चूहे में स्थानीय तीव्रग्राहिता मापने
Summary
मस्तूल कोशिकाओं और basophils के सक्रियण द्वारा विशेषता एलर्जी प्रतिक्रियाओं, आईजीई के पार से जोड़ने और proinflammatory मध्यस्थों की रिहाई से प्रेरित हैं. एलर्जी प्रतिक्रियाओं का एक मात्रात्मक आकलन allergen चुनौती के बाद संवहनी पारगम्यता में परिवर्तन की निगरानी करने के लिए इवांस नीले डाई का उपयोग करके प्राप्त किया जा सकता है.
Abstract
एलर्जी प्रतिक्रियाओं मस्तूल कोशिकाओं और basophils, और vasoactive और proinflammatory मध्यस्थों के बाद रिलीज की सक्रियता का परिणाम है. एक अवगत व्यक्ति में एक allergen के संपर्क में मामूली पर्विल से जीवन धमकी तीव्रग्राहिता के लिए अलग अलग है कि नैदानिक लक्षणों में परिणाम कर सकते हैं. प्रयोगशाला में, विभिन्न पशु मॉडल एलर्जी प्रतिक्रियाओं ड्राइविंग तंत्र को समझने के लिए विकसित किया गया है. इस के साथ साथ, हम स्थानीय एलर्जी प्रतिक्रियाओं यों संवहनी पारगम्यता में परिवर्तन को मापने के लिए एक विस्तृत विधि का वर्णन. स्थानीय तीव्रग्राहिता परख पहले 1920 के दशक में सूचना मिली थी, और कोजिमा एट अल द्वारा प्रकाशित तकनीक से अनुकूलित किया गया है. 2007 में 1. इस परख में, ओवीए को अवगत चूहों वाहन के साथ बाएं कान में और ओवीए साथ सही कान में चुनौती दी है. इस इवांस नीले रंग की एक अंतःशिरा इंजेक्शन द्वारा पीछा किया जाता है. दस मिनट इवांस ब्लू इंजेक्शन लगाने के बाद, पशु में extravasated गया है कि डाई euthanized और हैकानों में formamide में रात भर निकाला जाता है. निकाले डाई के absorbance तो एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर साथ मात्रा निर्धारित है. इस विधि मज़बूती से एक स्थानीय एलर्जी की प्रतिक्रिया का एक दृश्य और quantifiable अभिव्यक्ति में यह परिणाम है.
Introduction
प्रकार मैं अतिसंवेदनशीलता मस्तूल कोशिकाओं और basophils की सतह पर आईजीई के प्रतिजन प्रेरित पार से जोड़ने द्वारा मध्यस्थता है. इस सेलुलर degranulation और ऐसे हिस्टामिन, tryptase, और प्लेटलेट सक्रिय कारक के रूप में 2 vasoactive और proinflammatory मध्यस्थों के रिलीज में यह परिणाम है. Degranulation दौरान preformed मध्यस्थों के रिलीज के बाद, मस्तूल कोशिकाओं synthesize और आगे संवहनी पारगम्यता 3 में वृद्धि, जो prostaglandins और leukotrienes जारी. प्रारंभिक नैदानिक प्रतिक्रिया तेजी से होता है और एक "तत्काल प्रतिक्रिया 'के रूप में जाना जाता है. त्वचा में, एक खान व भड़क प्रतिक्रिया प्रतिजन चुनौती के मिनट के भीतर आसानी से दिख रहा है. चुनौती की खुराक पर निर्भर करता है, यह एक "देर चरण प्रतिक्रिया" कुछ घंटे बाद निरीक्षण करने के लिए संभव है. देर चरण सूजन के ऊतकों 2 में स्थानीयकृत शोफ और ल्युकोसैट भर्ती की वजह से है. Histamine, आम तौर पर में भाग लेने के प्रमुख मध्यस्थ मानातत्काल एलर्जी प्रतिक्रियाओं, 1 (HR1) जहाजों और हिस्टामिन रिसेप्टर 2 (HR2) चिकनी पेशी पर व्यक्त की पर व्यक्त हिस्टामिन रिसेप्टर पर कार्य करता है. संयुक्त प्रभाव सूजन 4 के स्थल पर रक्त प्रवाह और संवहनी पारगम्यता बढ़ जाती है.
एलर्जी के पशु मॉडल की एक किस्म एलर्जी अस्थमा, प्रणालीगत तीव्रग्राहिता, और स्थानीय तीव्रग्राहिता की मॉडल सहित एलर्जी सूजन में शामिल तंत्र का अध्ययन करने के क्रम में विकसित किया गया है. अंतःशिरा डाई प्रशासन प्रकाशनों 1920 के दशक से 5 वापस इस तकनीक डेटिंग का वर्णन के साथ, लगभग एक सदी के लिए पशु मॉडल में स्थानीयकृत एलर्जी प्रतिक्रियाओं को मापने के लिए इस्तेमाल किया गया है. खरगोश और गिनी सूअरों तत्काल अतिसंवेदनशीलता प्रतिक्रियाओं का परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल पहली पशु मॉडल थे, और सबसे संवेदनशील प्रतिक्रियाएं आम तौर पर कान 5,6 में पाए गए. परख बाद में चूहों 7 और चूहों 8 में उपयोग के लिए मान्य किया गया था.
