小鼠骨髓破骨细胞的推导
Summary
破骨细胞是体内的主要骨吸收细胞。一个分离的破骨细胞中大量的能力已经导致破骨细胞生物学的理解显著进步。在这个协议中，我们描述了一种用于分离，培养和定量破骨细胞的体外活性。
Abstract
破骨细胞是从骨髓中的单核细胞/巨噬细胞系衍生的高度特化的细胞。其重吸收两者的有机和无机骨基质的独特能力意味着它们在调节骨骼重塑中发挥关键作用。在一起，成骨细胞和破骨细胞是负责动态耦合的过程，涉及既骨吸收和骨形成的共同行动，以维持健康和疾病过程中的正常骨架。
如在体内主要骨吸收细胞，改变破骨细胞的分化或功能可能导致在体内产生深远的影响。具有改变破骨细胞功能有关的疾病的范围可以在严重程度从致命新生儿疾病由于不能形成对造血骨髓的空间，更通常观察到的疾病，如骨质疏松症，其中过度的破骨细胞骨吸收易患断裂形成。
ENT“>一个孤立的破骨细胞的数量高在体外的能力也允许在骨重建周期的理解显著的进展，并铺平了道路，以应对这些疾病的新的治疗策略的发现。在这里，我们描述了一个协议，分离培养小鼠骨髓，将产生大量的破骨细胞的破骨细胞。
Introduction
骨重建是动态的，并且涉及骨形成与骨吸收1的耦合。这个严格调节的过程是负责维持正常的体内平衡中的骨架，并响应于损伤和疾病。
破骨细胞是独特的，多核细胞，其能够再吸收二者的有机和无机骨基质。破骨细胞是来源于骨髓的2-5的单核细胞/巨噬细胞系。在破骨细胞的功能，或形成的异常可导致多种临床病症，包括骨质疏松症象常见的情况的。
在体外产生的破骨细胞的能力已经允许在我们的骨生物学6的理解显著进步。其结果是，新的治疗剂的新兴治疗破骨细胞有关的疾病，这是负责显著发病率和死亡率7 </sUP>。稳态维持骨量和骨强度需要骨形成的成骨细胞和骨吸收破骨细胞8,9的一致行动人。骨骼平衡被改变中的一些疾病，包括绝经后骨质疏松症，其中增加的破骨细胞活性导致骨质量和密度10的致病损失。随着人类疾病的转基因小鼠模型的可用性，有更多的机会来破译人骨疾病11-13的破骨细胞的作用。
对破骨细胞的培养技术大量协议，出现在文献中，有许多变型描述9,12,14。性和同事描述了类似的方法，以如下所述，在小鼠骨髓细胞中破骨测定中对它们的描述的协议。然而，释放以下长骨收获骨髓细胞，性等冲洗骨髓腔的α-MEM完全培养基14。Catalfamo检查高血糖对破骨细胞功能的影响，并描述了其中的所有细胞动员骨髓潮红的方法进行培养24小时，在该点处的非贴壁细胞被丢弃12，一种技术也可用于由Boyle 等人的9，这些先前公布的协议必要冲洗骨髓，一个繁琐的实践中，其中还引入了针刺伤害和有价值的骨髓损失的风险，因为一个人必须切骨的两端部的做法。的协议中，我们描述了，实现了使用研钵和研杵的分离的破骨细胞，其类似于由Weischenfeldt 等人所述的巨噬细胞分离的方法。15
我们的经验，但是，是使用在破骨细胞的生产方面先前公布的技术的结果变量的结果即破骨细胞的分离和体外培养，常常导致在无法培养的破骨细胞。因此，我们设计了一个协议，该协议允许对小鼠骨髓的一贯隔离，以产生大量的体外多核破骨细胞，具有细胞最初镀形成的巨噬细胞和破骨细胞随后的70-80％的产率约，在存在破骨细胞诱导培养基。
Protocol
Representative Results
Discussion
一个很容易分离，培养大量的破骨细胞在体外的能力一直负责帮助推动骨生物学和破骨细胞介导的疾病的认识。这是RANKL的识别，导致此，当它最近被鉴定为破骨细胞的形成，分化和存活16-18的主要调节剂。
据我们的经验是， 在体外培养骨髓破骨细胞在很大程度上依赖于接种密度。我们观察到，该协议得到的破骨细胞的失败通常是由于一个不理想的接种?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们承认美国国立卫生研究院拨款R01 DE021683，R01 DE019434，U01 HL099776，橡树基金会和Hagey实验室小儿再生医学的支持。
Materials
| Name of the Material/Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| MEM, no glutamine, no phenol red | Gibco | 51200-038 | |
| M-CSF, recombinant mouse | Gibco | PMC2044 | |
| Recombinant Mouse TRANCE/RANK L/TNFSF11 (E. coli expressed) | R&D Systems | 462-TEC-010 | |
| Prostaglandin E2 | Sigma-Aldrich | ||
| Histopaque-1077 | Sigma-Aldrich | 10771 | |
| Acid Phosphatase, Lekocyte (TRAP) kit | Sigma-Aldrich | 387A | |
| Osteoassay bone resorption plates, 24 well plates | Corning Life Sciences | 3987 |
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