마이크로 컴퓨터 단층 촬영과 누드 마우스에 인간의 지방 주입의 생존 능력의 평가

요약

지방 이식은 연조직 결핍을 재건하기 위한 필수 기술입니다. 그러나 이는 다양한 이식 생존을 특징으로 하는 예측할 수 없는 절차로 남아 있습니다. 우리의 목표는 지방 이식 준비 및 전달의 서로 다른 기술 간의 부피 유지를 비교하기 위해 새로운 이미징 방법을 활용하는 마우스 모델을 고안하는 것이었습니다.

초록

Lipotransfer는 몸 전체의 연부 조직 결손의 치료를 위해 외과 의사의 필수품 전반에 중요한 도구입니다. 지방은, 쉽게 사용할으로 쉽게 구할 수있는 저렴하고, 본질적으로 생체 적합성 그대로 이상적인 부드러운 조직 필러입니다. ⁽¹⁾ 그러나, 그 싹 트는 인기에도 불구하고, 지방 이식술을 10에서 어디까지 공개 유지율과, 예측할 수없는 결과가 변수 이식 생존에 의해 방해된다 -80 %. ^1-3

지방에 조사 래프팅을 촉진하기 위하여, 우리는 따라서 주입 된 지방 부피 보존 실시간 분석을 허용 동물 모델을 개발 하였다. 간단히, 작은 상처가 CD-1 누드 마우스의 두피에서 만든 가공 리포 애스 퍼 레이트의 200 ~ 400 μL은 두개골 위에 배치됩니다. 두피 때문에 에이즈 두 개관에서 제공하는 훌륭한 배경의 대비로 인해 고유의 피하 지방의 부재로받는 사이트로 선정하고,분석 과정. 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 (마이크로 CT)는베이스 라인에서 이식 2 주에 한 번씩 스캔하는 데 사용됩니다. CT 이미지는 재구성 및 이미징 소프트웨어는 그래프트 양을 정량화하는 데 사용된다.

전통적으로, 생체 외 기술은 실제 측정에 의해 그래프트 중량과 체적의 단지 하나의 평가를 제공하기 위해 연구 동물을 안락사 필요로 한 지방 그래프트 량을 평가. 생화학 적 및 조직 학적 비교는 마찬가지로 안락사 할 수있는 연구의 동물이 필요했다. 설명이 영상 법은 연구 동물을 희생하지 않고도 시각화 객관적 초기 그 래프팅 후에 여러 시점에서 볼륨을 정량화 이점을 제공한다. 이식 기술은 더 큰 위험과 지방 피부 괴사로 주입 될 수 이식편의 크기에 의해 제한된다. 이 방법은 지방 이식 가능성 및 볼륨 유지를 평가하는 모든 연구를위한 유틸리티를 가지고있다. 그것은 특히 providi에 적합하다지방 이식의 시각적 표현 겨와 시간에 따른 볼륨의 변화를 다음과 같습니다.

서론

연조직 결손은 외상, 종양 절제, 노화, 선천적 기형 등 다양한 원인으로 인해 발생합니다. 이는 환자를 쇠약하게 만들 수 있으며 재건 외과 의사에게 가장 흔하지만 어려운 문제 중 하나입니다. 연조직 결핍을 해결하기 위해 국소 및 자유 피판, 콜라겐 주사, 합성 필러와 같은 많은 방법이 존재합니다. ^4-8 그러나 1893년 Neuber가 처음 사용한 이래로 자가 지방 이식은 즉시 사용할 수 있고 수확이 쉽고 안전하며 자연적으로 호환되기 때문에 연조직 결핍을 복구하기 위한 황금 표준으로 남아 있습니다. ^1,2

호

이러한 장점에도 불구하고 자가 지방 이식편은 예측할 수 없고 가변적인 생존율로 어려움을 겪으며 시간이 지남에 따라 유지율이 10-80%에 이릅니다. ^1-3,9 이러한 예상되는 부피 및 대칭 손실을 설명하기 위해 외과의는 연조직 결손을 채울 때 종종 과도하게 교정하거나 여러 후속 절차를 수행해야 합니다.

혈관이 제대로 형성되지 않은 이식층은 이러한 조직 흡수에 부분적으로 책임이 있습니다. 또한, 이식편 생존율을 비교하기 위한 벤치마크 분석 방법이 없다는 점도 보고된 결과의 불일치에 기여할 수 있습니다. 이식편 부....

프로토콜

참고 : 실험 프로토콜과 지방 얻기위한 환자 동의서를 검토하고 스탠포드 대학의 임상 시험 심사위원회 (프로토콜 # 2188)에 의해 승인되었다. 모든 동물의 절차는 프로토콜 # 9999에서 실험 동물 관리 (APLAC)의 스탠포드 행정 패널에 의해 승인되었다. 모든 실험은 동물의 안전과 인도적인 치료 가이드 라인을 엄격하게 준수하여 실시 하였다.

