نماذج حيوانية من المرض لدى الأطفال يمكن أن تواجه بداية مبكرة وتطور المرض العدواني. سريريا تقديم العلاج ذات الصلة لنماذج الماوس الشباب يمكن أن يكون صعبا من الناحية الفنية. يصف هذا البروتوكول طريقة الحقن في الوريد غير الغازية عن الفئران حديثي الولادة في غضون شهرين بعد الولادة الأيام الأولى من الحياة.
الحقن في الوريد هي الطريقة المعمول بها سريريا لتقديم العلاجات. للقوارض الكبار والحيوانات الكبيرة، والحقن الوريدية هي مجدية تقنيا والروتينية. ومع ذلك، يمكن لبعض نماذج الماوس يكون بداية مبكرة من المرض مع التقدم السريع الذي يجعل إدارة العلاجات المحتملة صعوبة. الوريد الصدغي (أو الوجه) هو مجرد الأمامي لبرعم الأذن لدى الفئران وبشكل واضح للعيان اليومين الأولين بعد الولادة على جانبي الرأس باستخدام مجهر تشريح. خلال هذا الإطار، يمكن حقنه في الوريد الصدغي مع وحدات التخزين ما يصل إلى 50 ميكرولتر. الحقن هو آمن وجيد التحمل من قبل كل من الجراء والسدود. اكتمال إجراء حقن نموذجي في غضون 1-2 دقائق، وبعد ذلك يتم إرجاع الجرو إلى قفص المنزل. في اليوم الثالث بعد الولادة الوريد من الصعب تصور ويصبح إجراء الحقن لا يمكن الاعتماد عليها من الناحية الفنية. وقد استخدمت هذه التقنية لإيصال فيروس الغدة المرتبطة (AAV) vectأملاح الإماهة الفموية، والتي بدورها يمكن أن توفر تقريبا في جميع أنحاء الجسم، ومستقر التعبير التحوير لحياة الحيوان اعتمادا على المصلي الفيروسي الذي تم اختياره.
تقديم العلاجات للجهاز العصبي المركزي (CNS) في نماذج الفئران من أمراض الأطفال ما زال يمثل تحديا. الفئران هذا النموذج الحالات المرضية حديثي الولادة هي الأصغر وغير ناضجة تنمويا، وبالتالي يمكن أن يكون صعبا لحقن مباشرة في الهياكل المناسبة داخل الجهاز العصبي المركزي. الحقن داخل الأوعية الدموية من العوامل العلاجية هو غير الغازية أو أسلوب جيد التحمل لتوصيل الخلايا، والمخدرات، أو ناقلات فيروسية لكامل الجسم بما في ذلك الجهاز العصبي المركزي وشبكية العين 1-5 3،5-9. المنشورات السابقة تصف الزمانية الوريد حقن الوجه باستخدام نقل transilluminator 10،11، دون مجهر تشريح 11،12، أو التي تتطلب شخصين لحقن 10. تقنية الحقن الموصوفة في هذا البروتوكول هو مفيد لشخص واحد يمكن أن تضخ الجراء، ومصدر الضوء لعرض الوريد الصدغي لا لمس الجرو، مما يلغي الحاجة إلى الشريط الجراحية أو مرفق من الجرو على سطح ثابتمثل نقل transilluminator 11. تسليم الغدة المرتبطة ناقلات فيروسية المصلي 9 (AAV9) في الفئران ينتج التعبير القوي في الخلايا العصبية والخلايا النجمية في جميع أنحاء الدماغ والحبل الشوكي (الشكل 1). تسليم داخل الأوعية ناقلات فيروسية في الوريد الوجهي الصدغي السطحي قد استخدمت بشكل صحيح في مختلف الدراسات في الفئران حديثي الولادة لعلاج الخلل العصبي العضلي للأطفال ضمور العضلات الشوكي (SMA) 2،4،13،14 وزادت في نهاية المطاف حياة الفئران المعالجة.
الحقن داخل الأوعية الدموية للفئران حديثي الولادة تستهدف أيضا بشكل فعال على الجهاز العصبي المحيطي والأجهزة الطرفية (الشكل 2). بعد حقن AAV، وقد لوحظ تنبيغ العقد الجذرية الظهرية والكبد والقلب والعضلات والهيكل العظمي والرئة، والضفيرة العضلية المعوية للامعاء 1،3،6،7،15. التنبيغ واسع النطاق للجهاز العصبي المركزي ومحيط يجعل هذه الطريقة من الحقن مثالية للأمراض التي تتطلب التعبير العالميالتحوير، مثل مرض 16 وغيرها من أمراض التخزين الليزوزومية غوشر 17،18، مرض باتن وlipofuscinoses سيرويد الخلايا العصبية ذات الصلة، 19 ومتلازمة بارديه-بيدل، وهو اضطراب وراثي المتعددة للمع ظهور الأعراض التي تحدث في مرحلة الطفولة المبكرة (20). وينبغي أيضا النظر الحقن داخل الأوعية الدموية في الفئران حديثي الولادة كوسيلة رواية النمذجة أمراض الأطفال على نطاق المنظومة. وقد ترجمت هذه التقنية لنماذج حيوانية أكبر 5،21، والحقن داخل الأوعية موجود بالفعل كوسيلة مقبولة سريريا لتقديم العلاجات.
يصف البروتوكول الحالي وسيلة بسيطة وفعالة لتقديم وكلاء لالفئران حديثي الولادة عن طريق الوريد الصدغي السطحي وجه في موعد أقصاه يوم بعد الولادة 2. حقن يمكن أن يتم الانتهاء من واحدة، يمارس الفرد وجيد التحمل من قبل كل من الجراء والسدود. الجراء تجربة الحد الأدنى من الشدة والتعافي بسرعة. الاهميهTLY، وحقن الناجح يؤدي إلى تسليم العالمي للعامل تدار. هذا البروتوكول هو المناسب لتسليم ناقلات فيروسية، وكلاء الصيدلانية أو خلايا الفئران حديثي الولادة.
تسليم داخل الأوعية الدموية وكلاء لالجهاز العصبي المركزي أو في جميع أنحاء الجسم أمر صعب في نماذج الفئران حديثي الولادة من الأمراض. بروتوكول صفها هو، طريقة سريعة نسبيا غير الغازية لإدارة حلول عن طريق الوريد في الفئران حديثي الولادة مع متطلبات الحد الأدنى من المعدات. ع…
The authors have nothing to disclose.
الكتاب نود أن نعترف NINDS، FightSMA، وأسر SMA للدعم المالي. ويدعم سيجل من خلال التدريب NINDS منحة # 5T32NS077984-02.
Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Thinpro Insulin Syringe | Terumo | SS30M3009 | 3/10cc, 3/8" needle, 30G, 1 per mouse |
Evans Blue Dye | Sigma-Aldrich | E2129 | Dilute to 1% with 1X Phosphate Buffered Saline |
Cotton Tipped Applicators | Fisher Scientific | 23-400-101 | |
Fiber Optic Light Source | Fisher Scientific | 12-562-36 | |
Dissecting Microscope |