삼투 물 투수 계수 (P 측정<sub&gt; F</sub&gt;) 구형 세포 : 예를 들어 식물 절연 원형질체

Arava Shatil-Cohen; Hadas Sibony; Xavier Draye; François Chaumont; Nava Moran; Menachem Moshelion

doi:10.3791/51652

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방법 논문

삼투 물 투수 계수 (P 측정

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DOI:

10.3791/51652

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2014년 10월 8일

Arava Shatil-Cohen¹ , Hadas Sibony¹ , Xavier Draye² , François Chaumont³ , Nava Moran¹ , Menachem Moshelion¹

¹The RH Smith Institute of Plant Sciences and Genetics in Agriculture, The Hebrew University of Jerusalem, ²Earth and Life Institute, Université catholique de Louvain, ³Institut des Sciences de la Vie, Université catholique de Louvain

이 논문에서

요약

세포의 삼투 투수 계수 (P의 _F)를 측정하는 것은 아쿠아 포린의 규제 메커니즘 (AQPs)를 이해하는 데 도움이 될 수 있습니다. 여기에 제시된 구면 식물 세포 원형질체에서 P _F 형 결정은 원형질체 분리 욕조와 일정한 관류 동안 삼투 도전 결과로서 부피 변화의 초기 레이트의 수치 분석을 포함한다.

초록

AQP 규제 메커니즘을 공부하는 것은 세포 및 전체 공장 수준 모두에서 물 관계의 이해에 매우 중요합니다. 삼투 투수 계수 식물 원형질체에서 (P에 _F), 예컨대 개구리 난 모세포와 같은 다른 세포 구형도 원칙의 적용을위한 판단이 매우 간단하고 효율적인 방법이 여기에서 제시 하였다. 분석의 첫 번째 단계는 적절한 등장 성 용액 챔버로 효소 분해에 의해 관심의 식물 조직으로부터 원형질체의 분리이다. 두 번째 단계는 삼투 도전 세이로 구성 챔버의 바닥면에 고정화 된 원형질체는 저장성 용액하여 등장액으로 일정한 관류 시작하고 그 다음에 제출된다. 세포 부종 비디오 기록이다. 세 번째 단계에서, 이미지는 부피 변화를 수득 오프라인 처리되어 부피 변화의 시간 코스는 osmola의 변화의 시간 경과와 상관챔버 관류 매체의 RITY, P의 _F를 산출하기 위해, matlab에 ( 'PfFit')로 작성된 커브 피팅 절차를 사용하여.

서론

세포막에 걸쳐 물 흡수와 흐름은 셀룰러 및 전체 공장 수준 모두에서 식물의 존재에 대한 기본적인 요구 사항입니다. 세포 수준에서, 아쿠아 포린 (AQPs)는 세포막 ^1-3의 삼투 투수 계수 (P의 _F)의 조절에 중요한 역할을한다.

지금까지 여러 가지 방법으로 다른 식물 기관에서 원형질체의 내생 P _{f를 측정에} 사용되어왔다 (즉 뿌리, 엽육, endodermis 등., 쇼몽 등. ⁴ 검토). P _{f를 측정하는} 방법 중 하나는 삼투 도전 원형질체을 노출하고 그 부피 변화의 초기 속도를 모니터링 할 수있다 (예., 체적 변화의 초기 선형 단계의 기울기). 두 가지 방법은 이전에 용액의 순간 과거에이 방법에 기초하여 설명 모두 기초 하였다. 첫 번째는 immobiliz 구성마이크로 피펫으로 흡입 원형질체를 보내고 용액 흐름 ⁵ 및 ⁶ 마이크로 ^피펫을 사용하여 다른 하나의 용액으로부터 원형질체를 전송하는 두 번째 스위칭. 빠른 용액 교환 매우 시작에서 화상 획득을 허용 한 마이크로 피펫 흡입 및 마이크로 피펫 전사 방법은, 가능성....