小鼠量度本地过敏反应
Summary
过敏性反应，其特征在于由肥大细胞和嗜碱性粒细胞的活化，是由交联的IgE和炎症介质的释放驱动。过敏性反应的定量评估可以用伊文思蓝染料监察过敏原刺激后改变血管通透性来实现。
Abstract
过敏性反应是肥大细胞和嗜碱性粒细胞，并随后释放血管活性和促炎介质的活化的结果。暴露于变应原的致敏个体可能会导致因不同轻微的红斑到危及生命的过敏反应临床症状。在实验室中，各种动物模型已经发展到理解驱动过敏性反应的机制。在这里，我们描述了用于测量变化，血管通透性量化局部过敏性反应的详细方法。局部过敏反应测定最早是在20世纪20年代的报道，并已改编自Kojima 等人发表的技术。在2007年1，在该试验中，敏化，以OVA小鼠左耳用车辆和在右耳用OVA激发。这后面是静脉注射伊文思蓝染料。注射伊文思蓝后十分钟，将动物安乐死，并在已渗出的染料到耳朵在一夜之间甲酰胺提取。所提取的染料的吸光率，然后定量用分光光度计。这种方法确实导致的局部过敏反应的可视化和可量化的表现。
Introduction
I型超敏反应是由IgE介导的肥大细胞和嗜碱性粒细胞的表面上的抗原诱导的交联介导的。这导致细胞脱颗粒和血管活性和炎症介质如组胺，类胰蛋白酶，和血小板活化因子2的释放。以下预成形介体的脱颗粒过程中释放细胞，肥大细胞合成和释放前列腺素和白三烯，这进一步增加血管渗透性，3。最初的临床反应迅速发生，并且被称为“直接反应”。在皮肤中，风团和耀斑响应的抗原激发分钟内很容易地看到。根据这一挑战的剂量，就可以看到一个“晚期反应”几个小时后。后期肿胀是由 于局部水肿和白细胞募集到组织2。组胺，一般被认为是主要的介体参与立即过敏性反应，作用于组胺受体1（HR1）表示对血管和组胺受体2（HR2）表达平滑肌。的联合作用增加了血流量和血管通透性在炎症4的位点。
多种过敏的动物模型已经发展为了研究参与过敏性炎症的机制，包括过敏性哮喘，全身性过敏反应，及本地过敏反应模型。静脉给药染料被用来衡量在动物模型中的局部过敏反应近一个世纪以来，随着出版物描述了这一技术可以追溯到20世纪20年代5。兔和豚鼠分别用于测试速发型超敏反应的第一个动物模型，以及最敏感的反应普遍发现在耳朵5,6。该法后来被证实为7大鼠和小鼠8使用。
从历史上看，各种实验方法已被使用，包括在注射之前，染料，染料注射之前注射抗原的注射抗原，以及同时注射的染料和抗原。静脉内给予染料作为测定过敏性反应的装置是一种多用途的测定法，它可以用于测量有源，无源，和反向被动反应的5,9。许多染料已被利用来评估过敏性反应，包括锥虫蓝，滂胺天蓝，伊文思蓝，嘉基蓝536，和印度油墨5,6,9。 0.5％伊文思蓝溶液是目前用于测定过敏性反应在皮肤上的标准染料。
挑战过敏性反应是短暂的;在10达到最大强度-染料注射15分钟，无反应是可见的，如果染料被施用多于30分钟挑战后，无论使用9的动物物种。染料外渗的定量原创LY获得通过测量风团大小的蓝色染料7-9所示。此外，脱颗粒的肥大细胞的数量可以通过从反应的部位切除的皮肤组织和甲苯胺蓝7染色来定量。肥大细胞脱颗粒经常被用来作为标记物用于皮肤，IgE介导的过敏性反应，如肥大细胞是表达高亲和力IgE受体了FcεRI主本地细胞群。分光光度技术测定染料外渗进入组织的被动皮肤过敏反应（PCA）在大鼠10和鼠标11，在20世纪90年代开发的。
以下本地过敏试验方案是改编自小岛等 。1，并利用鸡蛋卵白蛋白（OVA）作为抗原诱发过敏性反应。然而，可以使用的抗原相比OVA其他如果需要的话。该测定，然后使用伊文思蓝染料以监测变化的血管permeabilit发生由于肥大细胞的IgE交联和组胺释放年。
Protocol
Representative Results
Discussion
许多过敏性疾病的标志物被用于评估下面的变应原激发过敏性反应，包括在气道激发的设置改变循环组胺，Th2型细胞因子的产生和细胞招募的水平进入支气管肺泡灌洗液的强度。而在这些参数监测的变化是研究过敏反应重要的是，生物标记物不总是关联与临床过敏性疾病。在本协议中所描述的地方过敏反应试验提供了本地化的血管通透性为局部过敏性疾病的一个相关可重复的测量。用蓝色染料外?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The authors would like to acknowledge Dr. Ellen M. Fox for her work regarding this model of local anaphylaxis. This work was supported by the Uniformed Services University of the Health Sciences grant number R073UE.
Materials
| Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| BALB/c Mice | The Jackson Laboratory | 651 | |
| PBS pH 7.4 | Quality Biologic | 114-058-101 | |
| Ovalbumin | Sigma | A5503-10G | |
| Imject Alum | Thermo Scientific | 77161 | Mix thoroughly before use |
| Evans Blue Dye | Sigma | E2129 | |
| Formamide | Sigma | 295876 | 99%+ Spectrophotometric grade |
| Isoflurane, USP | Phoenix | NDC 57319-474-06 | |
| 1cc Insulin syringes | BD | 329654 | |
| 3/10 cc Insulin syringe with 31G needle | Terumo | NDC 100861 | |
| 27G Needles | BD | 305109 | |
| Forceps | F.S.T. | 11000-12 | |
| Surgical scissors | F.S.T. | 14070-12 | |
| 5ml Polystyrene round-bottom tubes | BD Falcon | 352058 | |
| 1.5ml Microcentrifuge tubes | Medical Supply Partners | 15-1151 | |
| 15ml Conical tubes | BD Falcon | 352097 | |
| Flat-bottom 96 well plate | Costar | 3590 | |
| Scotch tape | |||
| RC2 Rodent Anesthesia System | VetEquip | 922100 | |
| Vortex Genie 2 | Scientific Industries | SI-0236 | Model G560 with 3 inch platform |
References
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