1. 지방 수확

1. 콜맨 절차 ^17-19을 사용하여, 선택 과목 지방 흡입 수술을받은 건강한 여성 환자의 복부, 옆구리, 및 / 또는 허벅지의 영역에서 인간 지방 조직을 구하십시오.
2. 이식에 대한 리포 애스 퍼 레이트를 처리하기 위해, 지방은 30 분 동안 정착 할 수 있도록하여 시작합니다.
3. 리포 애스 퍼 레이트는 일반적으로 아래에서 위쪽에 오일, 중간에 지방, 혈액으로, 세 개의 층으로 정착. 대기음 오일은 상부 층 및 하부 층을 피 버린다.
4. 더 남아 tumesc를 제거하려면엔트 유체 또는 세포 파편은 350 XG에 5 분, 4 ° C의 지방을 원심 분리하고, 바닥 수성 층을 대기음.
5. 20 %의 전달을 허용 오차, 그라프 필요한 지방의 양을 계산하고, 50ml의 원뿔형 (들)에 지방의 전송을....

결과

지방 이식은 점진적으로 8 주 스캔이 완료되면 주 (8) (그림 4A)로 62.2 %의 평균 생존율 ^(24)의 결과, 연구의 과정을 통해 볼륨 감소, 각 지방 이식은 하나의 조각으로 추출 하였다. Wilcoxan 순위 합 시험 중 마이크로 CT에 의해 얻어진 또는 물리적 질량으로부터 산출 이식 지방의 체적 측정의 차이를 비교하기 위해 사용 하였다. 유의 한 차이는 이러한 두 가지 방법 (양면 페이지 - 값 = 0.9362) 사이에서 발견되지 않았다. (그림 4B)

스캔 당 5 centiGy 다섯 스캔 시점으로, 각 마우스는 연구의 과정을 통해 25 centiGy 총보다는 더 이상 수신되지. 이과 일치, 마우스 중 어느 것도 피부 방사선 화상의 총 증거가 표시되지 않습니다.

토론

이 시점까지는 대부분의 연구는 지방 이식의 장기 생존을 정량화하는 비 영상 방식에 의존하지만, 이러한 방법은 연구 동물의 희생을 필요로하고 단 하나의 측정을 얻을 수있다. ^3,10-12 우리의 연구가 나타내는 마우스 모델에서 지방 이식편 생존의 대물 실시간 정량을 허용 개선 분석 방법.

이 과정에서 중요한이 그대로 면역 체계가 마우스를 사용하는 경우 발생할 수있는 이식 거부를 방지로 충분히 면역 마우스, 연구에 사용되는 것을 보장한다. 지방 무결성을 보존하는 것은 이식의 수확, 처리 및 배치 단계에서 중요하다. 전통적으로 허용 기준에 따라, 그 래프팅을위한 지방 흡입은 지방 흡입술 (SAL)에 의해 수득한다. 배치하는 동안 지방이 더 빨리 0.5 ㎖ / 초보다 안정된 유량으로 주입해야한다. 게이지 (14)는 캐 뉼러 I 그래프트 바람직하다NA 마우스, 그러나 더 큰 직경의 캐뉼라는 지방에 부상없이 사용될 수있다. 그들은 증가로 인해 전단 응력에 고장 지방의.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
SAL lipoaspirate
Centrifuge	Beckman Coulter, Inc., Pasadena, CA
50 ml 원뿔형 튜브	BD Biosciences, San Jose, CA
CD-1 누드 마우스 (Crl:CD1-Foxn1nu)	Charles River Laboratories, Inc., Wilmington, MA
Isoflurane	Henry Schein, Dublin, OH
2.5% Betadine	Purdue Pharma, L.P., Stamford, CT
70% 에탄올 용액	Gold Shield, Hayward, CA
1cc 루어락 주사기	BD Biosciences, San Jose, CA
14 게이지 캐뉼라	Shippert Medical, Centennial, CO
Forceps	Fine Science Tools, 하이델베르크, 독일
Tenotomy scissors	Fine Science Tools, 하이델베르크, 독일
6-0 나일론 봉합	Ethicon, Blue Ash, OH
Phosphate 완충 식염수	Gibco, Carlsbad, CA
micro-CT 스캐너	지멘스 헬스케어, 플레즌튼, 캘리포니아
팬텀	TriFoil Imaging, Northridge, CA
이미징 분석 소프트웨어	IRW, Siemens Healthcare, Pleasanton, CA
Scale	Mettler-Toledo International, Inc., 오하이오

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