İzolasyon ve Kemirgen Aort eksizyonu; Kardiyovasküler Hastalığı Çalışmasında Çok Yönlü Tekniği
Summary
Pathology of the aorta can lead to severe morbidity and mortality, therefore research of disease progression and potential therapies is warranted. Here, we present a protocol to isolate and excise the murine aorta to aid researchers in their investigation of cardiovascular disease.
Abstract
Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated blood is the aorta. The aorta may become affected in diseases such as atherosclerosis and aneurysm. Researchers investigating these diseases would benefit from direct observation of the aorta to characterize disease progression as well as to evaluate efficacy of potential therapeutics. The goal of this protocol is to describe proper isolation and excision of the aorta to aid investigators researching cardiovascular disease. Isolation and excision of the aorta allows investigators to look at gross morphometric changes as wells as allowing them to preserve and stain the tissue to look at histologic changes if desired. The aorta may be used for molecular studies to evaluate protein and gene expression to discover targets of interest and mechanisms of action. This technique is superior to imaging modalities as they have inherent limitations in technology and cost. Additionally, primary isolated cells from a freshly isolated and excised aorta can allowing researchers to perform further in situ and in vitro assays. The isolation and excision of the aorta has the limitation of having to sacrifice the animal however, in this case the benefits outweigh the harm as it is the most versatile technique in the study of aortic disease.
Introduction
Aort oksijenli kan ve vücut burada da benzer kısımlar ile vücut temin kardiyovasküler fonksiyon çok önemli bir rol oynar, hastalığa karşı hassastır. Ortak aort hastalıkları diyet, sigara ve sedanter yaşam tarzı 1 olmak üzere genetik ve çevresel faktörlerin sonuçları ateroskleroz ve anevrizma içerir. Ateroskleroz, tipik olarak kronik hiperlipidemi 2 olan hastalarda bulunan aort duvarının bir kalsiyum ve lipit bazlı plak birikmesidir. Anevrizma sonuçta 3 yırtılmasına neden olabilecek bir artış çapı ardından aorta ve damar duvarının incelme yapısal elemanların bozulma ile karakterize edilir.
Hayvan modelleri hastalık ve potansiyel tedavilerin etkinliğinin mekanizmasını incelemek için kullanılan önemli araçlardır. Kardiyovasküler araştırmalarda yaygın olarak kullanılan hayvan modelleri, özellikle vasküler ve metabolik bozuklukların araştırılması aratmakBöyle Apolipoprotein E gen nakavt ve düşük yoğunluklu lipoprotein reseptör gen nakavt fareler 4 olarak lipid düzeylerini değiştirmek için genetiği değiştirilmiş fareler vardır. hastalık ve tedavinin etkinliğinin mekanizmasının değerlendirilmesi için yöntemlerin çoğunluğu, aort izole edilmesini ve çıkarılmasını içerir.
Aort lokalize ve izole edildikten sonra, morfometrik analizi, anevrizma varlığında, tipik olarak çap 5 daha büyük bir% 50 artış olarak tarif edildiği gibi belirlenebilir. Yerinde analiz gerekli işlemi tamamlandıktan sonra, aort, ileri analiz için çıkartılır. Bir eksize edilen aort örneğin protein ve / veya gen sentezleme tahlilleri ya da moleküler çalışmalar yapmak için dondurulmuş flaş olabilir% 4 paraformaldehid ile sabitlenmiş ve sonra sarılır, bölümlere ayrılır ve histopatolojik analiz için boyanmıştır. Aort histolojik analiz gibi yapısal bozulma, plak oluşumu ve lökositlerin sızması gibi aort hastalığı ortak özellikler göstermektedir <sup> 6,7. Buna ek olarak, bir eksize edilen orta damar alındı, in vitro çalışmalar 7 çok çeşitli kullanılabilir endotel ve düz kas hücreleri dahil olmak üzere birincil hücre hatları izole etmek için kullanılabilir.
Şu anda, aort hastalığı bu derinlemesine karakterizasyonu sağlamak yanı sıra kardiyovasküler hastalık çalışma araçları ile araştırmacılara sunmak için başka yöntemler vardır. Manyetik rezonans görüntüleme, bilgisayarlı tomografi ve ultrasonografi gibi görüntüleme yöntemleri ancak bu küçük hayvanlarda zor ve yeterli teknolojisine sahip bir aygıtı elde 8 pahalı, morfolojik aorta değerlendirmek için yakın yöntemlerdir. Ölümsüzleşmiş hücre hatları, ancak bu hücrelerin yapay doğa hücre yaşam döngüsü ve apoptoz 9 üzerindeki etkileri araştırmakla sınırlayıcı hastalık ve tedavilerin etkinliğinin potansiyel mekanizmaları, araştırmak için satın alınabilir.
genel amacıBu yazının kardiyovasküler hastalık soruşturma kemirgen aorta steril izolasyon ve eksizyonu göstermektir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Aortic disease can lead to significant systemic pathology and possibly death in severe cases. Treatment options are currently limited therefore continued research in the field is necessary10. Murine models are ideal to further study disease progression and potentially therapeutic options4. Therefore, the successful completion of the method described in this manuscript will provide investigators with the tools to measure disease progression and drug efficacy.
This techniq…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar herhangi bildirimleri var.
Materials
| Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Isoflurane | Med-Vet International | #RXISO-250 | |
| 70% Ethanol | Fisher | 07-678-001 | |
| Phosphate buffered saline | Sigma Aldrich | P5368-10PAK | |
| Surgical Tape | 3M | 1527-1 | |
| Sterile Gauze | Dukal Corporations | 1312 | |
| 25 Gauge Needle | BD | 305122 | |
| 10ml Syringe | BD | 309604 |
References
- Go, A. S., et al. Heart disease and stroke statistics–2014 update: a report from the American Heart Association. Circulation. 129 (3), 28-292 (2014).
- Ross, R., Harker, L. Hyperlipidemia and atherosclerosis. Science. 193 (4258), 1094-1100 (1976).
- Clouse, W. D., et al. Acute aortic dissection: population-based incidence compared with degenerative aortic aneurysm rupture. Mayo Clin Proc. 79 (2), 176-180 (2004).
- Daugherty, A., Cassis, L. A. Mouse models of abdominal aortic aneurysms. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24 (3), 429-434 (2004).
- Pleumeekers, H. J., et al. Aneurysms of the abdominal aorta in older adults. The Rotterdam Study. Am J Epidemiol. 142 (12), 1291-1299 (1995).
- Brophy, C. M., Reilly, J. M., Smit, G. J., Tilson, M. D. The role of inflammation in nonspecific abdominal aortic aneurysm disease. Ann Vasc Surg. 5 (3), 229-233 (1991).
- Ray, J. L., Leach, R., Herbert, J. M., Benson, M. Isolation of vascular smooth muscle cells from a single murine aorta. Methods Cell Sci. 23 (4), 185-188 (2001).
- Weiss, R. G. Imaging the murine cardiovascular system with magnetic resonance. Circ Res. 88 (6), 550-551 (2001).
- Graham, E. L., Balla, C., Franchino, H., Melman, Y., del Monte, F., Das, S. Isolation culture, and functional characterization of adult mouse cardiomyoctyes. J Vis Exp. (79), 50289 (2013).
- Wassef, M., Upchurch, G. R., Kuivaniemi, H., Thompson, R. W., Tilson, M. D. 3. r. d. Challenges and opportunities in abdominal aortic aneurysm research. J Vasc Surg. 45 (1), 192-198 (2007).