ऐतिहासिक दृष्टि से,प्रयोगात्मक विधियों की एक किस्म पूर्व डाई का इंजेक्शन, डाई का इंजेक्शन से पहले प्रतिजन के इंजेक्शन के लिए प्रतिजन इंजेक्शन, और डाई और प्रतिजन के एक साथ इंजेक्शन सहित इस्तेमाल किया गया है. एलर्जी प्रतिक्रियाओं को मापने के लिए एक साधन के रूप में अंतःशिरा डाई प्रशासन यह निष्क्रिय, सक्रिय मापने के लिए इस्तेमाल किया, और निष्क्रिय प्रतिक्रियाओं 5,9 रिवर्स किया जा सकता है के रूप में एक बहुमुखी परख है. कई रंगों Trypan ब्लू, Pontamine स्काई ब्लू, इवांस ब्लू, Geigy ब्लू 536, और भारत स्याही 5,6,9 सहित एलर्जी प्रतिक्रियाओं का आकलन करने के लिए उपयोग किया गया है. 0.5% इवांस नीले रंग का एक समाधान वर्तमान में त्वचा में एलर्जी प्रतिक्रियाओं को मापने के लिए इस्तेमाल मानक डाई है.
चुनौती के लिए anaphylactic प्रतिक्रिया क्षणिक है; अधिकतम तीव्रता 10 के भीतर पहुँच जाता है – डाई इंजेक्शन के 15 मिनट, और डाई की परवाह किए बिना 9 इस्तेमाल किया जानवरों की प्रजातियों की चुनौती के बाद 30 से अधिक मिनट दिलाई है अगर कोई प्रतिक्रिया दिखाई है. डाई तरल पदार्थ का स्त्राव की मात्रा मूल थाly नीले डाई 7-9 से संकेत के रूप में खान आकार को मापने के द्वारा प्राप्त की. साथ ही, degranulated मस्तूल कोशिकाओं की गिनती प्रतिक्रिया की साइट से त्वचा ऊतक excising और 7 नीले toluidine साथ धुंधला द्वारा मात्रा निर्धारित किया जा सकता है. मस्तूल कोशिकाओं उच्च आत्मीयता IgE रिसेप्टर FcεRI व्यक्त मुख्य स्थानीय सेल की आबादी के रूप में मस्तूल सेल degranulation अक्सर, त्वचीय, IgE मध्यस्थता एलर्जी प्रतिक्रियाओं के लिए एक मार्कर के रूप में प्रयोग किया जाता है. ऊतक में डाई तरल पदार्थ का स्त्राव को मापने के लिए Spectrophotometric तकनीक 1990 में चूहे 10 और माउस 11 में निष्क्रिय त्वचीय तीव्रग्राहिता (पीसीए) के लिए विकसित किए गए.
निम्नलिखित स्थानीय तीव्रग्राहिता परख प्रोटोकॉल. कोजिमा एट अल से 1 अनुकूलित, और एलर्जी प्रतिक्रियाओं को जानने के लिए प्रतिजन के रूप में चिकन अंडे ovalbumin (OVA) का इस्तेमाल किया गया था. अगर वांछित हालांकि, ओवीए अलावा अन्य एंटीजन इस्तेमाल किया जा सकता है. परख तो नाड़ी permeabilit में परिवर्तन की निगरानी करने के लिए इवांस नीले डाई का उपयोग करता हैसेल आईजीई पार से जोड़ने और histamine रिलीज मस्तूल की वजह से होती है कि वाई.
Protocol
Representative Results
Discussion
एलर्जी रोग के कई मार्करों airway चुनौती की सेटिंग में ब्रोन्कोएल्वियोलर द्रव में घूम हिस्टामिन, Th2 साइटोकाइन उत्पादन, और सेल भर्ती के स्तर में परिवर्तन सहित allergen चुनौती निम्नलिखित एलर्जी प्रतिक्रियाओं की …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The authors would like to acknowledge Dr. Ellen M. Fox for her work regarding this model of local anaphylaxis. This work was supported by the Uniformed Services University of the Health Sciences grant number R073UE.
Materials
| Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| BALB/c Mice | The Jackson Laboratory | 651 | |
| PBS pH 7.4 | Quality Biologic | 114-058-101 | |
| Ovalbumin | Sigma | A5503-10G | |
| Imject Alum | Thermo Scientific | 77161 | Mix thoroughly before use |
| Evans Blue Dye | Sigma | E2129 | |
| Formamide | Sigma | 295876 | 99%+ Spectrophotometric grade |
| Isoflurane, USP | Phoenix | NDC 57319-474-06 | |
| 1cc Insulin syringes | BD | 329654 | |
| 3/10 cc Insulin syringe with 31G needle | Terumo | NDC 100861 | |
| 27G Needles | BD | 305109 | |
| Forceps | F.S.T. | 11000-12 | |
| Surgical scissors | F.S.T. | 14070-12 | |
| 5ml Polystyrene round-bottom tubes | BD Falcon | 352058 | |
| 1.5ml Microcentrifuge tubes | Medical Supply Partners | 15-1151 | |
| 15ml Conical tubes | BD Falcon | 352097 | |
| Flat-bottom 96 well plate | Costar | 3590 | |
| Scotch tape | |||
| RC2 Rodent Anesthesia System | VetEquip | 922100 | |
| Vortex Genie 2 | Scientific Industries | SI-0236 | Model G560 with 3 inch platform |
References
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