Her beskriver vi en enkel og allment tilgjengelig mikros teknikk for å skaffe høy kvalitet digital video av Drosophila voksen og larve mutante fenotyper fra en lateral perspektiv.
Drosophila melanogaster er en kraftig eksperimentelt modellsystem for å studere funksjonen av nervesystemet. Genmutasjoner som forårsaker dysfunksjon i nervesystemet ofte produsere levedyktig larver og voksne som har locomotion defekte fenotyper som er vanskelig å tilstrekkelig beskrive med tekst eller helt representerer med ett fotografisk bilde. Gjeldende moduser av vitenskapelig publisering, derimot, støtter innlevering av digital video media som supplerende materiale til å følge et manuskript. Her beskriver vi en enkel og allment tilgjengelig mikros teknikk for å anskaffe høykvalitets digital video av både Drosophila larver og voksne fenotyper fra en lateral perspektiv. Video av larver og voksen locomotion fra en side-visning er en fordel fordi det gir observasjon og analyse av subtile forskjeller og variasjoner i avvikende lokomotiv atferd. Vi har med hell brukt teknikken til å visualisere og kvantifisere aberrant krypende atferd i tredje stadium larver, i tillegg til voksne mutante fenotyper og atferd inkludert grooming.
Den felles bananflue Drosophila melanogaster er en kraftig eksperimentelt modellsystem for å studere funksjonen av nervesystemet 1-3. Evolutionary bevaring av struktur og funksjon av nervesystemet med mennesker, så vel som enkel genetisk manipulasjon og et stort utvalg av genetiske verktøy gjør Drosophila premieren organisme å modellere menneskelige nevrodegenerative sykdommer fire. Genmutasjoner som forårsaker dysfunksjon i nervesystemet ofte resultere i levedyktige mutant larver og voksen Drosophila med nedsatt bevegelse. Fenotyper observert i nervesystemet defekte mutanter inkluderer redusert sats på locomotion, avvikende koordinering, og spastiske bevegelser hos voksne, samt underskudd i peristaltiske sammentrekning av kroppen veggen muskulaturen, og delvis lammelse av larver. Disse fenotyper har blitt utnyttet i utviklingen av high-throughput genetiske skjermer og locomotion analyser av mutant larver 5, 6 og voksen 7-10 Drosophila rettet mot kvantifisering av bevegelsesfunksjon og identifisere gener som er nødvendig for funksjon av nervesystemet. Mens disse tilnærmingene er svært nyttig for å kvantifisere larver og voksen lokomotiv atferd, klarer de ikke å formidle kvalitativ informasjon om hvert enkelt avvikende atferd. For eksempel, mens mutant tredje instar larver kan utvise endrede locomotion parametre i en atferdsanalyse, kan det være uklart om dette er et resultat av endringer i rytmiske peristaltiske sammentrekninger under gjennomgangen syklus, generell mangel på koordinering, eller delvis lammelse av bakre kroppen vegg muskulatur. Her beskriver vi en enkel og allment tilgjengelig mikros teknikk for å anskaffe høykvalitets digital video av Drosophila voksen og larve lokomotiv fenotyper fra en lateral perspektiv. Digital video kjøpt fra en lateral perspektiv tillater direkte observasjon og analyse av subtile forskjeller i Locomotive atferd fra en mer informativ side-visning orientering.
Drosophila melanogaster 's styrke som et modellsystem for å studere nervesystemet fungerer stammer i stor grad fra konvergens av de kraftige genetiske verktøy tilgjengelig og det brede spekter av robuste atferdsanalyser utviklet. Her presenterer vi en enkel og allment tilgjengelig mikros teknikk for å anskaffe høykvalitets digital video av Drosophila voksen og larve lokomotiv fenotyper fra en lateral perspektiv. Vi har med hell brukt denne tilnærmingen til å karakterisere og kvantifisere grad…
The authors have nothing to disclose.
Forfatterne ønsker å erkjenne Alexandra Opie for teknisk bistand og støtte, James Barton for å gi video fortellerstemme, og Ramona Flatz og Joellen Sweeney for å vises i den medfølgende video. Dette arbeidet ble støttet av MJ Murdock Charitable Trust (Grant nr 2012205 til JED).
Trinocular Stereozoom Microscope | Olympus Corporation | SZ6145TR | ½ C-mount was removed and replaced with 1x C-mount |
1X C-mount | Leeds Precision Instruments | LSZ-1XCMT2 | |
Digital Camera Coupler (43mm thread) | Qioptiq Imaging Solutions | 25-70-10-02 | |
58mm to 48mm Step Down Ring | B&H Video | GBSDR5848 | |
48mm to 43mm Step Down Ring | B&H Video | GBSDR4843 | |
Lensmate Adapter Kit for Canon G10 | LensMateOnline.com | ||
Canon PowerShot G10 Digital Camera | Canon U.S.A., Inc. | ||
1.5ml Spectroscopic PolystereneCuvette | Denville Scientific | U8650-4 |