नवजात चूहों में नसों में इंजेक्शन
Summary
बाल रोग के पशु मॉडल जल्दी शुरू होने और आक्रामक रोग प्रगति अनुभव कर सकते हैं. चिकित्सकीय युवा माउस मॉडल के लिए प्रासंगिक चिकित्सा वितरण तकनीकी रूप से कठिन हो सकता है. इस प्रोटोकॉल जीवन के पहले दो प्रसव के बाद दिन के भीतर नवजात चूहों के लिए एक गैर-आक्रामक नसों में इंजेक्शन विधि का वर्णन है.
Abstract
नसों में इंजेक्शन चिकित्सा देने के लिए एक चिकित्सकीय लागू ढंग है. वयस्क कृन्तकों और बड़े जानवरों के लिए, नसों में इंजेक्शन तकनीकी रूप से संभव है और दिनचर्या हैं. हालांकि, कुछ माउस मॉडल संभावित उपचारों के प्रशासन के लिए मुश्किल बना देता है कि एक तेजी से प्रगति के साथ रोग के प्रारंभिक शुरुआत हो सकती है. लौकिक (या चेहरे) नस सिर्फ चूहों में कान कली को पूर्वकाल और एक विदारक माइक्रोस्कोप का उपयोग सिर के दोनों तरफ जन्म के बाद स्पष्ट रूप से पहले दो दिनों के लिए दिख रहा है है. इस विंडो के दौरान, लौकिक नस 50 μl अप करने के लिए संस्करणों के साथ इंजेक्शन जा सकता है. इंजेक्शन सुरक्षित और अच्छी तरह से पिल्ले और बांधों दोनों द्वारा सहन किया है. एक ठेठ इंजेक्शन प्रक्रिया पिल्ला घर पिंजरे में लौट रहा है, जिसके बाद 1-2 मिनट के भीतर पूरा हो गया है. तीसरा प्रसव के बाद दिन तक नस कल्पना करना मुश्किल है और इंजेक्शन प्रक्रिया तकनीकी रूप से अविश्वसनीय हो जाता है. इस तकनीक एडिनो से जुड़े वायरस (एएवी) vect की डिलीवरी के लिए इस्तेमाल किया गया हैबदले में चुना वायरल सीरोटाइप के आधार पर पशु के जीवन के लिए लगभग शरीर चौड़ा, स्थिर transgene अभिव्यक्ति प्रदान कर सकते हैं, जो अन्य रैंकों,.
Introduction
बाल रोग का murine मॉडल में केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) को चिकित्सा विज्ञान की डिलिवरी एक चुनौती बनी हुई है. मॉडल नवजात शिशु रोग राज्यों सीधे सीएनएस के भीतर उपयुक्त संरचनाओं में डालने के लिए मुश्किल हो सकता है इसलिए ख़राब और विकासात्मक अपरिपक्व, और कर रहे हैं कि चूहों. चिकित्सीय एजेंटों की intravascular इंजेक्शन सीएनएस 1-5 और 3,5-9 रेटिना सहित पूरे शरीर को कोशिकाओं, दवाओं, या वायरल वैक्टर वितरित करने के लिए एक गैर इनवेसिव, अच्छी तरह सहन विधि है. पिछले प्रकाशनों एक विच्छेदन खुर्दबीन 11,12 के बिना, एक transilluminator 10,11 का उपयोग अस्थायी चेहरे नस इंजेक्शन का वर्णन, या दो व्यक्तियों की आवश्यकता होती है 10 इंजेक्षन. एक ही व्यक्ति पिल्ले इंजेक्षन कर सकते हैं, और प्रकाश स्रोत अस्थायी नस, पिल्ला छू एक निश्चित सतह पर सर्जिकल टेप के लिए की जरूरत है या एक पिल्ला के लगाव को नष्ट नहीं है देखने के लिए क्योंकि इस प्रोटोकॉल में वर्णित इंजेक्शन तकनीक फायदेमंद हैएक transilluminator 11 के रूप में इस तरह के. चूहों में एडिनो जुड़े वायरल वेक्टर सीरोटाइप 9 (AAV9) की डिलिवरी मस्तिष्क और रीढ़ की हड्डी (चित्रा 1) भर में न्यूरॉन्स और astrocytes में मजबूत अभिव्यक्ति पैदा करता है. सतही अस्थायी चेहरे की नस में वायरल वैक्टर intravascular वितरण मज़बूती से बाल neuromuscular विकार रीढ़ की हड्डी में पेशी शोष (SMA) के 2,4,13,14 के इलाज के लिए नवजात चूहों में विभिन्न अध्ययनों में इस्तेमाल किया और अंततः इलाज चूहों की उम्र बढ़ा दी गई है.
