Полный Тимэктомия у крыс взрослых с неинвазивной интубации трахеи
Summary
Rodent thymectomy is a valuable technique in immunological research. Here, a protocol for complete thymectomy in adult rats using a mini-sternotomy along with non-invasive intubation and positive pressure ventilation to minimize perioperative morbidity and mortality is described.
Abstract
Тимэктомия у новорожденных грызунов солидной и надежной порядок иммунологических исследований. Тем не менее, у взрослых крыс, осложнения кровоизлияния и пневмоторакса из плевральной нарушения могут привести к значительной смертности. Этот протокол является простым способом крыс тимэктомии, который использует мини-Стернотомия и эндотрахеальной интубации. Интубация осуществляется с неинвазивным и легко воспроизводимый метод и позволяет для вентиляции с положительным давлением, чтобы предотвратить пневмоторакс и контролируемого дыхательных путей, что позволяет достаточно времени для тщательного вилочковой вскрытия, чтобы минимизировать плевральной нарушения. 1,5 см грудины разрез уменьшается контакт с средостения сосудов и плевры, в то же время обеспечивая полную визуализацию тимуса. После облучения средостения, тимус удаляется тупым под увеличением. Плевральной полости затем герметизируют путем закрытия шва из предварительно трахеи мышц с последующим применением хирургического клея.грудной клетки затем закрывается закрытия шва грудины, с последующим закрытием шва кожи. Все thymectomies были полными, о чем свидетельствует иммуногистохимического (IHC) окрашиванием медиастинальной ткани, и отсутствие наивных Т-клеток с помощью проточной цитометрии, и процедура была выживаемость 96%. Этот метод подходит, если полная тимэктомия с минимальными осложнениями требуется для дальнейших иммунологических исследований в безтимусных взрослых крыс.
Introduction
С начала 1960-х годов, тимус был признан за его важной роли в развитии центральной иммунологической толерантности. Грызунов тимэктомия оказался процедурой, необходимой для определения роли тимуса в лимфоцитов дифференциации, аутотолерантности и immunotolerance в условиях трансплантации аллотрансплантата и метастазирования опухоли. Удаление крысы тимуса позволяет исследований, связанных с истощением Т-клеток или приемного передачу определенных групп населения Т-клеток без повторного появления родных наивных Т-клеток.
Thymectomies неонатальной грызунов может быть достигнуто методом всасывания с надежными результатами 1. У взрослых крыс, этот метод связан с приблизительной смертности на 20% и часто приводит к неполному тимэктомии 2. Последовательно достичь полного тимэктомия у взрослых крыс, открытая экспозиция средостения через срединную стернотомию требуется. Тем не менее, этотпроцедура, связанная с осложнениями, которые включают в себя повреждение трахеи, кровоизлияния и пневмоторакс, ведущие к общей смертности в пределах от 1,5 – 6% 2- 4.
За последние два десятилетия совершенствования методов Тимэктомия снизились послеоперационные осложнения и улучшению показателей выживаемости. Интубация трахеи позволяет вентиляции с положительным давлением уменьшилось пневмоторакс ставки 5. Методы интубации описано ранее диапазон от открытого воздействия трахеи менее инвазивных методов, использующих прямой визуализации голосовых связок. Осложнения, связанные с процедурой интубации включают трахеи травмы, вокальный разрыв мозга, непреднамеренное интубация пищевода и кровотечение в результате пункции сердца или рваная рана верхней полой вены. Кроме того, близкое расположение нижних долей тимуса в плевральной подкладке может привести к пневмоторакс.
Здесь мы опишем техникутимэктомия через минимально инвазивной 2 см разрез кожи после простой метод интубации трахеи с использованием притупляются класса ангиокатетера и чрескожной освещение трахеи. Тимэктомия включает в себя 1,5 см стернотомию и закрытие трехслойную с хирургической нанесением клея для герметизации средостения и свести к минимуму случаи кровоизлияния и респираторных осложнений. Этот метод надежно приводит к полному тимэктомии о чем свидетельствует исчезновение CD4 + и CD8 + наивных Т-клеток следующим тимэктомии и отсутствие тимуса ткани на окрашивание IHC. Оперативные раз и пригородных процессуальное смертность сведена к минимуму.
Protocol
Representative Results
Discussion
Настоящий Протокол для полного тимэктомии обеспечивает минимально инвазивный подход с трехслойной закрытия разреза с хирургическим нанесением клея предназначена для сведения к минимуму осложнения. Полное удаление тимуса была продемонстрирована потери наивных Т-клеток и IHC окрашив?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work was supported by AI101263 from the National Institutes of Health (T.V.B), and by a grant from The Hartwell Foundation (M.L.M). M.L.M. is a member of the Duke Comprehensive Cancer Center.
