 수준의 완전한 척수 절개하여 axotomized된다. 우리 그룹 등의 이전의 연구는 다른 일반적으로 손상 부위를 통해 자신의 축삭을 재생하는 동안, 심지어 이러한 뉴런의 일부는 매우 낮은 재생 능력을 보여 SCI 후 기능 회복의 존재 (그들이 "나쁜 재생기를"으로 간주된다) 것으로 나타났다 (그들이 간주된다 "g짐 우드 재생기 "). 2,3이 특성은 칠성 장어에게 차례를 시도 뉴런의 고유 재생 능력의 차이로 이어질 것입니다 좋고 나쁜 재생기 척추 - 투사 신경 세포 간의 유전자 발현의 차이를 연구하는 재미있는 척추 동물 모델을 만드는 같은 외부 환경에서 축삭을 재생. 1
우리가 이전에 보여 주었다이....
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이 프로토콜에 사용되는 모든 재료는 표 1을 참조하십시오.
실험은 템플 대학에서 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다.
1 동물
2 완전 척수코드 절개
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이 방법을 사용할 때 얻을 수있는 결과의 예를 들어, 식별 척수-돌출 제어의 신경 세포와 이주의 neogenin 성적 증명서의 발현을 보여주는 wholemounted 뇌의 대표 이미지는 병변 애벌레 바다 칠성 장어는 그림 2에 나타내었다 게시 할 수 있습니다. 독자는 완전한 척수 절개 및 자세한 사항은 바다 칠성 장어의 신경 세포를 돌출 식별 척수의 재생 능력 후 neogenin의 표현 사이의 관계를보고 이전의 연구 (6)라고합니다. 간략하게, 결과는 식별 척수 손상 후 신경 세포 - 돌출 neogenin 수용체의 발현에 변화가 있음을 보여 주었다. neogenin 수용체 우선적 M1, I1, I2, I4, 또는 M의 뉴런 (도 2b 참조)이 결과는 결과를 보여 같은 나쁜 재생기로 표현되는 완전한 척수 절개 후 두 주및 프로토콜의 neogenin 수용체가 이들 세포의 재생의 실패에 관여 할 수 있음을 시사한다.
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여기에서 우리는 애벌레 바다 칠성 장어의 완전 척수 절개 후방 뇌 해부를 수행하기 위해 상세한 프로토콜을 제시한다. 이 절차는 원위치 혼성화에 전체 실장 뇌에 의한 척수 손상 후 척수 식별 돌출 뉴런 간의 유전자 발현의 차이를 분석한다. 절차에서 중요한 단계는 부드럽게 한 쌍의 유충의 주둥이를 터치하여 24 시간 후 stereomicrocope 하에서 척수의 절단 단부를 관찰함으로써 제어되고 확인 될 수있는 완전한 척수 절개의 정확한 수행한다 상처 부위에 어떠한 움직임 꼬리가없는 경우 집게 표시한다. 또한, 수술에 사용되는 가위 무딘 아닌 동물의 회복을위한 중요한 한 깨끗한 절단이 완전히 척수 쪼개다 위해 수행된다는 것이다.
부상 후 동물의 생존은 매우 ANIM을 유지하여 개선수술 중 및 제 24 시간 동안 공기 건조한 후 얼음 냉수에 상처를 허용하는 데 사용되는 시간 동안 얼음에 ALS. 이 기간 후에 상처 닫히고 동물은 이미 실온에서 담수와 탱크로 이송 될 수있다.
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저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.
NIH 보조금 NS14837, R01 NS38537, R24 HD050838 Michael E. Selzer 박사의 지원; Shriners Research 보조금 SHC-85220을 Michael E Selzer 박사에게 수여합니다. 및 Shriners Research Grant SHC-85310을 Michael I. Shifman 박사에게 수여합니다. 안톤 바레이로-이글레시아스 박사는 Fundación Barrié(스페인)와 Xunta de Galicia(스페인 갈리시아)의 지원을 받았습니다.
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| PBS의 트리카인 메탄 설포네이 | 스펙트럼 | TR108 | 벤조카인 포화 용액 |
| #3 | Fine Science Tools (FST) | 10003-12 | |
| 메스용 블레이드: #11 | Fine Science Tools | 10011-00 | |
| Castroviejo 가위 #8 | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| 겸자 #4 & #5 | Dumont, Switzerland | Roboz RS4955 | #4 척수 해부용; #5 수갑 박리용 |
| 해부 현미경 | Olympus | SZ51 | |
| Sylgard | Dow Corning Co. | 184 | |
| 곤충 핀 0.15, 0.20 mm | Austerlitz | 뇌 및 척수 고정을위한 카탈로그 # 0.15 mm; 몸 0.20 mm | |
| 캡이있는 7 ml HDPE 섬광 튜브 | Fisher Scientific | 03-337-1 | |
| 파라 포름 알데히드 16 % | 전자 현미경 과학 (EMS) | 19210 | PBS에서 4 %로 희석 |
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