नवजात चूहों के intravascular इंजेक्शन भी प्रभावी ढंग से परिधीय तंत्रिका तंत्र और परिधीय अंगों (चित्रा 2) लक्ष्य. एएवी के इंजेक्शन के बाद, पृष्ठीय रूट ganglia, जिगर, दिल, कंकाल की मांसपेशी, फेफड़े और पेट के myenteric जाल के पारगमन 1,3,6,7,15 देखा गया है. सीएनएस और परिधि के व्यापक पारगमन की वैश्विक अभिव्यक्ति की आवश्यकता के रोगों के लिए इंजेक्शन आदर्श की इस पद्धति में आता हैऐसे Gaucher रोग 16 और अन्य लाइसोसोमल भंडारण रोगों 17,18, बैटन रोग और संबंधित न्यूरोनल ceroid lipofuscinoses, 19 और Bardet-Biedl सिंड्रोम, बचपन 20 में होने वाली लक्षणों की शुरुआत के साथ एक आनुवंशिक multisystem विकार के रूप में एक transgene,. नवजात चूहों में intravascular इंजेक्शन भी मॉडलिंग प्रणाली चौड़ा बाल रोगों के एक उपन्यास विधि के रूप में माना जाना चाहिए. इस तकनीक को बड़े पशु मॉडल 5,21 करने के लिए अनुवाद किया गया है और intravascular इंजेक्शन पहले से ही चिकित्सा विज्ञान पहुंचाने की एक चिकित्सकीय स्वीकार्य पद्धति के रूप में मौजूद है.
मौजूदा प्रोटोकॉल प्रसव के बाद दिन 2. इंजेक्शन से नहीं बाद में सतही अस्थायी चेहरे नस के माध्यम से नवजात चूहों के लिए एजेंट पहुंचाने का एक सरल, कुशल विधि का वर्णन एक एकल द्वारा पूरा किया जा सकता है, व्यक्तिगत अभ्यास किया है और अच्छी तरह से पिल्ले और बांधों दोनों द्वारा सहन किया है. पिल्ले न्यूनतम संकट का अनुभव है और जल्दी से ठीक हो. Importantly, सफल इंजेक्शन प्रशासित एजेंट के वैश्विक वितरण में परिणाम होगा. इस प्रोटोकॉल वायरल वैक्टर, नवजात चूहों को दवा एजेंटों या कोशिकाओं के वितरण के लिए उपयुक्त है.
Protocol
Representative Results
Discussion
सीएनएस को या पूरे शरीर में एजेंटों की intravascular प्रसव रोग के नवजात murine मॉडल में मुश्किल है. वर्णित प्रोटोकॉल नसों के न्यूनतम उपकरणों की आवश्यकताओं के साथ नवजात चूहों में समाधान के लिए प्रशासन के लिए एक त्वर?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखकों वित्तीय सहायता के लिए SMA के NINDS, FightSMA, और परिवारों को स्वीकार करना चाहते हैं. SEGL NINDS प्रशिक्षण अनुदान # 5T32NS077984-02 द्वारा समर्थित है.
Materials
| Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Thinpro Insulin Syringe | Terumo | SS30M3009 | 3/10cc, 3/8" needle, 30G, 1 per mouse |
| Evans Blue Dye | Sigma-Aldrich | E2129 | Dilute to 1% with 1X Phosphate Buffered Saline |
| Cotton Tipped Applicators | Fisher Scientific | 23-400-101 | |
| Fiber Optic Light Source | Fisher Scientific | 12-562-36 | |
| Dissecting Microscope |
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