Materials
| Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| 2" 14-gauge angiocatheter | |||
| Operating microscope | Zeiss | ||
| Warming pad | |||
| Heart rate and blood oxygenation monitor for rodents with foot sensors | Harvard Apparatus | ST1 72-8010, ST1 72-8098 (Rat foot sensor) | |
| Intubation apparatus (plastic with metal bar at the top) | See Figure 2 | ||
| Small animal anesthesia system with induction box, isoflurane tank and O2 tank | Harvard Apparatus | ST1 72-6420 | |
| Small animal ventilator with tubing | CWE | 12-02000 (ventilator)and 12-04000 (external valve assembly for mice/rats) | |
| High-intensity Fiber-Optic Illuminator | Dolan Jenner | EEG 2823M | |
| Student standard pattern forceps | Fine Science Tools | 91100-16 | |
| Fine straight scissors | Fine Science Tools | 14060-09 | |
| Blunt-tipped Shea scissors | Fine Science Tools | 14105-12 | |
| Small Alm retractor (for sternum) | Fine Science Tools | 17008-07 | |
| Blunt Graefe forceps | Fine Science Tools | 11050-10 | |
| Fine Dumont forceps | Fine Science Tools | 11254-20 | |
| 5-0 Maxon sutures | Ethicon | ||
| 4-0 Silk sutures (with cutting needle) | Ethicon | ||
| 6-0 Nylon suture | Ethicon | ||
| Cyanoacrylate glue (Endermil) | |||
| Lubrication gel | Akorn Animal Health | NDC 17478-162-35 |
References
- Hard, G. C. Thymectomy in the neonatal rat. Lab. Anim. 9 (2), 105-110 (1975).
- Kobayashi, E., et al. A technique for complete thymectomy in adult rats. J. Immunol. Methods. 1759 (94), 0 (1994).
- Delrivière, L., Gibbs, P., Kobayashi, E., Kamada, N., Gianello, P. New technique of complete thymectomy in adult rats without tracheal intubation. Microsurgery. 18 (1), 6-8 (1998).
- Walker, K. G., Jacques, B. C., Tweedle, J. R., Bradley, J. A. A simpler technique for open thymectomy in adult rats. J. Immunol. Methods. 175 (1), 141 (1994).
- Na, N., Zhao, D., Huang, Z., Hong, L. An improved method for rat intubation and thymectomy. Chin. Med. J. (Engl). 124 (17), 2723-2727 (2011).
- Kastl, S., et al. Simplification of rat intubation on inclined metal plate). Adv. Physiol. Educ. 28 (1-4), 29-34 (2004).
- Weksler, B., Ng, B., Lenert, J., Burt, M. A simplified method for endotracheal intubation in the rat. J. Appl. Physiol. 76 (4), 1823-1825 (1994).
- Jou, I. M., et al. Simplified rat intubation using a new oropharyngeal intubation wedge. J. Appl. Physiol. 89 (5), 1766-1770 (2000).
- Rivard, A. L., et al. Rat intubation and ventilation for surgical research. J. Invest. Surg. 19 (4), 267-274 (2006).
- Zhao, D., et al. A model of isolated, vascular whole thymus transplantation in nude rats. Transplant Proc. 44 (5), 1394-1398 (2012).
- AbuAttieh, M., et al. Affinity maturation of antibodies requires integrity of the adult thymus. Eur. J. Immunol. 42 (2), 500-510 (2012).
- Reeves, J. P., Reeves, P. A., Chin, L. T. Survival surgery: removal of the spleen or thymus. Curr. Protoc. Immunol. 1 (Unit 1.10), (2001).
- Siemionow, M., Izycki, D., Ozer, K., Ozmen, S., Klimczak, A. Role of thymus in operational tolerance induction in limb allograft transplant model. Transplantation. 81 (11), 1568-1576 (2006).
- Satoh, E., et al. Immunosuppressive effect of long-term drainage of thoracic duct on immunological memory in adult thymectomized rats. Transplant. Proc. 37 (4), 1947-1948 (2005).
- Groen, H., Klatter, F., Pater, J., Nieuwenhuis, P., Rozing, J. Temporary, but Essential Requirement of CD8+ T Cells Early in the Pathogenesis of Diabetes in BB Rats as Revealed by Thymectomy and CD8 Depletion. Clin. Dev. Immunol. 10 (2-4), 141-151 (2003).
